科技进展

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饲料中喹乙醇ELISA检测试剂盒的研制及性能分析

喹乙醇是一类广谱抗菌药，但由于能使动物发生中毒或死亡，还会在畜产品中残留，国家规定禁止用于家禽及水产养殖，只能限量用于体重低于35 kg猪的饲料。为了研制快速检测饲料中喹乙醇的ELISA试剂盒（OLA-Kit），该研究用喹乙醇单克隆抗体（OLA-mAb）建立间接竞争ELISA方法，组装OLA-Kit，并对试剂盒的性能进行评估。结果表明：OLA-Kit的标准曲线呈典型的反S型，相关系数R2=0.976 7，线性范围为1～243 μg/L，半数抑制浓度（IC50）为（14.29± 3.75）μg/L，检测限为0.79 μg/L，定量限为4.0 μg/L，临界值（猪饲料）为83.37 μg/g，基质对该试剂盒的检测结果影响不大；猪、鸡、鱼饲料的不同浓度添加回收率均大于74.40%，平均批内和批间变异系数均小于15%；试剂盒与喹胺醇的交叉反应率（CR%）为17.93%，与MQCA、QCA及其他喹喔啉类药物几乎无反应性，可在2～8℃保存6个月以上；OLA-Kit与HPLC法测定猪饲料中喹乙醇添加回收率没有显著差异（≥0.05）。本研究成功研制出敏感、特异、准确的喹乙醇ELISA检测试剂盒，可用于饲料中该药物的快速检测和批量筛查。

本刊摘自：张景艳，王磊，李建喜，等.饲料中喹乙醇ELISA检测试剂盒的研制及性能分析.畜牧兽医学报，2013，44(8):1297-1304.

潜流人工湿地对畜禽养殖废水的净化效果

为了提高潜流人工湿地对畜禽养殖废水中污染物的去除效果，该试验通过改变湿地内部结构构建了4个潜流人工湿地单元，选用灰砖块和碎石做湿地填料，冬夏季轮作栽培齿果酸模和大狼把草，考察湿地运行期间对厌氧消化后猪场废水的净化效果。结果表明：湿地单元经过80天的启动，运行稳定，有植物湿地比无植物对照湿地提前10天左右进入稳定期。运行期间，各湿地单元对废水中氨氮（ammonia nitrogen，NH4+-N）、总氮（total nitrogen，TN）、总磷（total phosphorus，TP）和化学需氧量（chemical oxygen demand，CODCr）的去除率与气温变化均呈现显著线性正相关。在水力停留时间（hydraulic retention time，HRT）为4天，进水中CODCr、NH4+-N、TN、TP浓度分别为520、 110、120、10 mg/L左右时，4个湿地单元对CODCr、TP的去除率分别在60%和70%以上，对NH4+-N和TN的去除率分别为28%～67%和32%～58%，植物对CODCr及TP去除的贡献分别稳定在10%和4%左右，植物对氮的去除效果受气温影响较大，夏季对NH4+-N和TN去除的贡献分别可达13%和12%。与一般潜流人工湿地比较，改进的波形潜流人工湿地对NH4+-N、TN和CODCr的平均去除率提高均在3%以上，对TP去除效果差异不显著（ ＞0.05）。该研究可为构建大规模的潜流人工湿地处理畜禽养殖废水提供理论依据和技术支持。

本刊摘自：张彩莹，王岩，王妍艳.潜流人工湿地对畜禽养殖废水的净化效果.农业工程学报，2013，29(17): 160-168.

营养对母猪肢蹄健康的影响

母猪跛行由多种因素引起，主要与骨质再建、软骨代谢以及角质物再生过程中的机能障碍有关，造成跛行的母猪蹄病变有多种（图1）。本文讨论了日粮组成尤其是维生素和矿物质，是如何影响骨、关节软骨以及角质物的生长过程。

对于骨重建过程中，糖类、蛋白质和氨基酸的作用还不清楚。常量元素Ca、P和维生素D非常重要。Mg可能与Ca、P一样重要。饮食缺陷或者摄入过多有毒矿物质Zn、Cu、Mn和F可能不利于骨质重建。

图1 不同类型的母猪蹄病

关节软骨的形成依赖于弥散性的营养供给。蛋白多糖和胶原合成缺陷是关节软骨相关紊乱症的前兆。添加氨基酸，尤其是结合使用微量元素Cu和Si可减少软骨病的发生率，减轻病情严重程度，然而尚未有有力证据证明常量元素在关节软骨形成过程中的特殊作用。摄入微量元素Zn、Mn和Fe可在一定程度上减轻这些紊乱症的严重性。

弥散性的营养供给对于角质物的形成也是至关重要的。尤其是含硫氨基酸如半胱氨酸对于角质化作用很重要。适宜的日粮、常量以及微量元素的弥散性供给可直接或间接激活角蛋白和细胞间粘合物质合成过程中所需的相关酶。补充生物素同时结合矿物质有助于角质物的生成。

总之，营养水平是母猪跛行的重要诱因，可影响骨、软骨和角质物的质量，其调控机制是复杂的，尚不清楚。各营养组份往往是相互作用的，必须平衡供给。因为营养摄入不足或过量均会干扰骨、软骨和角质物的生成过程。（王亚辉编译，译自《畜牧业科学》）

译自：Van Riet MMJ,Millet S,Aluwé M,et al.Impact of nutrition on lameness and claw health in sows.Livestock Science,2013,156(1-3):24-35.

PCV2疫苗和PRRSV疫苗联合免疫对自然感染猪的特异性免疫保护效果研究

本研究旨在评估PCV2疫苗和PRRSV疫苗联合免疫对野毒感染猪的免疫保护效果。试验选取4周龄的仔猪800头，随机分为4组，每组200头。A组通过肌肉注射的方式同时接种PRRSV-1型毒株弱毒活疫苗和PCV2a型毒株重组Cap蛋白亚单位疫苗，B组和C组分别单独接种PRRSV疫苗和PCV2疫苗，D组为佐剂对照组。临床评分（发病率）、死亡率和平均日增重作为评价指标。分析了病毒血症、病毒特异性ELISA抗体水平以及通过酶联免疫斑点法（ELISpot）测定了IFN-γ分泌细胞介导的免疫力。PRRSV感染引起的临床症状持续8周时间，而PCV2感染则持续了5个月之久。结果表明，联合免疫减轻了临床症状，增加了预防分数（40.4%）和平均日增重。在联合免疫组，由于感染尤其是圆环病毒2型引起病毒血症的猪只死亡率降低了3倍。接种PRRSV疫苗并不能减轻PRRSV引起的病毒血症，但联合或单独接种PCV2疫苗可以降低PCV2病毒载量的水平。尽管有母源抗体存在，动物在接种疫苗和感染野毒后，仍然进行了快速的血清抗体转化。另外，在单独或联合免疫组，母源抗体并不干扰动物特异性IFN-γ分泌细胞的反应。研究表明，在动物感染病毒后，同时接种PRRSV疫苗和PCV2疫苗，不会干扰特异性的体液免疫和细胞免疫反应，不会影响临床保护力。（王亚辉编译，译自《兽医微生物学》）

译自：Martelli P,Ardigo P,Ferrari L,et al.Concurrent vaccinations against PCV2 and PRRSV:study on the specific immunity and clinical protection in naturally infected pigs.Veterinary Microbiology,2013,162(2-4):558-571.

基于荧光原位杂交法检测猪结肠组织中的汉普森细螺旋体

猪痢疾一般是由呈强β-溶血的猪痢疾短螺旋体感染引起。然而，最近美国和加拿大报道，在猪痢疾临床病例中分离出一种新的病原汉普森细螺旋体（B.hampsonii）。用微生物法来检测临床样本中的短螺旋体是高度灵敏的，但培养过程需要数天，随后还需进行分子水平上的分析。利用分子探针在经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片上进行原位杂交，该方法可观察、鉴定目标分子在细胞组织中的分布，简单快速，无需微生物培养。基于上述原理，建立了检测猪痢疾临床样品中B.hampsonii的荧光原位杂交方法。在对若干种短螺旋体进行基因序列比对分析后，设计了针对B.hampsonii 23s rRNA特异性序列的寡核苷酸探针Hamp 1210。对于临床分离株，在GenBank中有相应的参考序列。应用探针Hamp 1210以及先前报道的针对病变结肠组织中B.hyodysenteriae的探针Hyo 1210成功检测了人工感染猪和田间自然感染猪的体内目标微生物，而且B.hampsonii的进化支I和II均可通过探针Hamp 1210检出。然而在利用Hamp 1210探针检测受中间短螺旋体感染的组织时，在一例样本中出现了强阳性信号。利用探针Hamp 1210对猪痢疾B. hampsonii感染的猪结肠组织福尔马林固定切片标本进行原位杂交测定，可以缩短从样本送检到病原鉴定的时间间隔。（王亚辉编译，译自《兽医诊断调查杂志》）

译自：Burrough ER,Wilberts BL,Bower LP,et al.Fluorescent in situ hybridization for detection of"Brachyspira hampsonii"in porcine colonic tissues.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation,2013,25(3):407-412.