血清NO及NOS的实验室检测对早期诊断肝硬化的意义探讨

张伟

【摘要】目的：探讨一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）在肝硬化患者血清中的变化。方法： 硝酸盐还原酶法。因为NO在血清中以稳定的离子硝酸盐离子（NO3-）和亚硝酸盐离子（NO2-）存在，因此硝酸盐离子和亚硝酸盐离子可以准确地反映NO合成量。同时，根据NOS可以催化L-精氨酸生成NO，而NO与二价铁结合成有色物的性质，对NOS进行检测。 结果： 我们对30例肝硬化患者及30例正常人血清中NO及NOS进行测定，其结果显示如下：肝硬化如血清中NO：（50.4±19.0）umol/L，NOS：（6.72±2.37）u/ml，正常组血清中NO：（34.5±16.8） umol/L，NOS：（3.89±1.35）u/ml，经过T检验结果为P<0.01。其结果显示，正常人血清中的NO）及NOS均低于肝硬化组，而NO与NOS的含量变化基本成正相关。因为肝脏本身存在NOS，可以合成并释放NO。 结论： 肝硬化患者血清中NO及NOS的含量均明显高于正常对照组，提示可能与肝硬化的代谢、肝功能的损伤程度等有密切关系。

【中图分类号】R197.324【文献标识码】A【文章编号】1004-4949（2013）09-26-02

肝硬化（liver cirrhosis）是一种常见的慢性肝病，可由一种或多种原因引起肝脏损害，肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。一氧化氮（NO）既是一种新型的生物信息传递体，又是一种反应性极强的自由基。它兼有第二信使和神经递质的作用，介导和调节多种病理生理过程，尤其对肝硬化患者血流动力学的影响具有重要的病理生理学作用。本研究通过对血清一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的测定，对初步探讨NO及NOS与肝硬化的发病关系，具有重要的意义。

1资料与方法

1.1一般资料 选择2011.6～2012.12月间来我院肝病科的住院患者110例，其诊断符合《内科学肝硬化》第六版中肝硬化的诊断标准[1]，随机分为治疗组和对照组各55例，治疗组55例中，其中男性32例，女性23例；年龄32～66岁，平均年龄46.0±6.8岁；病程4～18年，平均病程8.1±3.7年；Chlld-pugh分级：B级31例，C级24例。其中乙肝肝硬化38例，丙肝肝硬化7例，酒精性肝硬化8例，原因不明的肝硬化2例；对照组55例中，其中男性33例，女性22例；年龄30～63岁，平均年龄44.0±6.1岁；病程3.8～17年，平均病程7.9±3.1年；Chlld pugh分级：B级30例，C级25例。治疗组与对照组在性别、年龄、病情程度、Chlld-pugh、病因等方面比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2实验室检测： 受试者于清晨采集空腹静脉血2ml。离心分离出血清。检测其NO及NOS的含量，NO及NOS测定均采用南京聚力生物工程研究所提供的试剂盒，NO的测定是利用硝酸还原酶特异地将：NO3-还原为NO2-，再通过其显色剂形成有色物。而NOS可催化L-精氨酸生成NO，NO与二价铁结合形成有色物，即代表NOS活性。

1.3统计学处理： 测定结果以（x±s）表示，两组间比较采用成组设计的T检验。

2结果

见表1。从表中可以看出，肝硬化患者血清NO及NOS明显高于正常对照组，P<0.01。

表1两组患者血清NO及NOS测定结果（x±s）

组 别1n1 血清NO（umol/L）1 血清NOS（u/ml）治疗组1601 34.5±16.81 3.98±1.58对照组1601 50.4±19.21 6.75±2.483讨论

NO在许多生理系统和病理生理状态中具有介质、信使或细胞功能调节因子的功能，是一种很活跃的自由基[1]。近年来研究发现NO及NOS在肝硬化的发生、发展及转归中起着重要作用。我们的检测结果表明NO及NOS的含量在肝硬化时明显升高，并且随着病情的进展而升高，这可能与肝功能的损伤程度及肝硬化时免疫功能紊乱有关。

NO是一种具有多种病理生理学效应的活性氮介质，它以L-精氨酸为底物，在NOS的作用下，由血管内皮细胞、肝细胞、枯否氏细胞、巨噬细胞等合成，合成NO的酶有两种，即原生酶（cNOS）和诱生酶（iNOS），cNOS在生理状态下少量合成NO，iNOS则在细胞损伤、某些因子如干扰素（INF）、白介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子（TNF）以及内毒素等升高时被激活，而诱导合成大量NO，目前普遍认为肝硬化时，由于肠道菌群过度生长所致的肠道内毒素的生成和摄取增多，肝脏对内毒素清除功能减退，使内毒素进入体循环并发生内毒素血症[2]；内毒素血症又可直接和（或）间接通过激活巨噬细胞、枯否细胞释放Il-l、TNF等来诱导产生大量ON，造成NO水平升高，因此内毒素是NO高水平的主要原因[3]。NO的合成和分泌增加，导致血管扩张，部分组织血流量增加，肝内血流分布不均，最终导致门脉血流动力学紊乱，使肝病的病情加重。因此，检测血清NOS、NO含量对临床估计肝硬化的病情进展及疗效观察有一定的价值。

肝硬化患者多数为乙型、丙型肝炎发展而来，而最近研究表明，许多病毒如EBV、乙型和丙型肝炎病毒等在体外或活体内都能诱导肝脏iNOS的表达。在分子水平上，鼠iNOS基因的调节区含有能与干扰素反应因子-1相互作用的IFN特异反应要素，启动区含有核因子KB（NF-KB）的两个结合位点，这两个位点在IFN-r和内毒素诱导iNOS的表达中起活化作用，因此认为，病毒不但可以通过IFN-r的介导，间接诱导肝细胞iNOS的表达，同时还可以通过某些特异的转录因子，直接调节肝脏iNOS的基因表达[4]。从而使NO合成水平升高。NO不但具有细胞毒作用，还具有病理性血管扩张和组织损伤的生物活性，动物实验证实，肝硬化时，血管产生的NO浓度增加可引起周围血管扩张，后者是肝硬水钠潴留、腹水形成、肾功衰竭发生的始动因素，肝硬化时血清NO含量增加与肝硬化患者一些重要并发症相关[5]。

总之，关于NO及NOS在肝硬化时的作用还有待于进一步研究，我们认为肝硬化患者血清NO及NOS的含量与其肝硬化的病情进展及并发症密切相关，监测其浓度的变化，对临床判断病情进展及疗效观察有重要价值。

参考文献

[1] 郭津生，王吉耀.一氧化氮与门脉高压高动力循环[J].胃肠病学和肝病学杂志，1997，6（1）：90-93.

[2] 罗宏.肝硬化患者血清一氧化氮、肿瘤坏死因子水平变化及意义[J].四川医学，2003，24（7）：716-717.

[3] 叶任高.陆再英内科学[M].第6版北京：人民卫生出版社，2005：445.

[4] 危北海.张万岱，陈治水，等.肝硬化中西医综合治疗方案（草案） [J].中国中西医结合杂志.2004，24（10）：869-87l

[5] 郭英君，李京涛，常战杰.丹芪五苓散联合安珐特治疗肝硬化腹水40例[J]陕西中医.2009，30（0）：1122