苗药观音草提取物的体外抗氧化活性研究

徐 红，黄亚励，张奇龙，王 丽

（贵阳医学院化学教研室，贵州 贵阳550004）

观音草又名吉祥草，为百合科植物吉祥草［Reineckia carnea（Andr．）Kunth］的全草，是我国西南苗族地区常用的传统草药之一。在贵州、湖南、云南、广西、四川等苗族人口主要聚居区，苗药观音草应用广泛［1］，并在苗药产业化发展中扮演着重要的角色，但目前对观音草的应用主要集中在止咳、化痰、抗炎、降血糖等方面［2，3］，药理实验研究少有报道，因此，对其药用价值的深入研究和开发利用意义重大。

天然植物是很有潜力的天然抗氧化剂资源，具有高效、低毒等优点，且其提取物兼具抗氧化作用及清除体内自由基的作用［4］。作者在此以观音草为研究对象，利用不同极性的溶剂对观音草的乙醇提取物进行萃取，获得不同极性溶剂的提取物，并研究了不同提取物的体外抗氧化活性，拟为进一步探索其药理作用机理奠定基础。

1 实验

1．1 材料、试剂与仪器

观音草药材购于贵州安顺药材公司，经贵阳中医学院民族医药研究所鉴定为百合科植物观音草［Reineckia carnea（Andr．）Kunth］。

无水乙醇，95%乙醇，0．2×10－3mol·L－1邻苯三酚溶液，7．5×10－3mol·L－1水杨酸溶液，0．1%过氧化氢溶液，7．5×10－3mol·L－1硫酸亚铁铵溶液，Tris－HCl缓冲溶液。所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

TU－1800pc型紫外可见分光光度计，北京普析公司；PHS－3C型酸度计，上海大中分析仪器厂；RE－52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。

1．2 方法

1．2．1 观音草提取物溶液的制备

渗漉提取样品的制备［5］：将干燥的观音草粉碎，称取1．0kg，常温下以3．0L95%乙醇浸取7d，固液分离，将滤液旋蒸后得到总浸膏；悬浮于水中，按照极性从小到大的顺序，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，直至上清液近无色，将得到的各极性溶剂的萃取液旋蒸，得到不同极性溶剂提取浸膏，常温晾干。

分别以无水乙醇－水（体积比7∶3）配制浓度为2 mg·mL－1的观音草乙醇总提取物和不同极性溶剂提取物溶液。

1．2．2 羟基自由基（·OH）清除实验［6］

于10mL具塞比色管中依次加入7．5×10－3mol·L－1硫酸亚铁铵溶液1．0mL、7．5×10－3mol·L－1水杨酸溶液1．0mL、0．1%H2O2溶液1．0mL，再分别加入浓度为2mg·mL－1的观音草乙醇总提取物或不同极性溶剂提取物溶液1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，用蒸馏水定容，在37℃水浴中恒温反应1h后，于波长510nm处测定体系吸光度Ai。相同条件下，测定试剂空白的吸光度A0。按式（1）计算羟基自由基的清除率：

1．2．3 超氧阴离子自由基（·O2－ ）清除实验［7，8］

将10mL比色管、pH值8．2的Tris－HCl缓冲溶液、蒸馏水、0．2×10－3mol·L－1邻苯三酚溶液分别在25℃水浴中保温10min后，在10mL比色管中迅速加入 Tris－HCl缓冲溶液2．0mL、邻苯三酚溶液2．0mL，用蒸馏水定容，摇匀，立即于325nm处每隔30s测吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加值△A0。在相同条件下，分别加入浓度为2mg·mL－1的观音草乙醇总提取物溶液1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，按相同方法测定并计算△Ai。按式（2）计算超氧阴离子自由基的清除率：

2 结果与讨论

2．1 观音草提取物对羟基自由基的清除作用

分别测定观音草乙醇总提取物和不同极性溶剂提取物在体外对羟基自由基的清除率，结果见图1。

图1 不同观音草提取物对羟基自由基的清除率Fig．1 The scavenging rate of different extracts of Reineckia carnea （Andr．）Kunth to hydroxyl free radical

由图1可知，观音草乙醇总提取物和不同极性溶剂提取物对羟基自由基的清除率随提取物浓度的增大而升高；在相同浓度下，清除率大小顺序为：乙醇总提取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物，观音草乙醇总提取物对羟基自由基的清除作用最强，最高达到84．5%。

2．2 观音草乙醇总提取物对超氧阴离子自由基的清除作用

测定观音草乙醇总提取物在体外对超氧阴离子自由基的清除率，结果见图2。

由图2可知，观音草乙醇总提取物对超氧阴离子自由基的清除率随提取物浓度的增大不断升高，最高达到79．32%。

图2 观音草乙醇总提取物对超氧阴离子自由基的清除率Fig．2 The scavenging rate of total ethanol extract of ineckia carnea （Andr．）Kunth to super oxide anion free radical

2．3 讨论

观音草具有较强的抗氧化性，在不同极性溶剂提取物中，以乙酸乙酯提取物清除羟基自由基的能力最强，这与文献结果一致［5］；由于观音草中所含的皂苷、甾体化合物、皂苷元、萜类化合物等复合成分的协同作用，使乙醇总提取物的抗氧化效果比单一极性溶剂提取物的抗氧化效果更强。因此，总抗氧化能力的评价是抗氧化活性成分筛选的重要方式。

3 结论

采用羟基自由基体系和超氧阴离子自由基体系对观音草提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明，观音草提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除作用，其清除率随观音草提取物浓度的增大而升高，说明观音草具有较强的抗氧化活性，极可能是一种天然抗氧化剂的新资源。

［1］徐宏，杜江．苗药观音草在民间的使用及开发应用情况［J］．中国民族医药杂志，2006，12（5）：43－44．

［2］张元，杜江，许建阳，等．吉祥草总皂苷溶血、止咳、化痰、抗炎作用的研究［J］．武警医学，2006，17（4）：282－284．

［3］张元，胡一冰，王学勇，等．吉祥草总皂苷对非胰岛素依赖性糖尿病模型大鼠肌糖原、肝糖原及糖代谢的影响［J］．武警医学，2008，19（9）：818－820．

［4］谭仁祥，王剑文，徐琛．植物成分功能［M］．北京：科学出版社，2003：423．

［5］李晓波，冯欣艳，赵儒铭，等．基于Ce（Ⅳ）分光光度法的天然产物抗氧化活性的评价［J］．化学研究与应用，2012，24（1）：42－47．

［6］郭青枝，赵二劳，白建华．沙棘叶提取物抗氧化性能研究［J］．化学与生物工程，2008，25（3）：58－59．

［7］张京芳，王冬梅，周丽，等．香椿叶抗氧化物提取工艺优化与抗氧化活性分析［J］．农业机械学报，2007，38（8）：97－100．

［8］玄红专，桑青，麻建军．邻苯三酚自氧化法测定不同蜂产品抗氧化活性的研究［J］．食品科技，2008，33（4）：137－139．