武靴藤中皂苷的分离与结构鉴定

张新勇　霍立茹　刘丽芳　王宇新

[摘要]目的 对我国广西的萝藦科武靴藤属植物武靴藤Gymnema sylvestre叶进行化学成分研究。 方法 采用硅胶柱色谱、低压柱色谱和反相中压柱色谱等方法进行化学成分的分离纯化，依据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。 结果 共分离得到9个化合物，其中4个皂苷前文已发表。其余5个化合物经波谱解析和理化常数测定为3个皂苷和2个皂苷元，分别是12-异丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-齐墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester，1]，12-异丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-齐墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl（1→6） -β-D-glucopyranosyl ester，2]，12-异丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）吡喃木糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-齐墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-xylopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D- glucopyranosyl ester，3]，齐墩果酸（oleanolic acid，4）和长刺皂苷元（longispinogenin，5）。 结论 化合物均为首次从原植物中分离得到。

[关键词]武靴藤；皂苷；齐墩果酸；长刺皂苷元

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）09-33-05

糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的常见病，临床以高血糖为主要标志，常见症状有多饮、多尿，多食以及消瘦等，糖尿病可引起身体多系统的损害。引起胰岛素绝对或相对分泌不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引起蛋白质，脂肪，水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，其中以高血糖为主要标志。据国际糖尿病联盟（IDF）估计，截止到2007年我国糖尿病患病人数约为3980万，2025年预计将达到5930万[1]。中年人成为高发人群， 平均发病年龄为45岁， 呈年轻化的趋势。医学上称这些人为糖耐量减退者。糖尿病是代谢紊乱造成的全身慢性进行性疾病，属于中医消渴范畴。随着人们生活水平的提高及生活方式的改变，全世界糖尿病患者人数与日俱增，已成为继恶性肿瘤及心血管疾病之后的第三大疾病，严重威胁着人类的健康。

近年来研究发现，中草药的降低血糖作用有比较突出的特点，表现为多靶点、多机制以及多功能、协同性等优势，而且具有副作用小、作用持久等特点。武靴藤早在我国汉代就已在民间作为治疗消渴症而广泛使用，而印度则广泛用于治疗胃病以及作为利尿剂和抗糖尿病药物使用[2-3]。产于我国西南地区的民间草药武靴藤一方面具有阻止葡萄糖进入细胞内的作用，另一方面能抑制肾上腺素刺激肝脏而制造葡萄糖的功能，从而降低体内血糖水平，而且其还能促进胰岛细胞的分泌作用，从而提高血液中的胰岛素含量，进而起到降糖作用[4]。其不仅能改善葡萄糖水平，还可促使胰腺中的胰岛细胞的修复再生。是可供开发的为数不多的具有降糖潜力的中草药之一。

1 实验材料

药材：为萝藦科武靴藤属植物武靴藤Gymnema sylvestre Retz. Schult. 产地：云南腾冲。

仪器：氢谱和碳谱为Bruker ACF-300核磁共振光谱仪测定，分子量测定用英国WG公司ZAB-HS快原子轰击质谱仪（FAB），熔点测定为Yancco微量熔点仪，红外测定为美国伯乐公司的FTS-60型红外仪，

试剂：柱色谱160～200目粗孔硅胶和400目薄层色谱用硅胶（青岛海洋化工厂），中压柱色谱用填料硅胶采用日本富士球形（10 μm）C18键合反向硅胶。

2 提取和分离

2.1 皂苷的分离

武靴藤15 kg，甲醇浸泡24 h，提取液回收有机溶剂后，得浓缩溶液，再用极性有机溶剂萃取，得萃取液，再回收有机溶剂后，得药材提取物，然后拌硅胶，上样，以CHCl3-CH3OH梯度洗脱，取其中CHCl3-CH3OH（95︰5）组分拌细孔硅胶，进行低压柱色谱（0.8 MPa），分离得到9个皂苷化合物，其中4个化合物已另文发表[1]。上述CHCl3-CH3OH（90︰10）组分用反相C18中压柱进行层析分离，甲醇-水（20︰80-80︰20）梯度洗脱，分得三个皂苷成分。

2.2 苷元的分离

取武靴藤皂苷若干，用适量甲醇-水溶液溶解，再以稀盐酸溶液水解，回流10 h，放冷，再滴稀碱溶液；然后减压浓缩，得皂苷水解产物。残留物石油醚反复洗涤，干燥，得粗皂苷元部分。苷元用适量环己烷加热溶解，滤过；环己烷溶液经浓缩、拌样后进行硅胶柱色谱，洗脱剂为环己烷-苯混合溶剂梯度洗脱，得纯苷元，经结构解析为齐墩果酸和长刺皂苷元。中和后的水解溶液，经高效薄层层析并与标准糖对照分析，显示为葡萄糖、木糖成分。

3 皂苷的结构解析

4 皂苷元的鉴定

化合物4和5经鉴定分别为齐墩果酸（oleanolic acid）和长刺皂苷元 （longispinogenin），与文献一致[8-9]。

5 讨论

近年来研究发现，中草药的降低血糖作用温和持久，副作用小，且作用机理具有多效应、多位点及多功能等特点。武靴藤植物作为草药在印度民间广泛使用，具有多种用途，分别用于治疗胃病、糖尿病和利尿剂。武靴藤主要分布于我国西南地区，如广西、云南、四川、贵州等省份，在我国南方地区民间也作为治疗消渴症的草药常有使用。

我們分别就采自广西和云南的武靴藤植物进行了化学成分研究，从中分得的主要有效成分均为皂苷类化合物，而且其苷元母核主要是齐墩果酸和长刺皂苷元；其糖基主要有葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖成分。

我们对武靴藤水提取物、醇提取物及其分离的皂苷成分的药效研究表明，均显示了较好的降糖活性，下一步我们将进一步按照新药申报资料的有关技术要求进行降糖活性方面的体内实验，力争将其开发成新药应用于临床。

[参考文献]

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[3] Gharpurey KG.Indian Med[J].Gaz，1926，61（3）：155.

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[5] 张新勇，霍立茹，刘丽芳，等.武靴藤叶化学成分研究[J].中草药，2011，42（5）：866-869.

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[8] Thompson MJ，Dutky SR，Patterson GW，et al.NMR spectra of C-24 isomeric sterols [J].Phytochemistry，1972，11（5）：1781-1790.

[9] Mahato SB，Pal BC.New triterpenoid extractives from Lemaccreocereus chichipe[J]. J Chem Soc，1987，57（3）：629.

（收稿日期：2013-04-11）