帕罗西汀对大鼠海上灾害创伤后应激障碍的影响

贺顺龙，谢培增，汪先兵，周赤龙，朱 晖

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)是对创伤等严重应激因素的一种异常精神反应。在平时的陆地灾害中，普通人群PTSD的患病率为7% ～12%［1］。随着海洋科学和航海事业的发展，平战时海上灾害急剧增加，海上灾害PTSD的患病率比陆地高而严重［2］。本研究建立海上创伤后应激障碍(maritime post-traumatic stress disorder，MPTSD)动物模型，选用不同剂量帕罗西汀进行干预，探讨海上应激后帕罗西汀(paroxetine)对大鼠MPTSD的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

动物:健康雄性 Sprague-Dawley大鼠50只，体质量(200±20)g。光亮/黑暗周期为12 h/12 h，环境温度为22～25℃，相对湿度60%，分笼饲养于塑料笼中(50 cm×30 cm×20 cm)，常规摄食摄水，饲养1周后开始实验。根据动物的应激状况和帕罗西汀用量的不同，将实验动物按数字表法随机分为5组:空白对照组(空白组，不予应激和不给药)、海上应激组(应激组，予以应激，不给药)、单纯用药组(单纯组，不予应激，但给帕罗西汀3 mg/(kg·d))、常规剂量组(常量组，予以应激，帕罗西汀3 mg/(kg·d))、大剂量组(大量组，予以应激，帕罗西汀10 mg/(kg·d))，每组10只。

1.2 动物模型的建立

1.2.1 实验条件 海上气温(Ta)(32±5)℃，相对湿度(RH)(92.3±6.0)%;海上风力4 ～6 级;海面浪高3～5 m。全部实验在医院船航行中进行，舰船摇摆度15°～30°。

1.2.2 动物的应激方法 首先对大鼠进行2 h的紧密束缚［3］，随后将大鼠放进直径为30 cm，高50 cm的圆形透明玻璃缸，内装入40 cm高的海水(NaC1 含量25.3 g/L，pH 8.1，渗透压 1250 ～1350 mmol/L，平均水温21～23℃)，玻璃缸固定放在医院船甲板上，强迫游泳20 min，休息15 min后乙醚麻醉至意识丧失，在笼中不经任何打扰，常规喂养15 d。

1.2.3 药物应用 (1)药物配制:盐酸帕罗西汀配制成所需浓度 0.015 mg/ml［3 mg/(kg·d)］、0.3 mg/ml［10 mg/(kg·d)］。(2)用药方法:采用饮水给药，应激后当天单纯组、常量组、大量组按配制要求开始连续饮水给药15 d，空白组、应激组大鼠自由饮用自来水15 d。

1.3 行为测定

1.3.1 旷场实验［4］在应激结束后第15天进行测试，分析大鼠的活动次数、水平运动路程，各组间相互比较。

1.3.2 高架十字实验［5］应激结束后第15天进行测试，记录大鼠开臂停留时间以及大鼠进入开臂的次数等行为学指标，各组间相互比较。

1.3.3 MWM(morris water maze)水迷宫定位航行实验［6］测量平均上台潜伏期，在第 1、2、3、4、5 天分别重复上述步骤，各组内不同时间和各组组间相互比较。

1.3.4 MWM水迷宫空间探索实验［7］测量大鼠在靶象限活动时间的比率和穿台次数，各组间相互比较。

1.4 统计学处理

采用SPSS 12.0统计软件进行数据处理，实验结果采用均数±标准差(±s)表示，多组均数的比较采用方差分析，率的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠旷场实验结果

旷场实验中，应激组水平活动度和中央停留时间分别为(5748.56 ±519.16)mm 和(24.68 ±3.29)s，显著低于其他各组;大量组中央停留时间为(51.96±5.43)s］，高于其他组(F=6.927，P＜0.05)，单纯组与空白组和常量组相互比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.2 各组大鼠高架十字实验结果

在高架十字测试中，大鼠开臂进入次数和停留时间的百分比，应激组分别为(23.59±3.09)%、(14.58 ±3.19)%;大量组分别为 (49.59 ±5.58)%、(24.67 ±5.50)%，2 组参数分别与其他组相互比较差异均有统计学意义(F≥7.981，P＜0.05)。见表1。

2.3 各组大鼠MWM水迷宫定位航行实验结果

在MWM定位航行测试中，5组大鼠上台潜伏期均数值第1至第5天逐渐降低，后一天数值与前一天数值比较差异均有统计学意义(F≥11.686，P＜0.01)。5组组间第1～5天大鼠上台潜伏期均数都不相同，应激组潜伏期高于空白组、帕罗西汀常量组和大量组(F≥7.641，P＜0.05)，第2天起大量组与常量组比较差异有统计学意义(F≥7.641，P＜0.05)。见表2。

2.4 大鼠在MWM水迷宫空间探索实验结果

5组大鼠之间靶象限花费时间的百分比和穿台次数均不相同，应激组靶象限活动时间百分比和穿越站台次数显著低于其他4组(F≥7.641，P＜0.05)，大剂量组与常量组2项参数比较差异有统计学意义(F≥7.847，P＜0.05)，见表3。

表3 各组大鼠MWM水迷宫空间探索实验结果比较(每组n=10，±s)

表3 各组大鼠MWM水迷宫空间探索实验结果比较(每组n=10，±s)

注:与其他4组比较aP＜0.05;与常量组比较bP＜0.05

组别 靶象限花费时间的百分比(%) 穿越站台次数(次)63.91 ± 5.19 3.60 ±0.44应激组 39.40 ±4.63a 1.39 ±0.20a单纯组 60.33 ±4.58 3.76 ±0.40常量组 63.35 ±6.28 3.76 ±0.41大量组 56.53 ±5.84b 2.79 ±0.51空白组b

3 讨论

陆地灾害如地震、空难、瘟疫等重大灾难事件对人类来说是突发的，往往给人们带来严重的心理反应，由于其突发性、不可预测性，会导致个体产生无法抵御的感觉，引发一系列生理、心理和行为反应，如沮丧、紧张、焦虑和恐惧等［8］。海上灾害是指源于海洋的自然灾害和人为灾害，自然灾害主要有海浪、海冰、赤潮、海啸和风暴潮、龙卷风、台风等;人为灾害在海上主要有战争、碰撞、触礁、火灾与爆炸等。海上灾害伤员机体创伤主要特点是伤因多、伤情重、伤口受海水浸泡和海上其他因素所致的二次创伤等［9］;海上灾害伤员心理创伤主要有以下特点:由于海上灾害伤员机体创伤特点和海上灾害救生难点，伤员除灾害时的恐怖现场的应激外，还因落水后伤员在海水中挣扎求生，较长时间暴露在恐怖的海难场面中，可反复受到强烈的精神刺激［10］，表现出病理性重现、易激惹症状、持续性和警觉性增高和回避症状。本研究中观察到海上应激后大鼠症状表现严重。

表1 各组大鼠旷场实验、高架十字实验结果比较(每组n=10，±s)

表1 各组大鼠旷场实验、高架十字实验结果比较(每组n=10，±s)

注:与其他4组比较aP＜0.05

组别高架十字实验水平活动度(mm) 中央停留时间(s) 开臂进入(%) 开臂停留(%)旷场实验空白组 11 595.93 ± 1006.69 44.58 ± 5.26 44.58 ±5.26 22.60 ±2.78应激组 5748.56 ± 519.16a 24.68 ± 3.29a 23.59 ±3.09a 14.58 ±3.19a单纯组 11 973.27 ± 1382.96 49.28 ± 5.26 43.31 ±4.91 19.31 ±3.63常量组 10 817.59 ± 1082.56 50.29 ± 5.40 40.78 ±5.71 21.98 ±4.38大量组 11 119.81 ± 749.73 51.96 ± 5.43a 49.59 ±5.58a 24.67 ±5.50a

表2 各组大鼠MWM水迷宫定位航行实验结果比较(每组n=10，s，±s)

表2 各组大鼠MWM水迷宫定位航行实验结果比较(每组n=10，s，±s)

注:与其他4组比较aP＜0.05;与常量组比较bP＜0.05

组别 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天空白组 61.40 ±4.16 26.05 ±1.85 20.93 ±1.28 17.19 ±0.9612.09 ± 1.19应激组 62.69 ±3.74 42.53 ±1.94a 33.21 ±2.01a 22.20 ±1.89a 16.90 ±1.24a单纯组 59.21 ±5.19a 24.14 ±1.86 21.31 ±2.41 15.10 ±0.71 12.81 ±0.84常量组 62.35 ±6.35 33.89 ±2.19 25.64 ±2.00 17.29 ±1.59 12.64 ±0.90大量组 62.36 ±4.43 31.90 ±2.56b 23.83 ±2.40b 16.46 ±1.58b 11.76 ±1.79b

文献报道［11］，在陆地灾害 PTSD防治上，采用氟西汀、帕罗西汀、舍曲林治疗取得了较好的疗效。对PTSD的模型方面多采用电击模型、捕食情景应激模型和SPS等动物模型，对PTSD的检测方法多采用旷场实验、高架十字迷宫实验、MWM水迷宫实验、空间探索实验。旷场实验和高架十字迷宫实验可以正确反应大鼠的探究行为和焦虑、恐惧情绪。Morris水迷宫实验主要用于评价大鼠空间认知能力。本研究制作出MPTSD动物模型的目的是用于海上灾害PTSD的研究。本研究选择帕罗西汀对大鼠海上灾害PTSD进行治疗，是因为帕罗西汀是一种选择性5-HT再摄取抑制剂，常用剂量时，对其他递质无明显影响。帕罗西汀的药理作用是通过阻止5-HT的再吸收而提高神经突触间隙内5-HT的浓度，从而达到防治海上灾害PTSD的作用。实验观察看到:(1)给予应激而不给药的大鼠(应激组)，在旷场实验和高架十字迷宫实验中，大鼠水平活动路程、中央格活动时间均明显减少，在Morris水迷宫的定位航行实验和空间探索实验中，大鼠的上台潜伏期明显延长，穿台次数明显减少，均说明动物探究行为受到抑制，回避和恐惧、焦虑水平增高，环境适应能力下降和学习记忆功能降低。(2)不给予应激而给药大鼠(单纯组)的行为与空白组无明显差异，说明帕罗西汀对正常鼠的行为、学习记忆功能无明显的影响，提示帕罗西汀可作为PTSD的理想治疗用药。(3)给予应激后采用帕罗西汀干预(常量组和大量组)显示出较好的效果，应激后即开始给予不同剂量帕罗西汀进行干预，均能改善大鼠在各实验中的行为表现，活动度、中央格活动时间，改善大鼠在Morris水迷宫中的行为表现，提高大鼠的学习和记忆能力，且证明大量组多项参数明显优于常量组，说明帕罗西汀治疗海上灾害PTSD有较好疗效，且证明适当增加帕罗西汀的用量疗效更好。

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［2］ 姜新，谢培增，周赤龙，等.不同救治环境下海战伤救治的效果观察［J］.中华航海医学与高气压医学杂志，2008，15(6):339-342.

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