高原低氧环境下结缔组织生长因子在正常和不同病变胃黏膜中的表达

祁永清，李菊英，贺菊香，王海燕

胃肠道是对氧较敏感的器官,低氧环境引起唾液腺分泌减少,参与消化的肠淀粉酶亦减少,这影响到高原人消化吸收功能,也是高原地区慢性胃炎,尤其是慢性萎缩性胃炎高发原因之一。胃癌是高原地区最常见的恶性肿瘤，严重威胁着本地区居民的生命健康，为探讨在高原低氧环境下不同病变胃黏膜组织中结缔组织生长因子(CTGF)的阳性表达，早期诊断胃黏膜的不同病变，为胃癌的预防及早期诊断提供理论依据，本研究观察了青海高原地区患有慢性萎缩性胃炎及胃癌患者的病变胃黏膜和正常胃黏膜中CTGF的表达情况,报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2007年7月—2008年3月青海大学附属医院行胃镜检查并符合慢性萎缩性胃炎的患者20例，钳取2～4块，中性固定液固定，经病理确诊并资料完整，其中男10例，女10例；年龄28～74岁，平均(47.3±8.0)岁。均未接受过治疗。慢性萎缩性胃炎的诊断参考2006年中国慢性胃炎共识意见[1]，分为慢性萎缩性胃炎肠上皮化生12例和非化生性慢性萎缩性胃炎8例。另收集同时期青海大学附属医院送检病理科的胃癌切除标本50例，其中男41例，女9例；年龄35～80岁，平均(55.7±4.0)岁。均经病理证实为胃癌，高分化8例，中分化15例，低分化27例。取同时期体检时行胃镜检查的健康者10例，并在本人自愿情况下钳取2～4块正常胃黏膜,其中男7例，女3例；年龄35～70岁，平均(51.8±5.0)岁。

1.2 主要试剂 鼠抗人多克隆CTGF浓缩型工作液购自美国R&D system corporation,HistostainTM-plus kits 试剂盒工作浓度比例1∶10，浓缩型DAB显色试剂盒、磷酸盐缓冲液(PBS)和柠檬酸抗原修复液均购自北京中杉金桥生物科技有限公司。

1.3 方法 所有标本经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度4 μm，切片经过二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水，用0.01 mol/L pH值7.2 的PBS漂洗3次，5 min/次，擦干组织周围的水分，加3%过氧化氢(H2O2)封闭内源性过氧化物酶，室温10 min，PBS洗3次，5 min/次，切片放入0.01 mol/L柠檬酸钠抗原修复液中高压间接抗原修复10 min，室温冷却，PBS洗3次，5 min/次，加一抗，4 ℃冰箱过夜。PBS洗3次，5 min/次，用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗37 ℃温箱1 h，PBS洗3次，5 min/次，新鲜配制的二氨基联苯氨(DAB)显色液进行显色，苏木素复染，逆梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照，用光学显微镜进行观察。

1.4 结果判定标准 免疫组织化学染色结果的判读，阳性细胞数<25%为(+),25%～50%为(++),>50%为(+++),无阳性细胞(-)。(+～+++)为阳性表达，(-)为阴性表达。

1.5 统计学方法 采用SPSS 12.0统计学软件进行处理，计数资料多组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义，组间两两比较检验水准α′=0.0083。

2 结果

2.1 CTGF在不同胃黏膜的光学显微镜表现 正常胃黏膜中，胃腺排列整齐，形态规则，CTGF在大多细胞中没有表达，只散在表达在胃小凹腺体颈部细胞胞质和胞膜中(见图1)。慢性萎缩性胃炎中，胃腺体数量减少、胃小凹变浅，CTGF弥漫表达(见图2)。胃癌组织中CTGF弥漫表达，且染色较深(见图3)。

图1 正常胃黏膜CTGF的阳性表达(×40)

图2 慢性萎缩性胃炎CTGF的阳性表达(×40)

图3 胃癌组织中CTGF的阳性表达 (×40)

2.2 CTGF在不同胃黏膜的表达 正常胃黏膜中CTGF阳性表达1例(1/10)；慢性萎缩性胃炎肠上皮化生组织中CTGF阳性表达11例(11/12)；非化生性慢性萎缩性胃炎组织中CTGF阳性表达4例(4/8)；胃癌组织中CTGF阳性表达32例(64%),差异有统计学意义(χ2=16.097,P=0.0011)。慢性萎缩性胃炎肠上皮化生、胃癌组织中CTGF阳性表达率较正常胃黏膜中升高，差异均有统计学意义(χ2值分别为14.673和9.818，P值分别为0.0001和0.0017)。慢性萎缩性胃炎肠上皮化生、非化生性慢性萎缩性胃炎、胃癌组织中CTGF阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.0083)。

3 讨论

对青海地区正常胃黏膜和不同病变胃黏膜研究发现：在正常胃黏膜组织中CTGF只表达在胃小凹颈部细胞的胞质中，在慢性萎缩性胃炎肠上皮化生组织中CTGF弥漫表达，与正常胃黏膜比较差异明显。胃癌组织中CTGF亦呈弥漫强阳性表达，与正常胃黏膜比较差异明显，但与慢性萎缩性胃炎没有明显差异，这与文献报道的一致[2]，但发生的机制有待进一步研究。

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率均居恶性肿瘤前列。早诊断、早治疗是目前提高胃癌患者生存率的惟一有效措施。临床胃镜活组织检查的广泛应用使早期胃癌的诊断成为可能。但临床实践发现，胃镜活组织检查技术对早期胃癌的检查率并无很大提高，大部分胃癌患者诊断时已属于晚期，其主要原因可能与对胃癌前期变化认识不够充分、不能为临床提供可靠的胃黏膜癌前病变随访资料有关。为了对胃癌的早期诊断提供可靠的理论依据，本研究探讨青海高原地区患有慢性萎缩性胃炎及胃癌患者的病变胃黏膜组织和正常胃黏膜组织中CTGF的表达情况，在慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化组织中，如果CTGF表达阳性，一定要引起高度警惕，积极有效治疗的同时要密切注意胃黏膜改变。但本研究中由于例数较少，不排除出现假阳性的可能，在以后的研究中应加大样本进一步证实。

CTGF是20世纪90年代初在血小板源性生长因子(PDGF)的诱导下从人脐周静脉内皮细胞cDNA文库中首次发现的，可由成纤维细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞等多种细胞合成分泌。 CTGF属于即刻早期生长反应性基因，定位于许多细胞的细胞核中，它与细胞增殖、分化、凋亡、黏附、胚胎发育以及伤口愈合等有关[1]；是一种功能的分泌蛋白，在不同的肿瘤所起的作用有所不同[3]。在成人结缔组织、心、脑、肾[4]、肺[5]、肝、肌肉、胰腺以及胎盘等组织都有CTGF的表达。同时多个研究发现除了正常生理表达之外，在人类一些疾病中，如在黑色素瘤[6]、类风湿性关节炎[7]和一些良恶性肿瘤等疾病中CTGF均有不同程度的表达，与疾病的发生发展有着密切的关系。有资料显示，结肠癌黏膜CTGF表达比正常结肠高，而且与分化程度有关，在低分化结肠癌中高表达[8]。在胆囊癌中CTGF比胆囊炎、正常胆囊黏膜中表达高[9]。本研究提示如果在胃镜钳取的胃黏膜组织中检测出CTGF，可能对胃癌的早期诊断有很大的帮助，所以CTGF的检测可以用于胃癌的癌前病变的筛选，不仅可以提高对胃癌发病的认识，而且对胃癌的预防有实际意义。高原环境具有氧分压低、紫外线强、气候多变等特点,是一个特殊的生态环境系统。高原低氧引起胃肠功能紊乱，胃肠蠕动减慢，胃排空时间延长，胃内容物滞留，易引起胃黏膜病变，文献报道高原地区慢性胃炎发病率高，且海拔越高，发病率越高[10]。考虑其原因与长期处于高原缺氧环境，造成急性胃炎的上述因素持续存在有关。慢性萎缩性胃炎又是癌前病变,胃癌的发生被认为是从胃黏膜炎症开始的一个逐渐累积的过程，随着病变的发展，在组织学上逐步发展成癌前病变，最后演变形成胃癌[11]。本研究探讨了高原地区CTGF在不同胃黏膜病变中的表达情况，为预防和减少本地区胃癌的发病，探讨胃癌发病的病因，寻找最有效的诊断途径提供了依据。

1 张彦亮，倪海滨.结缔组织生长因子与相关疾病的研究进展[J].国外医学分子生物学分册,2002,24(3):190-193.

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5 闫慧明，丁利芳，刘媛，等.转化生长因子-β1与结缔组织生长因子在类风湿关节炎合并肺间质病变患者血清中的表达水平及临床意义[J].中国全科医学，2012，15(10)：3268.

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10 熊元志.重视慢性高原病胃黏膜病变的临床研究[J].国内讲堂,2008,12(10):20-23.

11 王萍,高柳成.胃镜检查胃粘膜肠上皮化生相关因素的临床分析[J].北京医学,2007,24(12)：753.