油茶提取物对阴道毛滴虫的杀灭实验

【摘 要】目的：研究油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脱物、60%醇洗脱物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脱物）体外对阴道毛滴虫的杀灭作用，评价它们的抗性病作用。方法：按照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）第二部分“消毒剂杀微生物实验”中的方法和操作程序，结合阴道毛滴虫的特点进行试验，观察药物的抗性病作用。结果：油茶果皮30%醇洗脱物在50mg/ml作用5分钟时，不能杀灭阴道毛滴虫。油茶果皮60%丙酮提取物在25mg/ml作用5分钟时，有杀灭阴道毛滴虫作用。油茶果皮60%醇洗脱物在6.25mg/ml作用5分钟时，有杀灭阴道毛滴虫作用。油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脱物在3.125mg/ml作用5分钟时，即有杀灭阴道毛滴虫作用。这一结果为将油茶进一步开发成抗性病药物提供实验依据。

【关键词】油茶；抗性病作用；阴道毛滴虫

油茶（Camellia oleifera Abel.）系山茶科（Theaceae）山茶属油茶组植物。在我国分布广产量大，资源非常丰富[1]。中国有油茶面积3660000公顷，年产油茶种子645000吨[2]。将油茶的果皮稱为油茶果皮；种子称为油茶籽，即茶子心；种子的脂肪油称茶油；榨去脂肪油的残渣称茶麸。本草纲目记载：茶籽苦寒， 可治疗急喘咳嗽， 去痰垢[3]。现代药理研究表明，油茶籽具有抗菌[4]、抗突变[5]、抗癌[6]，以及抑制心脑血管疾病[7-9]、毒杀软体动物及鱼[3，10]等作用。过去，油茶常被用来榨油，而榨出脂肪油后，油茶果皮和茶麸就变成了工厂的废料，无人问津，殊属可惜。为了能开发和综合利用这一丰富的自然资源，在前期研究工作的基础上我们对油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脱物、60%醇洗脱物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脱物）体外杀灭阴道毛滴虫的作用进行了观察，为将油茶进一步开发成抗性病药物提供依据。现将研究结果报道如下。

1 实验部分

1.1 实验材料

阴道毛滴虫临床株，于南京市妇幼保健医院临床取材数株，经实验室灭菌、分离，得到纯培养的阴道毛滴虫虫株。

油茶果皮和籽于2005年11月采自广西壮族自治区燕洞乡，并经大连大学中医中药系高松教授鉴定为Camellia oleifera Abel.，批号为20051101。

供试样品体外试验以泰氏液配成所需浓度混悬液，在体试验以2%羧甲基纤维素钠配成所需浓度。

1.2 实验方法

1.2.1 供试样品制备

油茶果皮60%丙酮提取物：称取油茶果皮1000g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次[11]，合并提取液，回收溶剂至干，备用。

油茶果皮30%醇洗脱物：将油茶果皮60%丙酮提取物用蒸馏水混悬流经D101型大孔吸附树脂，然后用30%乙醇进行洗脱，所得洗脱液回收溶剂至干，备用，又称油茶果皮多元酚富集物。

油茶果皮60%醇洗脱物：将油茶果皮60%丙酮提取物用蒸馏水混悬流经D101型大孔吸附树脂，然后用60%乙醇进行洗脱，所得洗脱液回收溶剂至干，备用。

油茶籽60%丙酮提取物：将榨油后的油茶籽再用石油醚脱脂三次，用60%丙酮-水回流提取剩余物3次，1h/次[12]，合并提取液，回收溶剂至干，备用。

油茶籽85%醇洗脱物：将油茶籽60%丙酮提取物用蒸馏水混悬流经D101型大孔吸附树脂，然后用85%乙醇进行洗脱，所得洗脱液回收溶剂至干，备用，即为油茶皂素。（含量在95%以上）

1.2.2 实验方法

1.2.2.1 检验依据：按照卫生部《消毒技术规范》2002年版第二部分“消毒剂杀灭微生物实验”中的方法和操作程序，根据阴道毛滴虫特点进行试验。

1.2.2.2 毛滴虫悬液：105/ml；

1.2.2.3 样品配制：实验前按要求将各药物配制成100mg/ml的混悬液。方法是先经超声溶解成混悬状态，再用无菌蒸馏水倍比稀释，常规配成50、25、12.5、6.25、3.125mg/ml浓度的混悬液待用；

1.2.2.4 溶剂：将甲醇用无菌蒸馏水倍比稀释，常规配成50、25、12.5%浓度的稀释液待用；

1.2.2.5 作用时间：5分钟；

1.2.2.6 残留样品的去除用稀释法（毛滴虫液体培养基作为稀释液）；

1.2.2.7 实验室温度：19℃±2；

1.2.2.8 实验重复次数：2次；

2 实验结果

2.1 残留样品稀释离心法去除的鉴定试验（见表1）

2.2 阴道毛滴虫的杀灭试验（见表2）

3 实验结论

3.1 甲醇浓度在为25%与滴虫作用5分钟时，无杀灭阴道毛滴虫作用。

3.2 油茶果皮30%醇洗脱物浓度在50mg/ml作用5分钟时，不能杀灭阴道毛滴虫。

3.3 油茶果皮60%丙酮提取物浓度在25 mg/ml作用5分钟时，有杀灭阴道毛滴虫作用。

3.4 油茶果皮60%醇洗脱物浓度在6.25 mg/ml作用5分钟时，有杀灭阴道毛滴虫作用。

3.5 油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脱物浓度在3.125 mg/ml作用5分钟时，有杀灭阴道毛滴虫作用。

参考文献：

[1] 王永奇， 吴小娟， 李红冰， 等. 药用山茶属植物的研究. 大连大学学报， 2006， （4）： 47-58.

[2] 高继银主编. 山茶属植物主要原种彩色图集. [M].浙江科学技术出版社. 2005： 3.

[3] 江苏新医学院. 中药大辞典[M]. 上海： 上海科学技术出版社. 2000. 上册： 191.

[4] 朱恒英， 刘克坤， 陈永培， 等. 油茶饼中油茶皂甙体外抑菌试验[J]. 福建中医药， 1989， 20（2）： 44-45.

[5] 陈永培， 郑鸣金， 朱恒英，等. 油茶饼中油茶皂甙抗突变初步研究[J]. 福建中医药， 1989， 20（3）： 19-20.

[6] 陈惠芳. 植物活性成分词典[M]， 北京；中国医药科技出版社. 2001

[7] 李萍， 何明， 黄起壬， 等. 油茶皂甙对缺氧复氧所致大鼠心脏损伤的保护作用及其机制探讨[J]. 中草药， 2000， 31（11）： 841-843.

[8] 黄起壬， 曹守仪， 何明， 等. NO介导的油茶皂甙对在体大鼠产生的药理性预适应保护作用[J]. 中草药， 2001， 32（1）： 44-46.

[9] 黄起壬， 何明， 戴育成， 等. 油茶皂甙对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的影响[J]. 中草药， 2005， 36（12）： 1831-1834.

[10] 李斌， 罗永明. 山茶属植物化学成分及生物活性研究[J]. 江西中医学院学报， 2000， 12（1）： 44-47.

[11] 陈跃龙，唐玲，李红冰，等. 油茶果皮多元酚富集工艺研究. [J]. 时针国医国药， 2008， 19（6）： 1369-1370.

6.26办理

本课题为大连市科技计划项目，编号：2007A13GX037。