五味子多糖质量浓度测定及生物活性研究

王 瑶,张彦飞,贡济宇

(长春中医药大学药学院,长春130117)

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实[1]。具有敛肺滋肾、生津敛汗、宁心安神之功。现代研究认为具有保肝、增强免疫、抗衰老等作用[2-5]。本文就五味子多糖含量及生物活性进行研究。报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料与试剂 五味子药材(购于吉林大药房),乙醇、硫酸亚铁铵、水杨酸、过氧化氢(北京化工厂);抗坏血酸(湖北恒硕医药有限公司),均为分析纯。

1.1.2 主要设备 紫外-可见分光光度计TU1810(北京普析通用仪器有限责任公司);电子分析天平AB135-S(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);恒温水浴锅HH-S数显(郑州佳创仪器设备有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 五味子多糖的提取 将五味子药材粉碎过40目筛,称100.0g,加入 6倍量的蒸馏水,煎煮2次,每次4h,合并液体,过滤2次,将液体醇沉12 h后离心得沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗脱即得多糖[2-3]。

1.2.2 方法学考察

1.2.2.1 供试品溶液的配制 精密称取样品10.06 mg,置50 mL容量瓶中溶解并定容至刻度。即得浓度0.20 mg/mL的溶液。

1.2.2.2 标准品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的葡萄糖6.32 mg,蒸馏水溶解于100 mL容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.063 2 mg/mL的葡萄糖。

5%苯酚溶液：称取苯酚5 g,用100 mL蒸馏水,超声溶解,待用。

1.2.2.3 标准曲线的绘制 精密吸取标准液0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.4、1.8 mL 分别置于具塞管中,各补水至2 mL。再加5%苯酚液1.0 mL摇匀,滴加浓硫酸6.5 mL,混匀后置沸水浴加热30 min,冰水浴15 min,另以蒸馏水1.0 mL,同上操作做空白对照,于紫外486 nm处测定吸收度(Abs)。以标准品(μ g)为横坐标,Abs为纵坐标,得回归方程C=0.006 4 X+0.005 8,r=0.999 0。说明标准品量在 0～130 μ g范围内,与Abs呈良好的线性关系。

1.2.2.4 精密度测定 取0.20 mg/mL的样品溶液1.0 mL,按“标准曲线的绘制”项下测定Abs值,测定6次,样品溶液Abs平均值约为0.123,RSD为0.18%,表明此方法精密度良好。

1.2.2.5 重现性测定 精密量取0.20 mg/mL样品溶液1.0 mL 3分,分别按“标准曲线的绘制”项下测定Abs,重复测定3次。平行测定的3分样品溶液,其测定结果所得RSD为0.69%,在实际要求的范围内,重现性较好。

1.2.2.6 稳定性测定 取“重现性项下”3分供试品分别于显色后 0、5、15、30、60、120 min 测定 Abs,样品溶液在120 min内的测定结果RSD为0.69%,表明样品在120 min内具有良好的稳定性。

1.2.2.7 加样回收率测定 取已知质量浓度的供试样品分别添加标准品,按上述测定条件测定,计算回收率。参考加样回收试验法,精密量取0.20 mg/mL样品溶1 mL,按加样比例精密加入葡萄糖标准品溶液,制备低、中、高剂量组,每组平行3分,按“1.2.2.3标准曲线的绘制”项下测定Abs,计算回收率和RSD值,考察方法的准确性与可行性。平均回收率为99.99%,RSD为1.76%,表明此方法具有较好的回收率。

1.2.3 质量浓度测定 称取上述处理好的样品溶液1.0 mL于10 mL具塞试管中加蒸馏水至2.0 mL,5%苯酚1.0 mL,加浓硫酸6.5 mL,混匀后置沸水浴加热30 min,冰水浴15 min,486 nm进行测定。测定其Abs值0.124,用标准曲线得浓度为0.006 6 mg/mL,即多糖为13.3%。

1.3 测定方法 在10 mL具塞试管中,依次精密加入7.5 μ mol/L 硫酸亚铁铵溶液1 mL 、7.5 μ mol/L 水杨酸溶液 1 mL、样品溶液 1 mL,充分混匀,再加入0.01%过氧化氢溶液0.15 mL,混匀,37℃恒温水浴作用30 min后,终止反应,于510 nm波长处测定吸光度,蒸馏水为阴性对照,平行测定3次[4]。清除率公式为：清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

1.4 实验结果 五味子多糖对清除羟基自由基活性的清除作用,在试验浓度范围内五味子多糖对清除羟基自由基活性的清除能力随浓度的增加而逐渐增强。

2 小结

本试验通过体外实验证明了五味子多糖具有抗氧化活性,为临床应用提供了一定的理论基础,但生物体内多糖的抗氧化作用途径更为复杂,还有待作进一步的研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科学技术出版社,2010：61.

[2]王茹,张琰,程建峰.五味子活性成分提取工艺的优选[J].华南国防医学杂志,2005,19(6)：4-6,47.

[3]李艳艳,张秀荣.北五味子有效成分提取分离方法的研究进展[J].吉林医药学院学报,2008,29(4)：230-232.

[4]孙瑾,王宗举,陈岗,等.橄榄中多酚类物质体外抗氧化活性研究[J].中国食品添加剂,2010(3)：69-73.