艾灸治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎实验研究

魏铁花,王庆国,李珊珊,唐 强,孙妲男,边晓燕,王 丹

(1.深圳市光明新区人民医院 康复科，广东 深圳 518000；2.黑龙江中医药大学 博士后科研流动站，黑龙江 哈尔滨 150040)

慢性肾小球肾炎在中医学上可以归入“血尿”“腰痛”“虚劳”“水肿”等范畴。慢性肾小球肾炎的发病通常比较隐匿，临床上一般病程比较长，在出现明显症状前多有一段时间的无症状尿异常期，之后随着疾病的缓慢持续发展，患者的肾功能可出现明显减退，最终可导致慢性肾衰竭。目前关于慢性肾小球肾炎的治疗方法的研究有很多，比如针刺[1]、黄蜀葵花总黄酮[2]、针药结合[3]等。本研究通过艾灸治疗系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠模型,观察治疗后尿蛋白、尿红细胞计数、血清肌酐和尿素氮的变化，从而为系膜增生性肾小球肾炎在临床实践中的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性(SD)健康大鼠共56只，平均体质量为(150±20)g，由长春高新医学动物实验研究中心提供。经适应性喂养1周后，检测尿常规、尿红细胞、尿蛋白(自动生化分析仪)，定性结果显示均为阴性。

1.2 实验试剂 天津生化制品厂生产的小牛血清蛋白(BSA);长春汇力生物技术有限公司生产的血总蛋白试剂盒、血尿素试剂盒、血肌酐试剂盒。

1.3 实验方法 模型制备[4-5]：正常组大鼠10只，模型组大鼠46只。对于模型组大鼠，从第1天开始，隔日灌胃BSA 20 mg次(约l mL/100 g)，持续至实验结束(10周末)。在第1天与第8天经大鼠皮下分点注射完全弗氏佐剂0.2 mg(含BSA 2 mg)，第8天和第15天可经尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)水溶液(0.4 mg/kg)各1次。从第6周开始每周收集大鼠尿液，并对所有尿液进行常规红细胞、白细胞和尿蛋白检测。当蛋白尿定性检测结果为阳性时，可提示MsPGN大鼠模型制作取得成功，随后继续给大鼠灌胃BSA直到实验结束。

1.4 动物分组 将大鼠随机(采用随机数字表)分为5组:正常组10只、模型组10只，灸背组12只，灸腹组12只，灸肢组12只。

1.4.1 正常组 该组大鼠不进行造模与艾灸,每天参考艾灸组同样的操作与时间进行抓取固定。

1.4.2 模型组 该组大鼠造模成功后，不要艾灸,每天参考艾灸组同样的操作与时间进行抓取固定。

1.4.3 灸背组 选穴造模成功后，将大鼠固定在鼠笼内,使大鼠尾部自由活动，头与身体无法动弹。大鼠进行备皮消毒，参照“大鼠标准穴位图谱”，取双肾俞穴、命门；选用自制香烟型艾条(直径约0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm处悬灸，每个肾俞穴灸7 min，命门穴灸6 min,左肾俞穴、命门、右肾俞穴每次共20 min，每日1次，治疗6次休息1 d，共治疗6周。

1.4.4 灸腹组 造模成功后，将大鼠固定在鼠笼内,使大鼠尾部自由活动，头与身体无法动弹。对大鼠进行备皮消毒，参考“大鼠标准穴位图谱”，选用自制的香烟型艾条(直径约0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm处悬灸，中脘、关元各10 min，先灸中脘穴、再灸关元穴，每次20 min，每日1次，治疗6次休息1 d，共治疗6周。

1.4.5 灸肢组 造模成功后，将大鼠固定在鼠笼内,使大鼠尾部自由活动，头与身体无法动弹。对大鼠进行备皮消毒，参考“大鼠标准穴位图谱”，取后(足)三里、涌泉，灸法同灸背组，每个后(足)三里穴灸5 min,涌泉穴灸5 min,灸法顺序左三里、右三里、左涌泉、右涌泉穴，每次20 min，每日1次，每治疗6次后休息1 d，共治疗6周。

1.5 标本采集及指标检测 分别于10、12、14、16周末对大鼠24 h内的尿液进行尿蛋白定量检验，分别于10、16周末对大鼠24 h内的尿液进行尿红细胞检验，分别于10、16周末尾静脉取血10 mL，检验血清尿素氮和肌酐水平。

2 结果

2.1 对各组大鼠一般状况影响 正常对照组大鼠的精神状态、反应性、活动度均较好，毛色普遍光泽，大小便正常。而通过观察模型组大鼠发现，实验结束时，大鼠普遍出现体形消瘦，精神不振，食欲降低，反应下降，毛色光泽差，弓背竖毛，眼球、耳廓、尾巴苍白，大小便异常。3个治疗组所有大鼠精神状态、反应性、活泼度均较好,毛色普遍光泽，大小便正常。在实验结束时，各组均出现大鼠死亡(可能与给药损伤、操作不当有关,病理解剖证实死亡原因)。各组大鼠相关死亡情况:从造模开始至治疗前，总共有2只动物死亡，灸背组1只，灸腹组1只。而从治疗开始到实验结束，灸肢组在12周时死亡1只，其余各组均未出现死亡。

2.2 对各组大鼠24 h尿蛋白的影响 见表1。

表1 对各组大鼠24 h尿蛋白的影响(±s) mg/L

2.3 对各组大鼠尿红细胞计数的影响 见表2。

表2 对各组大鼠尿红细胞计数的影响(±s) (个/视野)

2.4 对各组大鼠肾功能的影响 见表3。

表3 对各组大鼠肾功能的影响(±s)

3 讨论

灸腹和灸背治疗后，MsPGN大鼠的血清尿蛋白水平出现显著的下降，提示2种治疗方法可有效降低尿蛋白水平，但未恢复到正常对照组的水平。艾灸单一治疗MsPGN能在一定程度上减轻尿蛋白，但还不能完全缓解MsPGN,本研究中也可能由于治疗时间不够长而未能达到完全缓解。本研究还发现灸背组大鼠与灸腹组大鼠的尿红细胞出现明显减少，提示艾灸可能通过抑制肾小球系膜病变的疾病进展，降低尿液中的红细胞数目，从而缓解与改善系膜增生性肾炎的尿血症状，减少镜下血尿。因此，艾灸可有效保护肾脏功能，提高肾小球滤过率，防止氮质血症的产生，特别是灸腹治疗的疗效显著。

背部组取命门穴，肾俞；命门为督脉之穴，肾俞为调整肾脏机能的要穴，2穴单纯补肾。腹部组取关元穴，中脘；关元穴为小肠募穴，足三阴会穴，足三阴任脉交会穴，为一身元气所在，中脘为胃经之募穴，2穴亦脾肾双补，均为任脉之穴，且“命门者，下丹田精气处也”其命门学说定位在下丹田即关元穴。肢体组取足三里，涌泉穴；足三里为足阳明胃经之合穴，是五输穴之一，胃腑的下合穴，涌泉穴为足少阴肾经之井穴，2穴脾肾双补，但与命门学说关系甚微。

艾灸可有效减少MsPGN大鼠尿蛋白含量，改善血尿，降低血尿素氮及血肌酐，同时能够对模型大鼠的肾脏起到一定的保护作用,说明艾灸组对实验所致大鼠MsPGN有一定的治疗作用。在系膜增生性肾小球肾炎的针灸治疗中，命门学说脾肾双补组，即腹部组，优于命门学说单纯补肾组，即背部组，命门学说单纯补肾组优于非命门学说脾肾双补组，即肢体组。

[1]魏铁花,王庆国,韩玉生,等.针刺对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠的实验研究[J].医学信息(上旬刊),2011,24(7):4123-4124.

[2]胡翠云,戴敏,陈君君,等.黄蜀葵花总黄酮对大鼠湿热型慢性肾炎的作用及其对红细胞免疫黏附功能的影响[J].安徽中医学院学报,2011,30(1):57-61.

[3]卞勇,鞠晓云,范乃斌,等.针药结合治疗对慢性肾小球肾炎大鼠IL-1、IL-2的影响[J].安徽医药,2010,14(7):762.

[4]刘震,周树录,谭建三.大鼠系膜增生性肾模型的复制与改进[J].华西医科大学学报,1996,27(2):182-184.

[5]贾慧,邹万忠.改良慢性血清病性大鼠系膜增生性肾炎模型的建立[J].肾脏病与透析肾移植杂志,1996,5(3):21-25,98.