HPLC测定桂林西瓜霜胶囊中黄芩苷的含量

董建辉

（三金集团桂林三金生物药业有限责任公司，广西桂林541100）

桂林西瓜霜胶囊是由西瓜霜、黄芩、黄连、黄柏等数味中药研制而成的复方制剂，具有清热解毒、消肿止痛的功效。临床用于治疗肺胃热盛兼有风热或痰热所致咽喉肿痛、口舌生疮、牙龈肿痛或出血、急慢性咽炎、口腔溃疡等疾病。方中黄芩为臣药，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效[1]，能加强君药治疗咽喉诸疾之功效，含多种黄酮类成分，主要有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等，其中黄芩苷为黄芩中的主要活性成分[2-3]。为有效控制桂林西瓜霜胶囊的质量，保证临床用药安全有效，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定该药中黄芩苷的含量，以期为该药品质量标准的提高提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪（四元梯度泵，可变波长紫外检测器），Agilent 1200在线色谱工作站（Agilent）；HR-200电子天平（Mettler Toledo），SCQ-5201D超声仪（上海声彦超声波仪器有限公司）。

1.2 试药

黄芩苷对照品（原中国药品生物制品检定所提供，批号：110715-201016，供含量测定用）；桂林西瓜霜胶囊（三金集团桂林三金生物药业有限责任公司，批号：110302、110303、110304）；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex luna C18柱（250 mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）；检测波长：280 nm；柱温：40℃；流速：1.0 m L/m in；进样量：10μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品13.15 mg，加70%乙醇溶解并定容至25 m L，摇匀即得（每1 m L含黄芩苷0.526mg）。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取样品（批号：110304）0.5 g，置25 m L具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 m L，称定重量，加热回流40 m in，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，留取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

取缺黄芩阴性样品0.5 g，精密称定，按2.3项同法制得阴性样品溶液。

2.5 阴性干扰试验

分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，在上述色谱条件下，进行测定，结果样品分离效果良好，阴性无干扰（见图1）。

图1 桂林西瓜霜胶囊HPLC图

2.6 线性关系考察

分别精密吸取黄芩苷对照品溶液1.0、3.0、2.0、4.0、1.0m L，分别置25、20、5、5、1 m L量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取以上对照品溶液10μL，在上述色谱条件下分别测定，以对照品进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，求得回归方程：

结果表明黄芩苷对照品进样量在0.210 4～5.260 0μg范围内具有良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取2.2项下的对照品溶液10μL，在上述色谱条件下连续重复进样6次，以黄芩苷峰面积计算RSD为0.23%，表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取2.3项下制备的供试品溶液1μL，在上述色谱条件下，分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定，以黄芩苷峰面积计算RSD为0.48%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.9 重复性试验

取同一批号样品6份（批号：110304），按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定，计算黄芩苷的含量，结果表明本方法具有较好的重复性，结果见表1。

表1 重复性试验结果

2.10 加样回收率试验

精密称取6份已知含量的同一批样品（批号：110304，黄芩苷含量为1.07%）0.25 g，再分别向样品液中加入同一浓度的黄芩苷对照品溶液（0.526mg/m L）5.0m L，按供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率试验结果

2.11 样品的含量测定

按供试品溶液的制备方法和色谱条件，分别对3批样品按上述含量测定方法进行测定，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n=6）

3 讨论

3.1 在流动相的选择中，本实验曾采用不同比例的甲醇-水-磷酸[4-5]作为流动相，结果以甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）为流动相时黄芩苷吸收峰与杂质峰均能得到较好的分离，且其保留时间和完成样品分析时间较为合适。故定为流动相。

3.2 实验中曾对样品的处理方法进行考察。实验分别选择了回流和超声两种方法；甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇4种提取溶剂；25、50、75 m L 3个梯度的溶剂用量；10、20、40、60 m in 4个梯度的提取时间等进行逐一考察。比较提取效果，结果表明以25 m L的70%乙醇回流提取40 m in效果最好，且操作简便，故定为样品的处理方法。

3.3 本研究所建立的方法重复性良好，回收率高，且该方法快速、简便、易操作，可用于桂林西瓜霜胶囊中黄芩苷的含量测定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：282-283.

[2]徐玉田.黄芩的化学成分及现代药理作用研究进展[J].光明中医，2010，25（3）：544-545.

[3]聂爱国.黄芩的研究进展[J].内蒙古中医药，2010，29（12）：119-120.

[4]姬生国，王东，付蕾.HPLC法测定黄芩中黄芩苷的含量[J].内蒙古中医药，2002，21（2）：41.

[5]刘凡泽.HPLC法测定清喉利咽颗粒中黄芩苷的含量[J].中医药导报，2008，14（6）：112-113.