六味地黄丸中丹皮酚含量测定实验研究

宋 飞

（广西医科大学第四附属医院，广西 柳州 545005）

六味地黄丸中丹皮酚含量测定实验研究

宋 飞

（广西医科大学第四附属医院，广西 柳州 545005）

六味地黄丸是最常用的中成药之一，具有滋阴利水之功，尤对阴虚湿停证更为适宜。中医上称六味为酸苦甘辛咸淡，六味之名以此六味地黄丸中山茱萸含铬量最高，通过对此丸微量元素测定，说明对动脉粥样硬化和糖尿病有预防作用。六味地黄丸能拮抗醋酸氢化可的松肾阳虚模型引起的脾脏重量减轻，似与中医“阳化气，阴成形”理论相关。江扬聪研究证明六味地黄丸能控制血糖水平在正常范围内，从而使临床症状明显改善。

六味地黄丸；丹皮酚含量

1 概 论

1.1 理化性质

丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（乙醇），熔点49～51℃，气味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。丹皮酚为常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等的主要挥发性成分之一，具有明显的降压、镇静和镇痛等药理作用。由于醋酸等因素导致的疼痛症状具有非常好的疗效。由蛋清、甲醛等毒素导致的炎症都有着非常好的抑制效果。对由于伤寒和疫苗导致的体温过高有着非常好的清热解毒的效果。日常生活中，它可以减少我们身体中O2-自由基的增加，对我们的皮肤有着增白的效果，减少皮肤色素的沉积增加皮肤弹性。不仅如此，在我们刷牙时如果加入少量丹皮酚有着对我们的牙龈疼痛都有着非常好的疗效。

表1 回收率试验结果

1.2 检测方法比较

①可以采用HPLC定量的方法进行丹皮酚的含量测定，以甲醇-2%冰醋酸为流动项，固定值相用HypersilODS柱，检测波长为276奈米。②可以运用采用2005版药典规定方法对丹皮酚含量进行了比较检测。③利用毛细管气相色谱法来进行测定，采用如下色谱条件：色谱柱，熔融弹性毛细管柱，涂布SE-300.26μm，N2流速60mL/min，H2流速50mL/min，空气流速500mL/min，柱温：180℃，汽化器、检测器：320℃。以内标法计算含量（以正十六烷为内标）。

1.3 论述

采用现代科学技术手段对以前的测定方案改革，不断提高测定含量的技术的思路是正确的。人类既要尊重传统，继承传统，更要有所前进，有所创新。在制剂质量的控制方面的研究重点主要放在熊果酸和丹皮酚的测定方法的研究上，这是否恰当。尚需研究如何才能真正控制中成药的质量是一个复杂的问题，因为究竟该方的有效成分是什么还不甚清楚。在此情况下如能以生物效应的强弱作为质量控制的指标可能更客观些。

2 实验部分

2.1 实验器材和条件[1]

2.1.1 实验仪器

仪器：日本岛津CS910双波长薄层扫描仪，化学试剂均为分析纯；硅胶：薄层层折用硅胶G（青岛海洋化工）；丹皮酚对照品：中国药品生物制品检定所；六味地黄丸样品：马鞍山神鹿科瑞药业有限公司、九芝堂股份有限公司。

2.1.2 薄层扫描条件

扫描方式：反射法锯齿扫描；波长：λS=274nm，λR=365nm；扫描速度：20mm/min；狭缝3mm。

2.2 层析条件

薄层板：硅胶G薄层板20cm×20cm×0.4cm，105℃，活化30min备用；展开剂：环乙烷：氯仿：无水乙醇（7∶3∶1）；斑点观察：置紫外灯下（λ=254nm）检识定位。

3 实验步骤[2]

3.1 标准曲线

精密称定丹皮酚对照品50mg，置50mL容量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，使对照品溶液浓度为lmg/mL。精密吸取丹皮酚对照品溶液1、2、3、4、5μL点样于同一硅胶板上，按层析条件展开，置紫外灯下（λ=254nm）检识定位，扫描测得峰面积积分值，。线性方程为：Y=1.555.5X+4743，相关系数为0.9899。

3.2 精密度试验

准确吸取标准品溶液5µL，在同一薄层板上点5个相同量的点，依法测定各斑点的斑面积积分值，计算精密度。结果下列数据。计算RSD=2.8%（n=5），说明本方法精密度较好。其对照品的测定值分别为：17234，16554，18888，16908，15048，16926.7±481.5，2.8 RSD（%）。

3.3 稳定性试验

我们队标准品的斑点进行稳定性试验，通过技术测量峰面积，每过20民、测量一次，这样连续进行五次测量。结果得出如下列数据所述，其峰面积基本是稳定的。丹皮酚标准品稳定性实验结果，第一到第五对照品的测定值分别是：16671，16908，16710，16799，16374，16692.3±209.8，1.264 RSD（%）。

3.4 样品含量测定[3]

称取六味地黄丸20g，研碎，置圆底烧瓶中，加无水乙醇80mL，然后提出3h，过滤液，然后量瓶定容100mL。精确的分别对样品进行吸取，10µL及丹皮酚对照品5µL，交叉点于同一硅胶薄板上。按层折条件展开，扫描测得峰面积积分值，用外标法计算丹皮酚含量。

3.5 回收率试验

采用加样回收法。称取已知含量的厂家1六味地黄丸样品5份约20g，分别制作出相关对照项15mg，然后根据样品含量的标准来制作备用溶液，最后进行测量，得出的结果是丹皮酚的添加回收率为93.12%，RSD为3.44%（n=5）。见表1。

4 讨 论

4.1 实验误差分析

薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品的质量检查的方法。其扫描测量结构的误差主要来自点量、展开、扫描中的斑点定位和扫描过程本身。在这次实验中，丹皮酚对照品标准曲线中相关系数值（R）为0.9899，相对较低。分析实验过程，可能由以下几个因素导致：①薄层点样时，取样体积不够准确。②薄层板上点样的时候没有使样品吹干而接着点样，导致点样斑点过大，较大的影响了实验[4]。③层析缸中展开剂饱和时间较短，影响展开效果。④薄层板在展开剂中展开的时，有较严重的边缘效应，从而使得展开的各个斑点没能很好的成一直线，这是扫描过程中会产生较大误差，使得实验结果受到影响。一般在薄层色谱中，薄层板两边展开剂跑得比较快，使得展开前沿形成一道弧线，称为边缘效应。边缘效应的产生是由于溶剂的挥发造成的，展开剂一般是由几个有机溶剂混合而成的，而在薄层板上一般是边缘上的展开剂较容易挥发，如果这几个有机溶剂的挥发性能差异比较大，那么就会造成薄层板上边缘和中间展开剂比例的差异而产生展开速度不一致的现象。为了避免边缘效应，就要做到：①保持展缸内不的气体饱和；②点样的时候，避免点在边缘，从而减小边缘效应[5]。

4.2 外标法测定

本实验采用了外标法测定丹皮酚的含量，外标法是色谱分析中的一种定量方法，它不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性[6]。

5 总 结

通过上文的研究和实验，我们可以看到利用薄层色谱扫描法来进行测定丹皮酚在六味地黄丸中的含量是十分简便的，灵敏度相对也比较高，这一方法也同样可以运用在牡丹皮等治剂中的测定。

[1]崔连有,刘有娥.六味地黄丸利水功效初探[J].时珍国医国药, 2000,11(3):245.

[2]国家药局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1998:1246.

[3]李顺成,钱瑞琴,范维峥,等.六味地黄汤及杞菊地黄汤对老年小鼠免疫衰老的调整作用[J].中成药,1990,12(10):28～29.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2002:358.

[5]李萍,石晓宏,王风连.六味地黄丸和地黄的免疫药理研究[J].中国免疫学杂志,1987,3(5):296-298.

[6]刘叙仪,王耐勤,孔家军,等.六味地黄丸或金匮肾气丸辅助治疗小细胞肺癌的疗效的观察[J].中西医结合杂志,1990,10(12):720-722.

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：1671-8194（2013）04-0095-03