慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群分析及与病毒载量相关性研究

朱苏兰，鲁 陈，熊德琴，李左娟（.江西省赣州市信丰县赣南医学院第二附属医院 4600；.江西省南昌市第九医院 000；.江西省儿童医院，南昌 000）

乙型病毒性肝炎的发病机制并不是由乙型肝炎（下称乙肝）病毒（HBV）直接引起肝细胞损害，目前认为细胞免疫在清除病毒、引起肝损害中起了重要作用［1］。T淋巴细胞是主导机体免疫功能最主要的免疫细胞之一，它可直接针对已感染HBV的肝细胞膜上所表达的病毒抗原产生免疫反应，并对病毒的清除产生作用。本试验旨在探讨乙肝患者周围血T淋巴细胞亚群以及其与乙型肝炎病毒复制的关系，现将检测结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年12月至2012年3月南昌市第九医院住院及门诊患者诊断为慢性乙肝病例92例，临床诊断标准参照2010年全国病毒件肝炎会议修订的《慢性乙型肝炎防治指南》［2］。无合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染的实验室证据；排除酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等其他肝炎；排除肿瘤、自身免疫性疾病、其他感染性疾病。健康对照组20例来源于同一时期健康体检人群。

1.2 方法

1.2.1 患者分组 所有患者分为3组：（1）HBV携带组30例，男12例，女18例；慢性乙肝患者35例，其中男24例，女11例；慢性重型乙肝患者组27例，其中男18例，女9例。健康对照组20例，其中男5例，女15例。入选患者根据患者外周血病毒量分为以下3组：（1）DNA阴性组（16例），HBV DNA为阴性的患者。（2）低病毒载量组（31例），HBV DNA为1×103～1×105的患者。（3）高病毒载量组（45例），HBV DNA为1×106～1×108的患者。

1.2.2 外周血T淋巴细胞亚群检测 采用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞表面标志。仪器购自美国BD公司，型号为FACSCalibur。试剂由BD公司生产。

1.2.3 血清HBV病毒载量测定 采用荧光定量聚合酶链反应进行检测法。仪器为美国ABI7300型基因扩增仪，试剂由杭州艾康生物有限公司提供，严格按说明书操作，结果大于1.0×103copy/mL为阳性。

1.3 统计学方法 组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 健康对照组与HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 见表1。统计结果显示，健康对照组与HBV携带者组比较，T淋巴细胞亚群结果，差异均无统计学意义（P＞0.05）；健康对照组、HBV携带者组与慢性乙肝患者组相比只有CD4＋差异有统计学意义；健康对照组、HBV携带者组与慢性重型乙肝组比较，T淋巴细胞亚群结果比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；慢性乙肝患者组与慢性重型乙肝比较只有CD4＋差异有统计学意义。

表1 健康对照组与HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群结果（±s）

表1 健康对照组与HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群结果（±s）

注：与健康对照组比较，aP＜0.05；与 HBV携带组比较，b P＜0.05；与慢性乙肝患者组比较，c P＜0.05。

组别 n CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋/CD8＋20 47.2±5.8 34.3±5.3 1.40±0.46 HBV携带组 30 46.3±5.6 34.0±5.9 1.35±0.37慢性乙肝患者组 35 43.3±6.2ab 37.2±6.8 1.17±0.48慢性重型乙肝组 27 38.8±6.8abc 40.8±7.8ab 0.95±0.42健康对照组a

2.2 健康对照组和各组不同病毒载量的HBV感染者T淋巴细胞亚群测定结果 见表2。结果显示，健康对照组与DNA阴性组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；健康对照组与低病毒载量组、高病毒载量组相比，T淋巴细胞亚群结果，差异有统计学意义（P＜0.05）；DNA阴性组与低病毒量组比较除CD4＋外CD8＋、CD4＋/CD8＋差异均有统计学意义（P＜0.05）；DNA阴性组与高病毒载量组比较，T淋巴细胞亚群结果，差别有统计学意义（P＜0.05）；低病毒载量组与高病毒载量组比较，T淋巴细胞亚群结果，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 健康对照组和各组不同病毒载量的HBV感染者T淋巴细胞亚群结果（±s）

表2 健康对照组和各组不同病毒载量的HBV感染者T淋巴细胞亚群结果（±s）

注：与健康对照组比较，aP＜0.05；与DNA阴性组比较，b P＜0.05；与低病毒载量组比较，c P＜0.05。

组别 n CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋/CD8＋20 47.2±5.8 34.3±5.3 1.40±0.46 DNA阴性组 16 46.8±5.1 34.1±5.2 1.38±0.35低病毒载量组 31 43.8±5.6a 38.0±6.7ab 1.13±0.41ab高病毒载量组 45 38.5±7.31abc 41.4±7.1abc 0.91±0.40健康对照组abc

3 讨 论

HBV是一种嗜肝DNA病毒，感染HBV后病毒在体内长期存在、不断复制，病毒不能被清除，这些患者称HBV慢性感染者。慢性病毒感染者中，如果肝功能一直正常，称为慢性病毒携带者；反之，如果引起肝功能异常则称为慢性肝炎。慢性肝炎患者病毒复制水平、肝损害程度、免疫反应形式等个体差异很大。

T细胞由不同的亚群组成，CD4＋、CD8＋细胞代表两类主要T细胞，CD4＋T淋巴细胞主要是辅助型T淋巴细胞（Th），Th在病毒的免疫应答中发挥中心作用，同时，对病毒清除起重要作用［3］。CD8＋T细胞激活和抑制严格依赖CD4＋T细胞。CD8＋T细胞主要包括细胞毒性T细胞（Tc）和抑制性T细胞（Ts），Ts通过释放分泌可溶性介质下调体液免疫和细胞免疫。Tc是细胞免疫的主要效应细胞，在被细胞因子激活后，产生穿孔素和颗粒酶，将靶细胞破坏，这是HBV感染后引起肝细胞损伤的主要原因，也是机体清除细胞内病毒的主要机制［4］。在正常情况下，二者保持一定比例，处于动态平衡状态，维持机体细胞免疫功能。为了解慢性HBV感染者细胞免疫功能情况，本试验检测了92例慢性HBV感染者T淋巴细胞亚群，结果显示HBV携带组与健康对照组比较T淋巴细胞亚群结果差异无统计学意义，表明HBV携带者多处于免疫耐受期，机体不能产生针对HBV的细胞免疫应答，肝组织无明显免疫损伤，故T细胞亚群 CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平无明显变化。慢性乙肝组患者CD4＋与健康对照组比较差异有统计学意义，慢性重型乙肝组患者CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋与健康对照组比较差异有统计学意义，以慢性重型乙肝外周血CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋最为明显，提示细胞免疫在乙肝发展为重型肝炎进程中是不可忽视的重要因素。不同临床类型慢性HBV感染者之间也有不同程度的差异，呈一定次序的规律性：从健康对照组到慢性重型乙肝组CD4＋、CD4＋/CD8＋逐渐降低，而CD8＋则逐渐升高。CD4＋T细胞降低，表明机体免疫功能下降，感染HBV后不易清除，是导致HBV感染慢性化的重要原因之一，与目前研究结果一致［5］；增加的CD8＋T细胞一般认为主要是Tc，慢性乙肝患者肝活检发现，肝小叶坏死区周围存在大量的Tc，造成肝细胞不断破坏引起患者血清丙氨酸氨基转移酶持续升高。

外周血HBV载量是反映病毒感染和复制程度的重要指标。流行病学调查结果表明，持续高HBV载量发生肝硬化和肝细胞癌的患者明显增加，这说明高HBV病毒载量患者免疫功能低下［6］。本试验结果显示，DNA 阴性组 CD4＋、CD4＋/CD8 下降，CD8 升高，但与健康对照组比较差异无统计学意义，表明病毒无活动性复制，存在HBV整合的肝细胞，免受特异性细胞毒细胞的攻击而免于被破坏。高病毒载量组和低病毒载量组CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋与健康对照组比较差异均有统计学意义，且高病毒载量患者比低病毒载量患者T淋巴细胞亚群变化更明显，这与董莉等［7］报道吻合。在 HBV DNA复制时患者体内存在免疫抑制因子，能抑制T细胞增殖和CD4＋T细胞分泌白细胞介素－2（IL－2），而IL－2可引起 T细胞亚群相互影响，造成细胞免疫功能失调，病毒难以清除［8］。

综上所述，慢性HBV感染者T细胞亚群改变不仅与HBV感染有关，也与HBV DNA复制有关，HBV DNA复制可进一步导致乙肝患者细胞免疫功能紊乱。即肝细胞损害与HBV病毒载量和T淋巴细胞亚群密切相关。因此，通过对慢性HBV感染者T细胞亚群和病毒载量检测可了解机体的免疫功能，从而为临床抗病毒治疗疗效及预后的判断提供了科学依据，并有可能通过改善免疫细胞紊乱来治疗慢性HBV感染。

［1］ 龙昭华，朱薏，苏杭，等.乙型肝炎病毒携带孕妇外周血T淋巴细胞亚群水平分析［J］.国际医药卫生导报，2009，15（13）：4－5.

［2］ 中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.2010版慢性乙型肝炎防治指南［J］.中华肝脏病杂志，2011，16 11－16.

［3］ 顾锡炳，杨小娟，王栋，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与外周血T淋巴细胞和NK细胞计数的关系［J］.实用肝脏病杂志，2010，13（6）：441－442.

［4］ 李鸿宾，江晓萍，叶珺，等.测定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的临床意义［J］.安徽医药，2006，10（8）：588－589.

［5］ 何英，张允奇，吴润香，等.慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化与病毒复制的关系［J］.检验医学，2009，24（11）：808－811.

［6］ You J，Zhuang L，Zhang YF，et al.Peripheral T－lymphocyte subpopulations in different clinical stages of chronic HBV infection correlate with HBV load［J］.World J Gastroenterol，2009，15：3382－3393.

［7］ 董莉，李军，韩亚萍，等.阿德福韦酯对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的影响［J］.苏州大学学报：医学版，2008，28（6）：962－965.

［8］ Liu A，Chert BF，Chert EJ，et al.Role of hepatitis B viral load and bass core pranoter mutation in hepatocellular Careinoma in hepatitis Bcaer S［J］.Infect Dis，2006，193：1258－1265.