TRAF4 mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中的表达

贺 丹柴华旗

（1 常熟市第二人民医院肾内科，江苏 常熟 215500；2 苏州大学附属第一医院肾内科，江苏 苏州 215000）

TRAF4 mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中的表达

贺 丹1柴华旗2

（1 常熟市第二人民医院肾内科，江苏 常熟 215500；2 苏州大学附属第一医院肾内科，江苏 苏州 215000）

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血白细胞中的表达是否存在异常。方法收集2010年8月至20012年9月我院肾内科、风湿科院住院SLE女性患者25例，所有患者均符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准，SLEDAI评分在4～26分之间；以健康献血者15例为对照组。取外周静脉血，分离外周血白细胞，提取细胞总RNA，以β肌动蛋白（β-actin）为内参照，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术半定量检测TRAF4 mRNA在外周血白细胞中的相对表达水平。结果SLE患者外周血白细胞TRAF4 mRNA的表达低于正常人（P＜0.05）。结论TRAF4 mRNA可能参与了SLE的发生发展。

系统性红斑狼疮；TRAF4；白细胞；RT-PCR

系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的自身免疫性疾病，存在多种免疫学异常[1]。有文献报道约50%的SLE患者发生中性粒细胞凋亡增加，致自身抗原增加，与疾病的活动程度正相关，其发生机制与Fas/ FasL复合物有关[2]，而TRAF4过表达可以抑制由Fas介导的细胞凋亡。TRAF4是TRAFs家族成员之一，在正常人外周血中只有粒细胞和单核细胞表达TRAF4，所以我们选用外周血白细胞作为研究对象分析SLE患者TRAF4 mRNA的表达是否存在异常。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年8月至20012年9月我院肾内科住院SLE女性患者25例，年龄14～56岁，所有患者均符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准，采用Bombardier等的SLE活动指数[3]（SLEDAI）评价疾病活动程度，患者评分在4～26分之间。以健康献血者15例为对照组，均为女性，18～42岁。

1.2 治疗方法

取外周静脉血，EDTAK2抗凝，离心后获得白细胞；采用Trizol总RNA一步法提取细胞总RNA；用M-MLV逆转录酶合成第一链cDNA；TRAF4、β-actin引物设计、合成由上海生物工程公司设计并合成。TRAF4引物序列为ACACCATCCAGAGCCACCAG（sense）和ACCACTGCCATTGCCATTGAG（antisense），产物大小为461bp；β-actin：GGGACCTGACTGACTACCTC（sense）和GCATTTGCGGTGGACGATGG（antisense）。产物大小为575bp；每组均以β-actin作内参照，分管进行扩增；取PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪（VILBERLOURMAT）上对产物定量扫描，参照电泳Marker的条带位置判断目的条带。以目的基因与内对照β-actin的扫描值之比为该基因相对表达水平。扩增PCR产物送上海基康生物技术有限公司进行测序。

1.3 观察指标

观察SLE患者外周血白细胞中TRAF4mRNA的表达是否存在异常。

1.4 统计学分析

计量资料用均数±标准差描述，组间比较采用t检验。结果以P＜0.05为显著统计学差异。采用SPSS12.0软件进行分析。

2 结 果

TRAF4 PCR扩增产物经上海基康生物技术有限公司测序，结果与原基因序列符合。SLE患者外周血白细胞TRAF4 mRNA表达见图1。

图1 SLE患者外周血白细胞TRAF4 mRNA表达（1-4：SLE患者；5-8：正常对照；M：Marker）

本文对SLE患者以及正常对照组外周血白细胞中TRAF4 mRNA的表达进行了半定量RT-PCR分析，用β-actin为内参照，结果以百分数形式出现，两组TRAF4 mRNA的表达分别为（30.01±19.05）%和（45.58±11.65）%，SLE患者TRAF4 mRNA表达低于正常对照组，P=0.008，两组之间存在显著差异（P＜0.05）。见表1。

表1 SLE患者外周血白细胞TRAF4 mRNA表达量(χ—±s)

3 讨 论

凋亡异常及凋亡细胞清除障碍在SLE的发病机制中起重要作用。SLE患者外周血粒细胞、淋巴细胞、单核细胞凋亡增多，加上凋亡细胞清除障碍，使细胞内物质释放入血，成为自身抗原[4]，促进自身反应性淋巴细胞激活、抗自身抗体产生和免疫复合物形成[1]，从而促进SLE的发生发展。

TRAF4是TRAFs家族成员之一，最早是1995年Regnier等在乳腺癌上皮细胞的细胞核中发现的。在人外周血粒细胞TRAF4表达强阳性，单核细胞阳性[5]，在胚胎发育过程中起重要的生物学作用。

Fas在免疫系统中表达广泛，介导外周血单核细胞、淋巴细胞的凋亡增加[4]，在SLE的发病中起重要作用。而TRAF4过表达能抑制由Fas诱导的细胞凋亡，具有抗凋亡作用[6]。此外，TRAF4能扩大糖皮质激素诱导的TNFR（GITR）介导的NF-κB活化，提高T细胞的活性，在调节由自身抗原、外来抗原触发的免疫反应中起重要作用；在体内或体外使用抗GITR的抗体处理后可以诱发自身免疫性疾病的发生[7]。因此TRAF4mRNA表达下调，可能通过抑制GITR的信号转导，参与SLE等自身免疫性疾病的发生发展。综上所述，TRAF4mRNA在SLE患者外周血白细胞中表达下调，可能通过促进Fas介导的外周血粒细胞和单核细胞凋亡增加，导致自身抗原增加，免疫复合物形成以及自身反应性淋巴细胞激活等，从而参与SLE的发生和发展。

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