养阴生肌膜黏膜刺激性及皮肤过敏性实验研究※

李喜香刘效栓张小华禚 君豆金彦刘军刚高小恒张 坚张芳丽马 岚郑立娟吴 迪

养阴生肌膜黏膜刺激性及皮肤过敏性实验研究※

李喜香1刘效栓1张小华1禚 君1豆金彦1刘军刚1高小恒1张 坚2张芳丽2马 岚2郑立娟2吴 迪2

目的通过对养阴生肌膜的安全性试验，为临床安全用药提供依据。方法将养阴生肌膜贴于家兔颚黏膜处接触4h，观察该膜对颚黏膜有无刺激性，并在光镜下观察其组织病理学变化；将养阴生肌散对豚鼠进行致敏和攻击，观察其对豚鼠有无皮肤过敏反应发生。结果养阴生肌膜对兔颚黏膜未引起刺激性反应，对豚鼠皮肤未产生过敏性反应。结论养阴生肌膜黏膜刺激性及皮肤过敏性、安全性指标基本符合规定要求。

养阴生肌膜；黏膜刺激性；皮肤过敏性

养阴生肌膜是将甘肃省中医院医院制剂养阴生肌散（甘药制字Z04000835）经剂型改革而得，主要用于治疗口腔溃疡[1-2]。养阴生肌膜为口腔内贴膜，因与口腔黏膜直接接触，膜内的某些成分有可能会通过口腔黏膜吸收进入血液循环，为了解其安全性，我院进行了养阴生肌膜的黏膜刺激性及皮肤过敏性试验。

1 实验材料

1.1 动物日本大耳白兔，雌雄各半，体重2kg左右，购自兰州生物制品研究所，实验动物使用许可证号：SCXK（甘）2012-0001。豚鼠，雌性，体重200～300g，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，实验动物使用许可证号：SCXK（甘）2010-0001。

1.2 药物及试剂养阴生肌膜，批号：20111224，由甘肃省中医院提供。2,4-二硝基氯苯，批号：97-05-01，上海试剂厂。新洁尔灭消毒液，批号：100901A，山东利尔康消毒科技有限公司。甲醛溶液（分析纯），批号：981110，西安化学试剂厂。氯化钠注射液，批号：020605482，西安京西双鹤药业有限公司。松香和石蜡，购自兰州科迈公司。戊巴比妥钠，批号：F20020915，中国医药集团上海化学试剂公司。

1.3 仪器FA1604S型电子天平，上海天平仪器厂产品。

1.4 方法

1.4.1 黏膜刺激性试验[1-6]取家兔4只，将左侧颚黏膜作为空白膜阴性对照组，右侧颚黏膜作为养阴生肌膜组。3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射将家兔麻醉，用0.2%新洁尔灭对家兔的口腔内、外进行消毒。将空白膜用蒸馏水浸湿后贴于家兔左侧颚黏膜上，将养阴生肌膜用蒸馏水浸湿后贴于家兔右侧颚黏膜上，保持2～4h。去掉贴膜，用棉签蘸取少许生理盐水清洗贴敷部位，观察该部位有无充血、水肿等刺激现象，连续观察24h。处死动物，剪取敷药部位及其周边少许未敷药部位组织，置于4%甲醛溶液中固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察组织病理学变化。根据局部黏膜刺激性反应分级标准进行评分，然后再根据局部黏膜刺激性评价标准进行强度等级评价。

1.4.2 皮肤过敏性试验[1-7]取豚鼠30只，随机分成生理盐水组、2,4-二硝基氯苯阳性对照组和养阴生肌膜组，每组10只。3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射将豚鼠麻醉，背部皮肤脱毛，脱毛后24h，选无皮损豚鼠进行试验。取0.2ml生理盐水滴在阴性对照组豚鼠右侧脱毛区；取1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml滴在阳性对照组豚鼠右侧脱毛区；将养阴生肌膜贴于豚鼠右侧脱毛区，并用无刺激性的胶带固定。各组持续致敏6h。分别于首次致敏后第7天和第14天，以同样方法重复致敏一次。在末次致敏后14d，分别将生理盐水0.2ml、0.1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml和养阴生肌膜贴（滴）在各组豚鼠左侧脱毛区进行攻击，6h后去掉受试药物，即刻开始观察接触受试药物的皮肤有无红斑、水肿等皮肤过敏现象出现，并于0h、24h、48h连续进行观察和记录。根据皮肤过敏反应评分标准进行皮肤过敏性评分，然后再根据皮肤过敏性试验致敏率分类表对受试药物进行皮肤过敏率评定。

2 结果

与贴膜前比较，贴膜后家兔颚黏膜无明显红斑和水肿。与空白膜组比较，养阴生肌膜组家兔颚黏膜未出现明显红斑和水肿。结果见表1～3。

表1 局部黏膜刺激性反应分级标准

表2 局部黏膜刺激性评价标准

表3 养阴生肌膜黏膜刺激性试验

病理切片显示，家兔1空白膜组和养阴生肌膜组黏膜上皮为角质的复层鳞状上皮，固有层为致密的结缔组织组成，其下黏膜下层为疏松结缔组织，内含小唾液腺（见一团浆液性腺体，系主为黏液性腺体）、较大的血管、淋巴管、神经及脂肪组织，并见多量横纹肌组织，以上各层组织均未见改变，形态如常，家兔1空白膜组与养阴生肌膜组之间未见差别。家兔2空白膜组、养阴生肌膜组；家兔3空白膜组、养阴生肌膜组；家兔4空白膜组、养阴生肌膜组病理切片情况与家兔1空白膜组、养阴生肌膜组相同（见图1～4）。

图1 家兔1与受试药物接触后组织黏膜病理变化（HE染色）（图A、B、C为空白膜组家兔黏膜组织切片，图D、E、F为养阴生肌膜组家兔黏膜组织切片）

图2 家兔2与受试药物接触后组织黏膜病理变化（HE染色）（图A、B、C为空白膜组家兔黏膜组织切片，图D、E、F为养阴生肌膜组家兔黏膜组织切片）

图3 家兔3与受试药物接触后组织黏膜病理变化（HE染色）（图A、B、C为空白膜组家兔黏膜组织切片，图D、E、F为养阴生肌膜组家兔黏膜组织切片）

图4 家兔4与受试药物接触后组织黏膜病理变化（HE染色）（图A、B、C为空白膜组家兔黏膜组织切片，图D、E、F为养阴生肌膜组家兔黏膜组织切片）

生理盐水组豚鼠均未出现皮肤过敏反应，致敏率为0%；2,4-二硝基氯苯组豚鼠皮肤均出现明显的红斑和水肿，随着时间的推移，红斑逐渐加深，而水肿则缓慢消退，表明该组豚鼠出现了明显的皮肤过敏反应，致敏率为100%，反应强度为极度致敏性；养阴生肌膜组除9号豚鼠皮肤出现勉强可见的红斑外，其余均未出现皮肤过敏反应，致敏率为10%。参照皮肤过敏性试验致敏率分类表（表6），致敏率在0%～10%范围内，致敏强度为无致敏性，因此可以认为养阴生肌膜对皮肤未出现过敏反应（结果见表4～7）。

表4 皮肤过敏反应评分标准

表5 皮肤过敏性试验致敏率分类表(%)

表6 养阴生肌膜皮肤过敏反应强度评价

表7 养阴生肌膜皮肤过敏试验(n,%)

3 讨论

黏膜刺激性试验的目的是观察受试药物一次或多次接触黏膜后所产生的刺激性反应情况，考察黏膜在接触受试药物后是否出现充血、渗出、变性或坏死等局部反应，是药物安全性评价的重要指标之一。经试验，养阴生肌膜组对家兔颚黏膜未引起红斑、水肿等刺激症状，表明养阴生肌膜对黏膜无刺激性。皮肤过敏试验是一种对受试药物产生免疫学传递的皮肤反应，主要观察受试药物多次接触皮肤后，机体免疫系统在皮肤上的表现，即有无过敏症状、强度如何。皮肤过敏试验是贴膜制剂安全性评价所必需的指标。经试验，养阴生肌膜对豚鼠皮肤进行致敏和攻击后，未出现红斑、水肿等皮肤过敏症状，而阳性对照组2,4-二硝基氯苯则出现了强烈的皮肤过敏症状，表现为豚鼠背部与药物接触部位均出现不同程度的红斑和水肿，说明养阴生肌膜对皮肤无过敏性。

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[7]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光敏性反应)研究的技术指导原则[S].北京,2005.

R965

A

1673-5846(2013)08-0034-03

1甘肃省中医院药学部，甘肃兰州 730050

2兰州大学基础医学院药理学研究所，甘肃兰州 730050

甘肃省重点中医药科研项目，编号：（GZK-2010-Z13）