奶粉中叶酸的测定中标准曲线的制取及样品测量的实现

罗爱玲 陈绪华 江一飞

摘要：很多实验室在执行国标GB 5413.16-2010婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定方法时，发现实验过程中会出现这样那样的问题，检测结果不理想，实验难以成功。我们在反复实验，并对实验结果进行综合分析，最终，得到理想的线性结果，并准确地实现了样品的测量。

关键词：标准曲线 测量数据

中图分类号：TS252.51 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）14-0007-03

（1）测定培养基品牌青岛海博，通过对实验条件的改善菌悬液的透光率T=（72%-75%），本底降低3倍，蒸馏水做处理（每100mL中加入0.5g抗坏血酸），培养时间t=16.5h，调整标准曲线的浓度（缩减了两个浓度的标准点，0.15ng和0.25ng），在本底以及培养时间（参考《奶粉中叶酸的测定时曲线没有线性的可能因素分析》中4培养时间要适度）加以控制的情况下，取得曲线正生长。实验测量数据如表1。

以S2作为0点，线性方程：Y=10.501X-0.7897 R2=0.9913

（2）在标准曲线出现正生长的实验条件下，标准曲线浓度按标准要求再次实验。菌悬液的透光率T=（72%-75%），蒸馏水做处理（每100mL中加入0.5g抗坏血酸），本底降低3倍，培养时间t=17h，本底及培养时间加以控制，实验获得的测量数据如表2。

线性方程：Y=6.2477X-0.7418 R2=0.9953通过实验2的结果我们可以得到能够满足实验要求的标准曲线，实验1以S1作为参照管，实验2是按照标准方法规定的S2作为参照管。吸光度值的差异：由于菌悬液浓度的不绝对一致，及培养时间的等长。

按标准GB 5413.16-2010通过后续多次带样实验，因带样测量后，样品管的生长无梯度出现。及以上实验仅能够满足线性生长要求，无法完成样品测量，考虑更换培养基再次实验。

（3）在实验1、2的基础上，更换测定培养基，培养基品牌美国BD，菌悬液的透光率T=（72%-75%），蒸馏水做处理（每100mL中加入0.5g抗坏血酸），培养时间t=17h，实验获得理想的标准曲线线性测量数据如表3。

线性方程：Y=1.4948X-0.0199 R2=0.9960 实验3得到较理想的标准曲线，且正增长梯度明显，培养基不降低本底，接种空白生长量很小，故无需考虑本底对曲线的影响。

（4）在实验3的情况下，进行带样测量实验，称取样品1#4.3216g、2#4.4373g，按标准进行处理测定，同时测回收率（使用1#样品Y1中加入1mL浓度为0.1ug/mL的标准叶酸盐）曲线测量数据结果如表4。

线性方程：Y=1.5406X+0.0123 R2=0.9999

（5）样品、空白测量数据及计算结果如表5。

回收率测量数据及计算结果如表6。

1#样品测定结果计算：

X1（ug/100g）=[（0.1340+0.1227+0.1154+0.1104）/4-0.0165]×100×100×5×100÷1000÷4.3216=120.5

2#样品测定结果计算：

X2（ug/100g）=[（0.1237+0.1261+0.1184+0.1146）/4-0.0165]×100×100×5×100÷1000÷4.4373=117.4

已知1#和2#为平行测定样品，测定结果的绝对差值为3.1，低于相对测量平均值10%的11.9，即测量结果有效。

加标分析：标准叶酸回收率X（%）=[（0.2429-0.1340）-0.0165]/0.1×100=92.4满足线性回收测定要求。

6 结语

通过实验的不断尝试和努力，经过长时间和多次的实验摸索，应用国标GB 5413.16-2010在相关实验条件加以控制的情况下，是可以实现奶粉中叶酸的测定。理想的标准曲线，实现样品测量，测定加标回收率，最终确定该方法可以实现奶粉样品中叶酸的测量。

参考文献

[1]江一飞，刘恒，韩淑君.奶粉中叶酸的测定时曲线没有线性的可能性因素分析.生物技术世界，2012，12（61）22-24.

[2]GB 5413.16-2010婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定.