猪巴氏杆菌病的诊断和治疗

高君石

（江苏省常熟市海虞动物防疫站，江苏常熟 215500）

猪巴氏杆菌病的诊断和治疗

高君石

（江苏省常熟市海虞动物防疫站，江苏常熟 215500）

猪巴氏杆菌病也称猪肺疫，主要由多杀性巴氏杆菌引起，是一种急性、败血性传染病。病猪常表现为咽喉部急性肿胀或纤维素性胸膜肺炎症状，多因饲养管理不当造成。通过发病情况、临床症状、病料涂片染色、镜检、细菌分离培养、生化实验或动物实验等结果而确诊。本文通过江苏省常熟市某猪场的实际案例，介绍了该病的具体诊断方法及相关治疗手段。

猪巴氏杆菌；细菌培养；药敏试验；治疗

猪巴氏杆菌病主要由多杀性巴氏杆菌 （Pastenrella multocida） 而引起，是一种急性、败血性传染病，也称猪肺疫或猪出血性败血症。该病的主要特征为败血症，咽喉部急性肿胀或表现为纤维素性胸膜肺炎症状。猪巴氏杆菌病主要由B型菌株引起，呈散发性发生，多因饲养管理不当，环境寄生虫和其他细菌诱因等引发复合感染而发病，我国将其列为二类动物疫病。

多杀性巴氏杆菌为细小球杆菌，宽0.25～0.4 μm，长0.5～1.5 μm。单个存在，有时成双排列。革兰氏染色为阴性。本菌最适生长温度为37℃，pH 7.2～7.4。添加血液或血清时，则生长良好。在血液琼脂平板上培养，形成湿润、光滑、边缘整齐的圆形露珠样灰白色小菌落，有荧光，不溶血。在肉汤中培养呈均匀一致的中等度浑浊，有黏性沉淀物，培养久时，表面形成菌膜。在麦康凯和含有胆盐的培养基上不生长。本菌可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，产酸不产气。对乳糖、鼠李糖、杨苷、菊糖、肌醇不发酵[1]。

一般情况下，不同畜禽间不容易相互感染多杀性巴氏杆菌。健康猪上呼吸道中常带有此菌，但多半为弱毒或无毒的类型。由于猪群拥挤、圈舍潮湿、卫生条件差、通风不良、寒冷、闷热、阴雨连绵、气候骤变、长期营养不良、处于半饥饿、寄生虫病、长途运输等不良因素，降低了猪体的抵抗力，或发生某种传染病时，病菌乘机侵入机体内繁殖，而增强毒力，引起发病。这种以内源性感染为主的猪肺疫，成散发性发生。在自然条件下很少能传染另外的健康猪。当然，由于细菌通过发病猪体增强毒力后，仍可传染另外的健康猪，因此，不能忽视健康猪在传染来源上的作用。本病大多发生于中、小猪，成年猪患病较少。

江苏省常熟市某猪场一栋育肥舍猪只精神沉郁，厌食，有高热等现象，送检2头病重猪只至兽医工作站实验室检查，经发病情况、临床症状、病料的涂片染色、镜检、细菌的分离培养、生化实验及动物实验，诊断为猪巴氏杆菌病。通过药敏试验发现，病菌对氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星敏感，对多数药物耐药。选择高敏药物治疗病猪，病情很快得到控制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

将两头送检病猪处死，剖检，无菌采取血液、肺脏、肝脏等作为病原分离材料，根据需要剪取适当大小的组织块，盛于无菌容器内，在4℃条件下暂时存放，备用。

1.1.2 培养基

改良马丁氏琼脂（牛肉汤500 mL，改良猪胃消化液500mL，氯化纳2.5 g，琼脂20 g，pH 7.4～7.6，灭菌30～40分钟）。麦康凯琼脂（蛋白胨17 g，猪胆盐5 g，氯化钠5 g，琼脂17 g，乳糖10 g，蒸馏水100 mL，0.01%结晶紫水溶液10 mL，0.5%中性红水溶液5 mL，pH 7.3～7.4），购于杭州微生物试剂有限公司。马丁氏肉汤（牛肉汤500 mL，猪胃消化液500 mL，氯化钠2.5 g，pH 7.2～7.6）。鲜血琼脂（每100 mL改良马丁氏琼脂加入家兔鲜血10 mL）。

1.1.3 革兰氏染色液

草酸铵结晶紫染液，A液：结晶紫2 g，95%乙醇20 mL；B液：卢戈碘液（碘片1 g，碘化钾2 g，蒸馏水300 mL，先将碘化钾溶解于少量水中，再将碘片溶碎在碘化钾溶液中，待碘全部溶解后，加足水份即成）；95%的乙醇溶液；番红复染液（番红2.5 g，乙醇100 mL，取上述配好的番红乙醇液10 mL与80 mL蒸馏水混匀即成）[2]。

1.1.4 生化发酵管

包括葡萄糖、半乳糖、蔗糖、甘露醇等发酵用的小试管，购于北京索莱宝科技有限公司。

1.1.5 药敏纸片

包括阿莫西林、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星等纸片，购于哈尔滨华通医疗设备公司。

1.1.6 实验动物

20～25 g健康小白鼠4只。

1.2 方法

1.2.1 细菌的分离

先用烧灼灭菌的手术刀片烧烙组织表面，然后在烧烙处用刚才的手术刀片切开组织，用灭菌的接种环在切开组织内挑取部分组织，分别划线接种于改良马丁氏琼脂平皿、麦康凯琼脂平皿、鲜血琼脂平皿；组织制成悬液接种于马丁氏肉汤小管培养基。采用连续划线法：右手持接种环，通过火焰灭菌，冷却后，在切开的组织内稍用力接触，左手持起培养基平板，先将环上组织涂于琼脂平板一角，然后用接种环自该部位开始，向左向右并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平行线，划线完毕后平皿倒置，36～37℃培养18～24小时。

1.2.2 细菌的纯培养

取出上述接种的鲜血琼脂平皿，选择典型的灰白色菌落做纯培养。用烧灼灭菌的接种环小心挑取单个菌落，移种于鲜血琼脂平板；用接种环先将培养物涂布在平板第一区并作数次划线，再在二、三、四区依次用接种环划线；每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一个区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落；划线完毕后倒置，37℃恒温需氧培养18～24小时后，于4℃条件下存放。

1.2.3 革兰氏染色镜检

用接种环挑取一环生理盐水于洁净玻片上，再用接种环挑取少量纯培养的细菌于玻片上的生理盐水混合，并均匀涂布于玻片上，自然干燥用火焰固定；在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液,作用1～3分钟，水洗；加卢戈碘液于玻片上媒染，作用1分钟，水洗；再加95%的酒精脱色，作用15～30秒，水洗；加番红复染液复染1分钟，水洗，自然干燥后镜检[2]。

1.2.4 生化实验

进行糖（苷、醇）类发酵实验，实验方法与结果判定方法如下：无菌操作，用接种针取纯培养的待检菌接种于各糖类微量发酵管，倒置37℃温箱内培养18～24小时后观察结果。如细菌能分解此种糖类产酸，则指示剂呈酸性变化，发酵管中颜色发生改变；不分解此种糖类，则无颜色变化；产气可使倒置的小管内出现气泡。

1.2.5 药敏实验

将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内细菌生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度[3]。

具体操作与结果判定方法如下：①于纯培养平皿上，挑取单个菌落均匀涂布于鲜血琼脂平板内；②用无菌小镊子夹取各种药敏纸片，平贴于琼脂表面，各距离要相等，每张纸片的间距不小于24 mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15 mm，然后倒置于37℃培养24小时；③平板取出后，仔细观察药敏纸片周围有无抑菌圈形成，根据抑菌圈直径的大小可判定菌株的各药敏纸片的敏感性。

1.2.6 动物实验

将病料研磨成糊状，加10倍灭菌生理盐水稀释成悬液，用此悬液皮下注射3只小白鼠，每只0.2 mL，并观察结果。

2 结果

2.1 细菌分离结果

培养18～24小时后，改良马丁氏琼脂平皿生长纯粹的培养物，有圆形、灰白色、湿润的露珠状菌落。马丁肉汤培养物生长开始轻度混浊，4～6小时后液体清亮，管底出现粘稠沉淀，震摇后不分散，表面形成菌环。鲜血琼脂平皿上长出单个菌落，菌落周围不溶血，肉眼观察为光滑圆整、半透明、灰白色。麦康凯琼脂平皿上不生长。

2.2 革兰氏镜检结果

镜检看见两端钝圆浓染的革兰氏阴性球杆状菌，初步确定为巴氏杆菌。

2.3 糖 （苷、醇）类发酵实验结果

3个平行实验的结果见表1。

2.4 药敏结果

药敏结果见表2。

2.5 动物实验结果

接种的3只小白鼠均在24～48小时内死亡，对照小白鼠在2～3天内无

表1 糖 （苷、醇）类发酵实验结果

表2 药敏结果

明显变化，剖检取3只死亡小白鼠的肝组织分别做涂片，按上述方法进行革兰氏染色，镜检下发现大量两端钝圆革兰氏阴性的细小球杆菌。

3 诊断

根据流行病学、临床症状、实验室诊断等综合分析，确诊为猪巴氏杆菌病。

4 治疗

隔离发病猪只，进行专人饲养，全场用10%的石灰乳或3%的氢氧化钠进行消毒。

对发病猪采用高敏药物，选用氟苯尼考注射液或恩诺沙星注射液进行治疗。部分病猪肌肉注射氟苯尼考注射液，按每公斤体重10～20 mg，隔48小时一次；另一部分肌肉注射恩诺沙星注射液，按每公斤体重2.5 mg，每日1～2次。对少数高热病猪肌肉注射10%安乃近注射液，每次每头5～10mL。

在未发病猪群的饲料中添加环丙沙星（每50 kg水中添加30 g，每日两次）、氟苯尼考（每1 000 kg饲料中添加200～300 g，每日两次）等药物混饮、混饲。

加强饲养管理，连续用药，对环境差的育肥猪舍进行整顿，注意保温与通风，增强猪体抵抗力。

三周后育肥猪舍病情已基本稳定，没有新的病例发生，大部分猪的精神与进食恢复正常，少数病猪仍有慢性呼吸道感染症状。随后进行全群免疫，皮下注射猪肺疫氢氧化铝菌苗（5 mL/头）。直至所有育肥猪成熟上市，该场未发生相同病例。

5 分析

由于巴氏杆菌为条件性致病菌，所以猪群拥挤、卫生条件差、通风不良、寒冷、气温骤变等因素都可导致猪群机体抵抗力下降，病原菌侵入机体几率加大。此次发病可能是一栋育肥猪舍环境简陋，导致猪群抵抗力下降而传染给另外的猪群。

对于此病猪场应及早发现，及早治疗，以免引起继发感染，引发其他呼吸道疾病，造成较大的经济损失[4]。

治疗猪肺疫的药物常常花费很高，且效果不佳。因而预防本病尤为重要，应从加强饲养管理，改善饲养环境和减少细菌传播等方面入手。主要有以下几点：做好早期断奶和隔离；做好圈舍消毒和清洁卫生工作，可选用烧碱、生石灰、百毒杀等消毒药物，消除降低猪抵抗力的因素，防止疾病发生；加强场内人员管理，各个舍的饲养员不准互串岗位，兽医人员分岗位管理；尽量减少混群和分群及猪群的密度；病死后猪的尸体消毒后妥善处理；猪场不应从外地盲目引进生猪，对引进的生猪应进行7～15天的隔离观察，待稳定后要及时进行猪肺疫单苗的免疫。

每年春秋两季定期用猪肺疫疫苗进行免疫接种。方法有三：一是用猪肺疫氢氧化铝疫苗5 mL/头进行皮下注射，14天后产生免疫力，免疫期为6个月，半月内禁用抗生素；二是口服猪肺疫弱毒冻干菌苗，7天后产生免疫力，免疫期为6个月，1周内禁用抗生素；三是注射猪肺疫免疫血清，使用预防注射量，即仔猪20mL/头，中猪30 mL/头，大猪40 mL/头[4]。

本次试验中药敏试验结果表明，巴氏杆菌对阿莫西林、青霉素、复方新诺名、链霉素、卡那霉素、四环素低度敏感，对恩诺沙星、环丙沙星、氟苯尼考高度敏感。通过药物试验筛选经济、疗效好、高敏的药物进行治疗，既可以取得良好的治疗效果，又可为该病的治疗提供参考依据。

[1]赵占民.动物传染病学.北京:中国农业科技出版社，1996:193-196

[2]孙彬,徐益斌,徐连均.雏鸡沙门氏菌的分离、鉴定以及药敏试验.北京农业,2008, 30:32-34.

[3]李沂轩.阴道加德纳菌与细菌性阴道病相关性研究:[硕士论文].天津:天津医科大学,2006.

[4]陶春中,霍文明.猪肺疫的诊断与治疗.动物科学与动物医学,2005,22(1): 52-53.

S858.28

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1673-4645(2013)06-0046-03

2013-01-23