禽脑脊髓炎的诊断

于凤芝 杨久仙 乔立东 周珍辉 （北京农业职业学院 北京 房山 102442）

禽脑脊髓炎(AE)是主要侵害幼鸡的一种病毒病，以运动失调和头颈部震颤为特征，故又称流行性震颤。产蛋鸡可出现一时性产蛋急剧下降。禽脑脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis virus, AEV)属小RNA病毒科中的肠道病毒[1]，无血凝性，无囊膜，直径为24～32nm，浮密度1.31～ 1.33g/ml，沉降系数148s[2]，耐氯仿、酸、胰蛋白酶、胃蛋白酶和DNA酶，在两价镁离子的保护下，可抵抗热效应[3]。AEV的不同毒株间无血清学差异，但该病毒只有一个血清型，但毒株的毒力及对器官的亲嗜性则有所不同，多数为嗜肠型，少数为嗜神经型。本病毒抵抗力一般，在外界环境中可存活4周。嗜肠型以自然野毒株为代表，易通过口服途径感染鸡，并在粪便中传播，一般不致病，但易感雏鸡经垂直感染或早期水平感染可引起神经症状。胚适应株有高度嗜神经性，脑内接种（发病率稳定）或非肠道途径如肌肉和皮下接种(发病率不稳定)可引起严重的神经症状。目前，AE在全世界凡有商品化养禽的地区都有报道，死亡率平均25%，有的高达50%。80年代以来，我国广东、辽宁、江苏、内蒙古等省区先后暴发本病并造成流行。

1 材料和方法

1.1 病料和被检血清：病料采自河北省辛集市某鸡场30只发病雏鸡，在无菌条件下采集脑、脊髓、肝、脾、胰脏、心脏、腺胃、肌胃及血液，并分离血清。

1.2 种蛋 购自中国农业大学种鸡场，AE琼扩抗体阴性，本室孵化。

1.3 1日龄雏鸡 购自中国农业大学种鸡场，AE琼扩抗体阴性。

1.4 AE琼扩抗原、AE阳性血清 购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.5 AE阴性血清 本室自制。

1.6 琼脂粉 中国医药集团上海化学试剂公司生产。

1.7 流行病学调查及病理解剖 详细询问养殖户该鸡场的发病情况，包括发病鸡的日龄、发病率、死亡率及疫苗使用情况。观察大体病变，选取脑、脊髓、肝、脾、心脏、腺胃、肌胃。

1.8 琼脂扩散沉淀试验 无菌采取心脏学，分离血清，作为检样。称取优质琼脂粉0.8克，加热完全溶解后加NaCll18g，补PBS至100ml，溶解后经四层纱布过滤，待60℃时倒入平皿中，每平皿18ml，厚度3mm，凝固后，4℃贮存备用。或立即按常规用梅花形打孔器打孔，孔径4mm，孔距3mm，加入血清和标准阳性血清及标准阳性抗原。将各代分离物样品，用琼扩试验检测，若分离物样品及标准抗原与标准AE阳性血清之间出现特异性沉淀线，与AE阴性血清不出现沉淀线者，判定分离物无AE病毒存在。

1.9 病毒分离 将无菌采集的雏鸡脑组织，称重匀浆，用PBS液(pH7.2)作1:5倍稀释，反复冻融4次收集上清液，加双抗10000U/ml，4℃作用6h后，接种于28枚6日龄鸡胚卵黄囊，0.2ml/胚，继续孵化，每隔24h照蛋1次，将死胚取出置4℃保存。孵化到18日龄时，取14枚鸡胚检查病变，并采取脑、脊髓再进行病毒分离。其余14枚鸡胚继续孵化，出壳后隔离饲养，观察雏鸡是否出现临床症状，发病后采血做AGP试验。并采取脑、胰腺、脊髓组织再进行病毒分离。

1.10 细菌学检查 取病鸡肝脏接种于肉汤 、SS琼脂平板，37℃，24h后观察结果。

2. 结果

2.1 流行病学调查 2002年4月，河北省辛集市某种鸡场产蛋率下降，孵出率降低，孵出的雏鸡中弱雏增多，种鸡除个别鸡表现出神经症状外，其余均无临床症状。雏鸡于2日龄陆续发病，表现为目光呆滞，不愿走动，更多以跗关节着地，接着出现共济失调，前后摇晃，最后侧卧不能站立，部分雏鸡头颈震颤，尤以受惊表现明显。发病率约40%，该鸡场据未使用过AE疫苗。

2.2 剖检变化 共剖检6羽病鸡，主要表现为脑、脊髓充血、水肿和出血，腺胃黏摸及肌胃的肌层有灰白色区。

2.3 细菌分离 未分离出任何细菌。

2.4 病毒分离 （1）鸡胚病变：14枚1代鸡胚于18日龄检查，有6只脑部有轻度的水肿，并有小的出血点.另一部分继续孵化的鸡胚中有3只未孵化出，剖检后观察到脑部水肿，有出血点，腿肌营养不良，肝脏坏死。（2）孵出雏鸡的感染情况：雏鸡在9日龄开始出现症状，表现为精神不振，眼睛迟钝，不愿走动。随后出现共济失调，前后摇晃，步态不稳，拍动翅膀，头颈震颤明显。采血分离血清，AGP试验均为AE抗体阳性。

2.5 琼扩扩散沉淀试验 附表表明，无论发病雏鸡群，还是第一代雏鸡，均出现了AE琼脂扩散反应阳性。

3 讨论与小结

（1）经过流行病学调查、剖检变化、血清学检查、琼脂扩散沉淀试验、细菌分离、病毒分离等试验方法，证实了该鸡场发生了禽脑脊髓炎。（2）AE的特异性抗体检测方法有很多，如病毒中和试验(VN)、鸡胚敏感试验(EST)、琼脂扩散沉淀试验(AGP)、免疫荧光试验(FA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等，但目前常用的实验室诊断方法是AGP，AGP方法比其它的方法更简单、更直观。据秦爱建[4]证明感染的雏鸡5日龄即可用琼脂扩散沉淀法测出抗体；以灭活油佐剂苗免疫成年母鸡，在20d后即可用琼脂扩散沉淀法测出抗体；如用活疫苗接种鸡，发病鸡2d后即可用琼脂扩散沉淀法测出抗体，因此琼脂扩散沉淀法在AE的检测出不失为一种快速、特异而实用的诊断方法。（3）由于体表及内脏器官一般无明显的肉眼变化，唯一的病雏胃肌有小的灰白区，有浸润的淋巴细胞团块所致，这种变化不明显，需要进行病理学检查，而成年鸡则看不到。（4）AE可水平传播，又可垂直传播。幼鸡或成鸡感染后病毒在肠道内增殖，3周内病毒随粪便排出体外，污染养鸡环境，病毒对外界环境有强的抵抗力。较长时间内保持感染，通过污染饲料、饮水、用具、人员等水平传播。经口感染，也可通过尘埃，经呼吸道感染，产蛋母鸡感染后，3周内所产的蛋带有病毒。AE病毒难以根除，所以应认真的做好预防工作。该病预防主要有2个方面：一是平时的综合性防疫工作，二是免疫接种。种鸡群在生长期接种疫苗，保证其在性成熟后不被感染，以防止病毒通过蛋源传播，是防制AE的有效措施。母鸡开产前1个月饮水免疫使母鸡在开产前获得免疫力，母源抗体经卵传给子代，保护雏鸡不发病。

[1]黄骏明.禽脑脊髓炎[J].中国畜禽传染病, 1994,4: 57-60.

[2]蔡宝祥等主编.动物传染病诊断学[J].南京: 江苏科学技术出版社, 1993, 570-512.

[3]赵心力等.家禽传染病[J].中国家禽传染病,1995, 2:3-7

[4]秦爱建等.禽脑脊髓炎病毒琼扩抗原的制备及其在评价鸡群抗体水平中的应用[J].中国兽医科技, 1994, 24:5-6.