HPLC法测定复方阿司匹林片中阿司匹林的含量

张毅能 章 霞 刘晓林 刘 君 黄东杰 陈 文

（长沙医学院 湖南 长沙 410219）

复方阿司匹林片（APC）中含有三个有效成分，分别是A－阿司匹林（乙酰水杨酸）、P－非那西汀（乙酰对氨苯乙醚）和C－咖啡因（1，3，7－三甲基黄嘌呤）。阿司匹林容易潮解生成水杨酸，此外样品在溶解和分析过程中也有降解现象［1］，因此在APC片的有效成分测定中不可忽视其水解产物水杨酸的干扰。在本实验中，发现阿司匹林在酸性含水体系中水解现象可以得到抑制，在甲醇－水体系中加入少量乙酸和磷酸作为流动相，既能有效避免阿司匹林的进一步水解，又能将水杨酸与三个有效组分很好的分离，据此建立的测定方法可以同时且准确测定APC中阿司匹林的含量。

1 实验

1.1 仪器与试剂：LC－100高效液相色谱仪；十八烷基键合固定相色谱柱；20μL定量进样管；LC－UV600紫外检测器；电子天平。

甲醇为色谱纯；乙酸和磷酸为分析纯；阿司匹林标准品为分析纯；复方阿司匹林片为市售品。

1.2 实验方法

1.2.1 对照标准品的配制和样品溶液的制备

1.2.1.1 对照品标准溶液的制备：精密称取阿司匹林对照品0.0100 g，置100mL的容量瓶中，加1%乙酸的无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL置100mL的容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，浓度分别为10、20、30、40、50μg·mL－1。滤膜滤过，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱峰面积和浓度c（μg·mL－1）进行线性回归。

1.2.1.2 样品溶液的制备：取市售APC片20片于研钵中研细混匀，准确称取相当于一片的重量（0.5227g）置于干净的烧杯中，用适量1%乙酸的无水甲醇溶液充分溶解并滤过残渣后，转移至500mL容量瓶中稀释至刻度。再加水超声溶解约10min，最后加水稀释至刻度。用滤膜过滤后，弃去初滤液，取续滤液为供试品溶液。

1.3 色谱条件的选择：本实验选择的色谱条件为：流动相是甲醇－水－乙酸－磷酸，体积比为68∶30∶1.5∶0.5；紫外检测波长为276nm；流速为1.0mL·min－1；柱温30℃。

2 结果和讨论

2.1 线性关系和精密度：色谱峰面积和浓度c（μg·mL－1）进行线性回归，回归方程为y＝4077.8x＋1319.5（r＝0.9998）。结果表明，在10～50μg·mL－1范围内，峰面积与浓度有良好的线性关系。见表1。取线性项下用30μg·mL－1的溶液连续平行测定6次，考察其精密度。结果表明，精密度良好，能够满足含量测定的需要。有关结果见表2。

表1 线性关系考察结果

表2 精密度测定结果

2.2 溶液稳定性：取线性项下用30μg·mL－1的溶液，于0、15、30、60、90、120min测其吸收度，考察溶液的稳定性。结果见表3，本品溶液的稳定性良好，吸收度在2h内未见明显变化，能满足含量测定的需要。

表3 溶液稳定性考察

2.3 复方阿司匹林片阿司匹林的含量测定：准确移取8.00mL样品储备溶液于250mL容量瓶中稀释至刻度制成供试液，按上述色谱条件进行测定，用外标法以峰面积计算含量。平行测定四次得平均结果（见表4）。

表4 阿司匹林的含量

2.4 加样回收率实验：取已知含量的样品，精密称定，置50mL容量瓶中，共6份，精密加入阿司匹林对照品，按供试液制备方法制备成相当于样品测定项下浓度的80%、100%、120%的溶液按上述色谱条件测定。计算阿司匹林平均回收率为99.7%，RSD（n＝6）为0.8%。

3 结论

3.1 样品溶剂：通过多种溶剂对APC片各组分的溶解性和稳定性的测试发现，1%乙酸甲醇溶液做溶剂时对APC的溶解性和稳定性均较好。实验表明，在2h内测定样品溶液，各组分峰面积均无明显变化，说明降解现象不明显。

3.2 流动相：本实验比较了多种流动相体系，实验发现阿司匹林在酸性含水体系中水解现象可以得到抑制。本实验以流动相是甲醇－水－乙酸－磷酸，体积比为68∶30∶1.5∶0.5为流动相，既可以使各组分有很好的分离效果，又能保证组分在2h内无水解现象。

3.3 检测波长的选择：精密移取阿司匹林对照品溶液（30μg·mL－1），在200～400nm的波长范围内扫描紫外吸收图谱，结果在276和227nm处有最大吸收。放置24h后，再扫描吸收图谱，发现阿司匹林对照品溶液在303nm的波长处有明显吸收，说明此溶液在放置过程中发生了水解反应，有水杨酸产生，然而在276nm的波长处的变化不大，故选定276nm为测定阿司匹林的波长。

本方法简便，准确，重复性好，能准确测定复方阿司匹林中阿司匹林的含量，为复方阿司匹林的质量标准提供依据。根据实验结果，拟确定复方阿司匹林片中阿司匹林的平均含量为224.4mg／片。

［1］ 姚如心，许庆琴，杜黎明.大口径毛细管气相色谱法直接测定复方阿司匹林制剂［J］.分析科学学报，2007，23（3）：295－04

［2］ 赵怀清，王学娅，杨丽，程丽珠.胶束薄层色谱法同时测定APC片中3组分含量［J］.沈阳药科大学学报，2001，18（9）：684－689

［3］ 许占方，徐云室，陈立柱.HPLC法测定阿司匹林的含量［J］.齐齐哈尔医学院学报.2007，28（3）