葛根芩连汤煮散颗粒与传统汤剂煎煮效率比较研究

徐晓秋,傅超美,卢君蓉,盛菲亚,高 飞,季宁平

(成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川 成都 610075)

葛根芩连汤煮散颗粒与传统汤剂煎煮效率比较研究

徐晓秋,傅超美,卢君蓉,盛菲亚,高 飞,季宁平

(成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川 成都 610075)

为对比研究葛根芩连汤煮散颗粒与其传统汤剂的煎煮效率,采用单因素试验法,以不同煎煮时间点煮散颗粒和传统汤剂煎液中葛根素的煎出量和其干膏收率为指标,用综合加权评分法对煎煮效率进行评价,并绘制煎煮曲线.结果表明:煎煮5～60 min过程中,煮散颗粒的煎出效率均高于同时间点传统汤剂的煎出效率,且两者之间均具有极显著性差异.结论:本试验表明煮散颗粒具有节省药材与时间的优点,为煮散颗粒后续开发提供试验基础.

葛根芩连汤;煮散颗粒;葛根素;干膏收率

0 引 言

基于节约中药资源、提高中药饮片煎出效率、保证临床疗效的思路,在传统中药煮散的形式上融合现代制剂技术,不添加任何外加辅料,将传统饮片制成煮散颗粒,并以《伤寒论》中的经典名方——葛根芩连汤为代表,探索复方煮散颗粒与其传统汤剂的煎煮效率对比关系,拟为临床合理运用煮散颗粒提供试验基础数据.

1 仪器与试药

1.1 仪 器

实验所用仪器包括:SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪(岛津公司),Sartorius-BS110S分析天平(赛多利斯公司),DJ灵巧型粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司),DZKW-4型电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司).

1.2 试 药

实验所用试药包括:葛根饮片(批号,1108025)经鉴定为豆科植物野葛的干燥根,黄芩饮片(批号,1106102)经鉴定为唇形科植物黄芩的干燥根,黄连片饮片(批号,1105114)经鉴定为毛茛科植物黄连的干燥根茎,炙甘草饮片(批号,0902216)经鉴定为豆科植物甘草的干燥根和根茎,以上饮片均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司;葛根煮散颗粒(批号,12041201),黄芩煮散颗粒(批号,12041202),黄连煮散颗粒(批号,12041203),炙甘草煮散颗粒(批号,12041204)均为实验室自制;葛根素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号,0752-9806);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 制备方法

1)按照葛根芩连汤一日处方剂量缩小2倍量,分别取葛根煮散颗粒10 g,黄芩煮散颗粒3.75 g,黄连煮散颗粒3.75 g,炙甘草煮散颗粒2.5 g,精密称定,共10份,分别加入10倍量水,浸泡30 min,取5份样品分别煎煮 5、10、15 、20、30 min,滤过 ,滤液定容至500 mL,备用.另外5份样品煎煮30 min,滤过,收集滤液备用,滤渣中加入10倍量水分别煎煮5、10 、15、20 、30 min,滤过 ,合并滤液 ,定容至500 mL,得到煮散颗粒煎液样品,备用.

2)取葛根饮片10 g,黄芩饮片3.75 g,黄连饮片3.75 g,炙甘草饮片2.5 g,精密称定,共10份,按“煮散颗粒煎液”制备方法制备,得到传统汤剂煎液样品,备用.

2.2 不同煎煮时间点葛根素煎出量测定

2.2.1 液相色谱条件与系统适用性实验[1].

通过实验确定液相色谱条件与系统适用性为:色谱柱 ,Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm,5 μ m);流动相 ,甲醇 —水(25∶75);检测波长,250 nm;流速,1 mL/min;柱温,30℃.理论板数按葛根素峰计算应不低于3 000.

2.2.2 对照品溶液的制备.

取葛根素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含 53.5 μ g的溶液,即得 .

2.2.3 供试品溶液的制备.

分别取“2.1”项下各样品溶液,摇匀,用0.45 μ m微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液.

2.2.4 线性范围的考察.

精密吸取葛根素对照品溶液,进样体积分别为1、2 、4、6、8、10 μ L,记录峰面积值,以峰面积(Y)为纵坐标,对照品进样量(X)为横坐标绘制标准曲线,得到回归方程为,

结果表明,在 5.35 ～ 53.5 μ g/mL 范围内,葛根素峰面积与进样量呈良好线性关系.

2.2.5 精密度试验.

精密吸取葛根素对照品溶液10 μ L,重复进样6次,测定葛根素色谱峰峰面积,计算得到葛根素峰面积RSD为1.15%,表面仪器精密度良好.

2.2.6 稳定性试验.

取同一供试品溶液,分别于 0、2、4、6、8、10、12 h各进样 10 μ L,计算得到葛根素峰面积 RSD为1.98%,表明供试品溶液在12 h内稳定性良好,能满足测定要求.

2.2.7 重复性试验.

按“2.2.3项下供试品溶液的制备”方法平行制备供试品溶液6份,分别进样 10 μ L,记录葛根素色谱峰峰面积并计算其煎出率,计算得到葛根素煎出率RSD为1.91%,表明本实验方法重复性良好.

2.2.8 加样回收率试验.

精密称定葛根芩连煮散颗粒共6份,分别精密加入葛根素对照品溶液(53.5 μ g/mL)1 mL,按“2.1项下煎煮15分钟的供试品溶液制备方法”进行制备,分别进样 10 μ L,测定葛根素煎出率,计算回收率,其平均回收率为98.77%,RSD为1.71%,表明本实验方法可靠,符合含量测定的要求.

2.2.9 供试品溶液的含量测定.

参照《药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法,分别精密吸取各供试品溶液10 μ L,注入液相色谱仪,依次进行含量测定并计算葛根素煎出量,试验结果见表1,色谱图见图1、图2.

图1 葛根素对照品色谱图

图2 葛根芩连汤色谱图

2.3 不同煎煮时间点干膏收率测定

分别精密吸取“2.1”项下各样品溶液100 mL,置于已恒重的蒸发皿中,水浴挥干,残渣于105℃烘箱干燥至恒重,取出,移置于干燥器中,冷却后,迅速精密称定,计算干膏收率,结果见表1.

2.4 煎出曲线绘制

选择葛根素煎出量和干膏收率为评价指标,采用综合加权评分法对葛根芩连汤煮散颗粒和其传统汤剂不同时间点的煎出效率进行评分,绘制煎出曲线.葛根素煎出量(A)作为主要评价指标,权重系数相应较高,以0.6为宜;干膏收率(B)是煎煮工艺的参考指标,能侧面反映饮片的煎出效率,综合评价时权重系数相应较小,以0.4为宜,计算公式为,

综合评分结果见表1,煎出曲线见图3.

表1 不同煎煮时间点煮散颗粒与传统汤剂煎煮效率比较(n=3)

图3 葛根芩连汤煮散颗粒与传统汤剂煎出曲线比较结果

2.5 结 果

由表1、图3分析可知,在5～60 min的煎煮过程中,不同时间点煮散颗粒煎液中的葛根素煎出量和干膏收率均高于传统汤剂,且具有极显著性差异(P＜0.01).通过试验可知,煮散颗粒煎液中葛根素的最大煎出量为25.41 mg,而传统汤剂的最大煎出量为19.02mg;以葛根素煎出量为评价指标,煮散颗粒的煎煮效率较传统汤剂提高了33.59%,以干膏收率为评价指标,煮散颗粒的煎煮效率较传统汤剂提高了27.29%,从综合评分出发,煮散颗粒的煎煮效率较传统汤剂提高了31.01%.

3 结 论

研究发现,单味饮片制备成煮散颗粒之后,其浸提效果相较于传统饮片有显著提高[2-5].中药浸提过程的渗透及扩散阶段受药材粒度影响较大,饮片粉碎后粒径大幅度减小,溶剂更易于渗入颗粒内部,成分扩散速率增大,浸提过程加快.此为煮散颗粒能显著性提高饮片煎出效率的科学内涵[6].

葛根芩连汤全方重用葛根为君,黄连、黄芩为臣,甘草调和诸药,是为佐使.本试验依循方解选择葛根素的煎出量为主要考察指标,同时以干膏收率的测定为辅佐,对比研究煮散颗粒与传统汤剂煎煮效率.研究表明,从葛根素煎出量和干膏收率的角度出发,葛根芩连汤煮散颗粒煎出效率明显高于其传统汤剂,在一定程度上表明了煮散颗粒具有显著提高饮片利用率和减少煎煮时间的优点.需说明的是,本研究主要评价指标稍显单一,还应对煮散颗粒和传统汤剂的药理药效进行研究,此有待后续研究完善.

[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 郑为骞,傅超美,胡慧玲,等.陈皮现代饮片与传统饮片煎出效果对比研究[J].中药与临床,2011,2(3):36-38.

[3] 林俊芝,傅超美,毛茜,等.黄柏饮片与煮散颗粒在不同煎煮时间点盐酸小檗碱含量和干膏收率的比较[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(12):41-43.

[4] 马雪玮,傅超美,刘婧,等.干姜煮散颗粒与传统饮片在不同煎煮时间点干膏收率与6-姜辣素含量的对比研究[J].成都大学学报(自然科学版),2012,31(2):121-123.

[5] 毛茜,傅超美,林俊芝,等.牛蒡子饮片与粉末煎煮过程中牛蒡苷含量变化的比较研究[J].中药与临床,2012,3(1):15-17.

[6] 张兆旺.中药药剂学[M].北京:中国中医药出版社,2003.

Comparative Study on Decoction Process of Zhusan Granule and Traditional Decoction of Gegenqinlian

XUXiaoqiu,FU Chaomei,LU Junrong,SHENGFeiya,GAO Fei,JI Ningping
(Pharmacy College,The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)

To compare the efficiency of decoction process between gegenqinlian zhusan granule and it's traditional decoction,we adopted the single factor test.The content of puerarin and yield of dry extract were used as indexes.We analyzed the data by the comprehensive evaluation of multiple marks and drew curve of decoction process.The results showed that both the yield of dry extract and the content of puerarin at different time points from the zhusan granule were greatly more than its traditional one during the whole 5～60 minutes decoction process,and there was a significant difference.The study shows that the zhusan granule has the advantages of saving material and time,providing experimental basis for the subsequent development.

gegenqinlian decoction;zhusan granule;puerarin;yield of dry extract

R283.6

A

1004-5422(2013)01-0024-04

2012-12-17.

徐晓秋(1986—),女,硕士研究生,从事中药制剂新技术研究.