卡马西平血药浓度监测及干扰试验的研究

童凌斐，刘立民

(江西省人民医院药剂科，南昌 330006)

卡马西平(carbamazepine,CBZ)为复杂部分性发作的首选药,对控制癫痫大发作、局限性发作及混合型癫痫都有效,也可用于三叉神经痛等慢性疼痛。卡马西平安全血药浓度范围窄,个体的生理、病理等方面的差异也会造成药物的吸收程度和速率、表观分布容积、清除速率的不同,使得卡马西平血药浓度存在很大的个体差异。卡马西平为肝药酶诱导剂,能产生自身诱导作用,长期应用其半衰期可下降2-3倍，应根据血药浓度监测结果及时调整患者的用药剂量，确保有效又不致中毒反应发生[1]。国内外常用的体内药物浓度的测定方法主要为荧光偏振免疫法(FPIA)、酶联免疫法(EMIT)和高效液相色谱法(HPLC)等,FPIA和EMIT法操作简便准确,测定周期短,应用较广泛，但成本昂贵，加重病人经济负担[2]。目前国内应用较多的监测方法为HPLC法，其分离度好、灵敏度高、专属性强、成本低廉等优点[3]。有报道过内标法和外标法进行监测，笔者通过反复实验摸索出更简便实用高效的测定方法，且对其干扰试验进行监测和研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-2010AZH型高效液相色谱仪(包括四元高压泵，在线真空脱气机，自动进样器，柱温箱)，岛津LC solution化学工作站，XS3DU精密电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，LG16-A高速离心机 (北京雷勃尔离心机有限公司)。

1.2 试剂与药品 卡马西平对照品 (中国药品生物制品检定所 ，批号：0142-9503)；甲醇 (色谱纯，天津市天茂化学试剂厂)；水为自制超纯水；其他均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Kromasil 100-5C18柱(4.6 mmx150mm,5μm)，流动相为甲醇：水(50：50)，流速 1.0 ml/min，柱温 25℃；检测波长为 215 nm；进样量为 20μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 卡马西平储备液的制备 取卡马西平对照品适量，精密称量，加甲醇稀释至刻度，制成浓度为310μg/ml的溶液，置于冰箱冷藏备用。

2.2.2 标准溶液的制备 取储备液0.5ml，精密量取，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为15.5μg/ml的标准溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取储备液0.5ml，精密量取，置10ml容量瓶中，加入血清100μl，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，进行漩涡振荡4min，精密取1ml溶液至离心管在10000 r/min转速下离心6min，吸取上清液即得。

2.2.4 空白溶液的制备 取空白血清 100μl，置10ml容量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，进行漩涡振荡4min，精密取1ml溶液至离心管在10000 r/min转速下离心6min，吸取上清液即得。

2.3 空白干扰试验 分别取空白溶液、标准品溶液和供试品溶液20μl进样。结果表明：该色谱条件下卡马西平的保留时间为10min左右，供试品溶液中卡马西平的理论塔板数≥2000，分离度>2.0，空白血清对卡马西平的测定无干扰。

2.4 线性关系考察 按 “2.2.2标准品溶液的制备”项下的方法，制备浓度为 1.95、3.9、7.8、15.5、31μg/ml浓度的卡马西平溶液，按“2.1项下色谱条件”进样，记录色谱图。以卡马西平样品的峰面积(Y)与卡马西平的浓度(X)做标准曲线，得到回归方程：Y=32959.84X+19250.95，r=0.9998，结果表明卡马西平在1.95-31μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.5 重复性试验 取“2.2.3项”下制备所得的供试品溶液，按“2.1色谱条件”进样，记录色谱图，计算其中卡马西平含量。平行操作6次，其RSD=0.87%(n=6)。结果表明该方法重复性较好。

2.6 回收率试验和精密度试验 分别取卡马西平储备液适量，按“2.2.3项下供试品溶液的制备”,制备成卡马西平溶液浓度分别为12.0、15.0、19.0μg/ml的溶液，即为低、中、高浓度的溶液。按“2.1色谱条件”进样，记录色谱图，计算其中卡马西平含量，结果见表1。将以上低、中、高3种浓度的溶液作为质控样品，分别在同1d内测定4次计算日内精密度和连续3日内每日测定1次计算日间精密度，结果见表1。

表1 卡马西平回收率与精密度

2.7 稳定性试验 取“2.2.3项”下制备所得的供试品溶液，在 0、6、12、18、24h 按“2.1 色谱条件”进样，记录色谱图，计算其中卡马西平含量。RSD为1.36%(n=5)，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 耐用性

2.8.1 不同色谱柱的比较 取“2.2.3项”下制备所得的供试品溶液，经岛津VP-ODS(4.6mm×150mm,5μm)、Grace C18(4.6mm×150mm,5μm)和 Kromasil 100-5C18 柱(4.6 mmx150mm,5μm)色谱柱测定，结果卡马西平的百分含量分别为94.6%，96.2%和96.7%，RSD=1.18%。结果表明：不同色谱柱对含量测定结果无显著影响。

2.8.2 不同检测波长的比较 取“2.2.3项”下制备所得的供试品溶液，在不同的检测波长213,215,217nm下监测(其余色谱条件不变)，计算质控样品中卡马西平的含量。结果含量分别为92.5%，95.2%，93.3%，RSD为1.8%。结果表明：检测波长发生小的变动时对本方法基本无影响。

3 讨论

本研究使用的是HPLC法，对仪器无特殊要求，便于推广，本法直接采用甲醇和水为流动相，操作简单，灵敏度高，成本低，便于临床推广和应用。

该法选取卡马西平的最大吸收波长215nm作为检测波长， 与文献 285nm[4]、254nm[3]、240nm[3]、220nm[5]相比，灵敏度也较高，且血浆组分干扰少，该法所用血浆样品处理方法与文献[3]相比，无需酸化血浆样品，过程较简单，易于操作。本法所采取的萃取剂为甲醇，也尝试过乙腈、乙醇等溶剂，从回收率、低成本和安全性考虑，甲醇为最佳萃取剂。由于吸附力太强会导致严重的峰展宽和拖尾甚至不可逆吸附，提高柱温可降低流动相粘度、减少柱压、改善传质、提高柱效，经过对室温20℃、25℃、30℃不同温度的比较，在25℃和30℃的峰形较好，考虑到色柱的寿命问题，选择25℃为柱温。

[1]杨秀斐.余玉.姜建梅.卡马西平治疗癫痫血药浓度监测回顾性分析[J].医药导报,2004,23(6):418－419.

[2]李金恒.临床治疗药物监测的方法和应用[M].北京:人民卫生出版社.2003.28.

[3]刘光斌.江芳宁.高颖.HPLC法测定卡马西平血药浓度[J].中国药事,2012,26(9)：991-993.

[4]黄浩.HPLC法测定卡马西平血药浓度[J].内蒙古中医药，2010,29(20):55-55.

[5]周青,余江平,范渝蓉.反相高效液相色谱法测定卡马西平的血药浓度[J].中国药业,2007,16(14):27-27.