胶质母细胞瘤PTEN基因突变和Ki-67表达的研究

张宏敏

胶质母细胞瘤PTEN基因突变和Ki-67表达的研究

张宏敏

目的对胶质母细胞瘤内部PTEN基因突变以及Ki-67表达情况进行研究，并对两者关系展开探讨。方法取胶质瘤石蜡切片102例为研究对象，其中胶质母细胞瘤切片42例，对所选样本行聚合酶链反应-单链构象多态性处理分析（PCR-SSCP），对其PTEN基因突变进行检测；并对Ki-67在胶质瘤中的表达行免疫组化SP检测法进行检测。结果在胶质母细胞瘤中，PTEN基因突变发生率与剩余60例相比明显更高（P＜0.05）；在Ki-67平均标记指数方面，胶质母细胞瘤与其它胶质瘤相比数值更高（P＜0.05）。结论在胶质母细胞瘤中，PTEN基因突变对其发生以及发展具有重要作用；其病理恶性程度则与Ki-67表达程度呈明显的正相关；Ki-67表达程度同PTEN基因突变之间的关系也表现为正相关。

PTEN基因；Ki-67表达；胶质母细胞瘤；基因突变

在胶质瘤分型中，胶质母细胞瘤具有极高的恶性程度，而相关治疗技术的发展并未对其术后复发率以及致残率产生任何有效改善，患者平均生存时间极低[1]。要使胶质母细胞瘤当前的治疗状况得到有效改善，则应对影响瘤体发生及发展的主要相关因素进行研究。基于此，笔者对胶质母细胞瘤内部PTEN基因突变以及Ki-67表达情况进行研究，并对两者关系展开探讨，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料取2007年7月～2012年8月期间的胶质瘤石蜡切片102例，其中胶质母细胞瘤切片42例，其它类型胶质瘤切片为60例。所有切片均与WHO相关诊断标准相符，均排除Cowden病家族史以及其它各类恶性肿瘤，所有患者术前均未进行化学治疗或放射治疗。其中男71例，女31例，年龄12～79岁；35例为星形细胞瘤，15例为间变型星形细胞瘤，5例为少枝胶质细胞瘤，5例为混合性少支-星形细胞瘤，42例为胶质母细胞瘤。

1.2 试验方法①PCR-SSCP法检测：在分级酒精中置入石蜡切片作脱蜡处理，并在PCR反应管内置入载玻片刮取物，同时取基因释放剂加入并用微波炉进行加热后于PCR扩增仪上放置。PCR扩增：PCR反应体积总量为40μl，其中包括1μmol/L每对引物、200μmol/L每种dNTP、双蒸水0.5μl、amplitaq酶0.5μl、1×amplitaq PCR buffer，镁离子浓度数值设定为2mmol/L；PCR反应条件：94℃预变性10min，然后循环35或38次，每循环过程中均有94℃与56℃各30s以及72℃ 40s，72℃增加至10min[2]。检测突变：取适量聚丙烯酰胺凝胶（12.0%），在其中置入PCR产物后实施SSCP检测，若与正常脑组织相比，凝胶内部的瘤组织2条待位置存在差异性则证实为基因突变[3]。②免疫组化检测：采用微波抗原修复处理石蜡切片，然后实施免疫组化染色并判断染色结果：阳性细胞判定依据为细胞核呈现出棕黄色[4]，高倍镜下计数为5个视野，细胞500个，对其中阳性细胞所占比率进行计算，并以计算结果为Ki-67LI数值，即Ki-67标记指数。

1.3 统计学处理采用SPSS 13.0统计学软件对本次试验数据进行统计学处理，胶质母细胞瘤及其它分型胶质瘤内部PTEN基因突变差异采用卡方检验；胶质母细胞瘤及其它分型胶质瘤内部Ki-67的表达差异、Ki-67表达与PTEN基因突变在胶质母细胞瘤内部的关系则用秩和检验分析，P＜0.05表明差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 胶质母细胞瘤及其它分型胶质瘤内部PTEN基因突变差异对比行PCR扩增后，采用SSCP方法对所有扩增物进行检测[5]，结果表明在胶质母细胞瘤病例中，PTEN基因发生突变例数为11（26%）；其它分型胶质瘤中PTEN基因发生突变者仅1例。因此与其它分型胶质瘤相比，胶质母细胞瘤中PTEN基因发生突变几率更高[6]，差异显著（P＜0.05），见表1。

表1 PTEN基因在不同肿瘤分型下突变几率对比[n(%)]

2.2 Ki-67LI在不同分型胶质瘤中的表达差异对比Ki-67LI在胶质母细胞瘤中平均数值为（24.62 ±6.79），而在其它分型胶质瘤中的平均数值则为（6.71±4.67），两者数值具有显著差异（P＜0.05）。

2.3 Ki-67表达与PTEN基因突变在胶质母细胞瘤内部的关系在胶质母细胞瘤患者中，PTEN基因发生突变的11例瘤体内Ki-67指数明显比未变异的31例更高，差异显著（P＜0.05）。

3 讨论

在本次研究中，与胶质母细胞瘤相比，PTEN基因在非胶质母细胞瘤中的突变发生率明显更低，这充分证明了PTEN基因发生突变的情况一般存在于具有高恶性程度的胶质母细胞瘤体组织内部，而很少发生于低恶性程度的其它胶质瘤体组织内[7-8]。而结合分子生物学相关研究数据可发现，与表皮生长因子受体的过度表达及P53基因突变相比，PTEN基因发生突变对于胶质母细胞瘤体组织的发生及发展进程具有同样重要的作用。

作为大分子蛋白质的一种，Ki-67分布于细胞核内部，并在细胞G1、S、G0周期中表达，其峰值位于M期，因而对于全增殖期的细胞来说，Ki-67可作为一种有效的标记物[9]。本次试验中，在Ki-67平均标记指数方面，胶质母细胞瘤与其它胶质瘤相比数值更高，差异明显，说明胶质瘤体组织的病理恶性程度与Ki-67在瘤体组织内部表达呈显著的正相关。也就是说，随着Ki-67表达的增高，瘤细胞所具有的增殖活性也随之更大，因而对于胶质瘤来说，Ki-67表达指数可对其恶性程度作出标志性判断[10]。此外，在胶质母细胞瘤患者中，PTEN基因发生突变的11例瘤体内Ki-67指数明显比未变异的31例更高，也提示了Ki-67的表达强度与PTEN基因发生突变几率之间存在正相关的关系[11]。

综上所述，在胶质母细胞瘤中，PTEN基因突变对其发生以及发展具有重要作用；其病理恶性程度则与Ki-67表达程度呈明显的正相关；Ki-67表达程度同PTEN基因突变之间的关系也表现为正相关。

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Study on the Expression of Ki-67 and Mutation of PTEN Gene in Glioblastoma

Zhang Hongmin

ObjectiveTo study the glioblastoma internal PTEN gene mutation and Ki-67 expression,and to probe into the relationship between the two.Methods102 cases of gliomas paraffin section as the object of study, including 42 patients with glioblastoma, analysis of the sampling of the polymerase chain reaction, single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) treatment, the PTEN gene mutations were detected; and on the expression of Ki-67 in gliomas immune groups were detected with SP assay.ResultsIn glioblastoma, mutation rate and the remaining 60 cases significantly higher PTEN gene (P＜0.05); in the average Ki-67 labeling index, glioblastomas compared with other glioma higher (P＜0.05).ConclusionIn glioblastoma,the mutation of PTEN gene plays an important role in the occurrence and development; the malignant degree and the expression of Ki-67 was positively related to the degree of expression of Ki-67 degree; relationship between mutations of the PTEN gene also showed positive correlation.

PTEN gene; Ki-67 expression; Glioma; Gene mutation

R739.4

A

1673-5846(2013)06-0141-02

佛山市第二人民医院，广东佛山 528000