FAS-1377基因多态性与青海地区乳腺癌临床病理指标的关系

金丽艳，胡 英，黄 欣，王秀娟，张双元

(1青海大学附属医院，西宁810000;2青海大学医学院)

FAS基因属于肿瘤坏死因子受体超家族成员［1］，是调控细胞凋亡的重要因子之一，与肿瘤的发生发展关系密切［2］。FAS基因启动子区含有两个重要多态位点［3］，其中一个多态位点位于启动子区的沉默子第1377位，在该位点发生CG→CA转换，破坏了转录因子SP1的结合位点(CACGCCC)，从而影响FAS基因的表达［4］，可能致死亡信号转导通路失调，使细胞发生癌变。本研究观察了FAS-1377基因多态性与青海地区乳腺癌临床病理指标的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年1月～2012年11月青海大学附属医院收治的330例女性乳腺癌患者，剔除非汉族资料及病理资料不全者，余233例纳入研究。患者年龄26～83岁，中位年龄47岁。TNM分期Ⅰ期14例，Ⅱ期129例，Ⅲ期62例，Ⅳ期9例，分期不明19例。无淋巴结转移者90例，有淋巴结转移者93例，转移情况不明者50例。

1.2 FAS-1377基因多态性检测 采集乳腺癌患者手术前外周抗凝血标本(EDTA-Na2抗凝)5 mL，用血液DNA提取试剂盒(天根生化科技北京有限公司)提取外周血DNA，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析检测 FAS-1377(rs2234767)基因型。引物序列参照文献［5］，由上海捷瑞生物工程有限公司合成。上游引物序列5'-TGT GTG CAC AAG GCT GGC GC-3';下游引物序列5'-TGC ATC TGT CAC TGC ACT TAC CAC CA-3'。PCR反应体系25μL，含100 ng模板DNA，10μmol/L上、下游引物各1μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL(天根生化科技北京有限公司)，加ddH2O至25 μL。反应条件:95℃预变性3 min，94℃变性30 s，退火温度为64℃，72℃延伸30 s，共30个循环后，72℃最终延伸10 min。20μL PCR产物用限制性核酸内切酶BstUⅠ(北京纽英伦生物技术有限公司)于60℃孵育2 h以上，酶切产物于2.5%琼脂糖凝胶(含0.5μg/mL溴化乙锭)电泳(70 V，60 min)后用凝胶成像系统观察酶切结果。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0软件。以χ2检验分析FAS-1377多态性与乳腺癌患者临床病理指标间的关系。检验方法均为双侧检验，检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 酶切结果 FAS-1377纯合突变型AA产生122 bp一个片段，纯合野生型GG产生104、18 bp两个片段，杂合型GA基因产生122、104、18 bp三个片段(见图1)。

图1 FAS-1377酶切电泳图

2.2 FAS-1377基因型分布 FAS-1377基因纯合野生型GG分布频率为21.0%(49/233)、杂合型GA为56.7%(132/233)、纯合突变型 AA 为22.3%(52/233)。

2.3 FAS-1377基因多态性与乳腺癌临床病理指标的关系 见表1。

3 讨论

细胞增殖与细胞凋亡之间不平衡是肿瘤形成的基础，FAS基因是调控细胞凋亡的重要因子之一，而其启动子区存在的FAS-1377多态位点可导致FAS基因低表达［3，6］，FAS表达减少是许多肿瘤恶变的共性，与大多数肿瘤的发展相关［7］。有很多证据表明FAS表达减少可能保护变异细胞，减少其被宿主免疫系统诱导凋亡，导致免疫逃逸［8］。在许多恶性肿瘤中，FAS表达减少成为一种恶性表型的特征［9］。目前FAS-1377多态性与肿瘤易感性的关系的研究较多，但尚无一致性结论。乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤之一［10］。本课题主要研究凋亡基因 FAS-1377位点的多态性与乳腺癌临床指标之间的关系。

表1 FAS-1377基因多态性与乳腺癌患者临床病理指标的关系

国内张柏林等［11］研究了840例乳腺癌患者和840例正常人 Fas-1377G/A、-670A/G和 FasL基因(-844T/C和7896G/C)基因多态性对乳腺癌发病风险的影响，结果发现:携带Fas-1377AA和GA基因型患者发生乳腺癌的风险增高。Knechtel等［12］对216个淋巴结阳性的乳腺癌妇女检测了包括FAS-1377和-670的16个基因多态性，单因素分析发现FAS-1377基因多态与无病生存率和总生存率显著相关。Krippl等［13］对500例女性奥地利白种人乳腺癌患者和500例正常对照进行病例对照研究，结果显示FAS-1377A等位基因与较高的乳腺癌风险有关。然而Crew等［14］在美国纽约研究1 053例乳腺癌患者和1 102例健康人FAS和FASL基因多态与乳腺癌风险的关系发现，FAS-1377G/A基因多态与乳腺癌发病风险无显著联系，也没有证据显示该基因多态与年龄和雌激素水平等相关。Hashemi等［15］对伊朗134例乳腺癌患者和152例正常女性进行FAS-1377 G/A(rs2234767)基因多态和乳腺癌的联系的研究，发现FAS-1377基因多态性分布在这两组间并无显著不同。Li等［16］对中国314例原发性宫颈癌患者和615例健康人进行FAS-1377、FAS-670、FASL-844基因型检测，分析发现FAS和FASL基因多态性与临床分期、细胞分化、肿瘤大小等无相关性。本研究中，FAS-1377基因多态与乳腺癌年龄及临床分期等临床病理指标间亦无统计学意义;关于两者的关系尚需进一步研究证实。

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