心脑宁片对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠脑组织结构的影响

马珍珍，刘 艳，吕宏迪，郝少君，张正臣

(中国人民解放军第371中心医院，河南 新乡 453000)

心脑宁片由人参、当归、川芎等组成，具有活血化瘀、益气安神等功效，用于治疗冠心病、脑血栓等，亦可用于记忆力减退、抗衰老等。为探究其抗衰老的作用机理，笔者进行了心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型脑组织结构影响的试验研究。现报道如下。

1 材料与仪器

心脑宁片由本院制剂室提供(批号为20110606);尼莫地平片(山东新华制药股份有限公司，批号为1105036);脑安片(哈药集团三精制药四厂有限公司，批号为201109002);D-半乳糖(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号为18Q10260);氯化钠注射液(郑州永和制药有限公司，批号为11103065);PVP络合碘消毒剂(洛阳市洁康消毒剂厂，批号为110903);甲醛(烟台市双双化工有限公司，批号为20111101);冰醋酸(天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号为20110113);总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号为20120316);过氧化氢酶(Catalase CAT)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号为20120315);谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号为20120316);丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号为20120316);考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号为20120317);羧甲基纤维素钠(天津恒兴化学试剂制造有限公司，批号为20090723)。

小鼠，清洁级，昆明种，河北省动物实验中心提供，合格证号1202041。

U电子秤(余姚记铭称重校验设备有限公司，型号JM 1000);离心机(上海安亭科学仪器厂，型号TDL-40B);电子天平(河南中良科学仪器有限公司，型号JA1103N);电子天平(上海精天电子仪器厂，型号JT6001);高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司，型号KDC-160HR);电子恒温水浴锅(北京永光明医疗仪器厂，型号DZKW-4);紫外可见分光光度计(日本岛津公司，型号 UV-2201);酶标仪(made by BIO-RAD Laboratories，Model 680);电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技有限公司，型号DY89-1);可调式移液器(上海雷勃分析仪器有限公司)。

2 方法与结果

2．1 试验方法

取体重18～21 g小鼠72只，雌雄各半，随机分为6组，各12只(雌雄各半)，其中5组造D-半乳糖亚急性衰老模型，每天颈背部皮下注射D-半乳糖(生理盐水配成5%，注射量为0．025 mL/g)造糖代谢衰老模型，每天造模1次，连续40 d;另1组为空白对照组，每天颈背部皮下注射同体积生理盐水。从第11天开始，造模型5组分别灌服大、中、小剂量心脑宁片混悬液(2．24 g/kg，1．12 g/kg，0．56 g/kg，112 g/L，56 g/L，28 g/L，0．2 mL/10 g，相当于临床剂量的 30，15，7．5 倍)、脑安片混悬液(0．53 g/kg，26．5 g/L，0．02 mL/g，相当于临床用量的 15 倍)及同体积的生理盐水;空白对照组灌服同体积的生理盐水[1-2]。每天给药1次，连续30 d。每3 d称体重1次，根据体重调整D-半乳糖和相应药物用量。用药第40天，各组小鼠均禁食不禁水12 h，于给D-半乳糖和灌胃2 h后，处死小鼠，解剖，取小鼠脑组织，用福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色[3]，光镜观察小鼠脑组织结构的变化。

2．2 结果

心脑宁片对小鼠衰老模型脑组织形态的影响:空白对照组小鼠脑神经细胞核和胞浆，神经胶质细胞均基本正常，见图1A;模型组小鼠脑神经细胞核和胞浆明显水肿增大呈球形，神经胶质细胞均出现固缩现象，见图1B;脑安片组小鼠部分脑神经细胞核和胞浆出现水肿，部分神经胶质细胞出现固缩现象，见图1C;大剂量心脑宁组小鼠个别脑神经细胞胞浆呈水肿现象，个别神经胶质细胞出现固缩现象，见图1D;中剂量心脑宁组小鼠大多数脑神经细胞核和胞浆呈水肿现象，少数神经胶质细胞呈固缩现象，见图1E;小剂量心脑宁组小鼠脑神经细胞核和胞浆呈水肿现象，大多神经胶质细胞呈现固缩现象，见图1F。结果见表1。

图1 HE染色组织切片图(×400)

表1 心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型脑神经细胞的影响(n=10)

由表1可见，经 Ridit检验，与空白对照组相比，模型组脑组织出现显著病理变化(P＜0．01)，说明造D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型成功。与模型组相比，大、中剂量心脑宁组可显著改善D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型脑神经细胞组织形态(P＜0．01)，小剂量心脑宁组和脑安片组仅有改善脑神经细胞组织形态的趋势。

3 讨论

心脑宁片是根据中医理论和现代药理研究成果拟订的院内协定处方，方中以人参为君药，调中，止消渴，通血脉，破坚疾，令人不忘，以其主补五脏，安精神，定魂魄;黄芪为臣药，补中益气;当归为佐药，活血养血;川芎为佐药，其性善降结气，以走肝经，气中之血药，通行十二经，具有理气、活血化瘀的作用。诸药合用，集活血化瘀、抗血栓、益气之功效于一体，既重视疏通脉管，以改善脏器供血，又能改善人体整体功能及代谢，达到扶正祛邪之目的。试验结果显示，与空白对照组相比，模型组脑组织出现显著病理变化(P＜0．01)，说明造D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型成功。与模型组相比，大、中剂量心脑宁组可显著改善D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型脑神经细胞组织形态(P＜0．01)，小剂量心脑宁组和脑安片组仅有改善脑神经细胞组织形态的趋势。本试验结果表明，心脑宁片、脑安片均能改善脑组织的形态结构，但心脑宁片效果更好，其中以大剂量心脑宁组(2．24 g/kg)效果最好。

致谢:本试验在河南中医学院苗明三教授指导下完成，特此致谢。

[1]苗明三，方晓艳．芦荟多糖对衰老模型小鼠的影响[J]．中国现代应用药学杂志，2005，22(3):181-184．

[2]苗明三，顾丽亚，方晓燕，等．阿胶益寿颗粒对小鼠衰老模型的影响[J]．中国中药杂志，2004，29(8):817-818．

[3]沈霞芬．家畜组织学与胚胎学[M]．北京:中国农业出版社，2011:148．