慢性乙肝患者体内HDL和HBV DNA水平相互关系的研究

张 琳

（郑州大学第五附属医院 检验科，河南 郑州 450052）

乙肝的感染可以分为急性感染和慢性感染。慢性乙肝感染引起氧化应激继而引起肝炎，最终引起肝纤维化、肝硬化和肝癌。虽然宿主自身的因素被认定为在其中起到关键作用，但是决定病毒感染复制和结局的因素并不是完全清楚［1］。在这些因素中，高密度脂蛋白（HDL）具有一定的生物活性，包括抗氧化和抗炎症作用，都在非特异性免疫反应中起到实质性的作用［2］。慢性乙肝患者血清HDL的浓度和促炎反应及肝损伤的进程呈负相关［3］。HDL在慢性乙肝引起的肝损伤中的作用还不是很清楚。为了证明HDL在治疗慢性乙肝中的作用及其作用机制，我们检测了血清中HBV DNA的复制水平和HDL的浓度及一些相关指标，以揭示HDL影响HBV DNA复制水平的机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象 152例成年患者，男性83例，女性69例，年龄为19－75岁，平均年龄40.3岁。乙肝表面抗原和HBV DNA阳性，肝功能异常（ALT＞40 mmol／L），e抗原、HCV、HDV 和 HIV抗体均为阴性，均未患肝硬化、肝癌、心血管疾病、肿瘤和糖尿病。所有人均无治疗史。

1.2 实验方法

1.2.1 血清ALT、HDL水平检测 患者夜里禁食12 h，早晨抽取患者静脉血3 ml，分离血清，检测血清中ALT、HDL水平，检测仪器为美国贝克曼DXC800全自动生化分析仪，试剂由美国贝克曼公司提供，严格按照试剂说明书进行操作。

1.2.2 血清HBV－DNA检测 早晨空腹抽取患者静脉血，分离血清，应用荧光定量PCR的方法检测患者血清中HBV DNA的水平，检测仪器为美国ABI公司7500型荧光定量PCR仪，检测试剂由广州达安基因诊断试剂有限公司提供，严格按照试剂说明书进行操作。

1.2.3 血清IL－10水平检测 早晨空腹抽取患者静脉血，分离血清，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法检测血清IL－10的水平，IL－10 ELISA检测试剂盒由深圳晶美生物有限公司提供，酶标仪为奥地利CliniBio 128型酶标仪，严格按照试剂说明书进行操作。

1.2.4 外周血中CD4＋CD25＋T细胞水平的检测取患者外周全血2 ml，密度梯度法分离单个核细胞，并调整细胞浓度为2×106／ml，加入FITC标记的抗CD3抗体、PE标记的抗CD4抗体及APC标记的抗CD25抗体，染色30 min，用流式细胞仪进行检测CD4＋CD25＋T细胞的浓度，仪器为美国BD FACS Calibur流式细胞仪，流式抗体由美国BD公司提供。

1.3 统计学处理 结果用均数±标准差（±s）表示，数据采用SPSS15.0统计软件行分析，组间比较采用方差分析，HDL、HBV－DNA、IL－10及 CD4＋CD25＋T细胞水平相关性分析采用Pearson相关性分析，P＜0.05作为判定统计学差异的标准。

2 结果

2.1 HBV DNA水平与HDL水平相关关系分析根据HBV DNA的检测结果，将患者分为A、B和C三组，HBV DNA水平＜1×103IU／ml定为A组，HBV DNA水平在1×103～1×106为B组，HBV DNA＞1×106为C组。各组检测结果如表1所示。由表1的结果可以看到，随着HBV DNA水平的不断增高，HDL水平则逐渐降低，A组与B组、A组与C组相比较均具有统计学差异（P值均＜0.05），但是B组与C组相比较没有统计学差异（P＝0.062）。HBV DNA水平与HDL做相关性分析可知，两者呈现负相关关系（r＝－0.63，P＜0.05）。

表1 HBV DNA、HDL、IL－10及CD4＋CD25＋T细胞水平检测结果

2.2 HBV DNA、HDL与IL－10、CD4＋CD25＋T细胞水平水平相关关系分析 如表1所示，随着HBV DNA水平的不断增高，IL－10的水平则逐渐降低，A组与B组、A组与C组及B组与C组之间相比较均具有统计学差异（P值均＜0.05）。HBV DNA水平与IL－10水平做相关性分析可知，两者呈现负相关关系（r＝－0.59，P＜0.05）。

如表1所示，随着HBV DNA水平的不断增高，CD4＋CD25＋T细胞的水平则逐渐降低，A组与B组、A组与C组及B组与C组之间相比较均具有统计学差异（P值均＜0.05）。HBV DNA水平与CD4＋CD25＋T细胞水平做相关性分析可知，两者呈现负相关关系（r＝－0.52，P＜0.05）。

此外，HDL与IL－10水平做相关性分析可知，两者呈现正相关关系（r＝0.72，P＜0.05）。HDL与CD4＋CD25＋T细胞水平做相关性分析可知，两者呈现正相关关系（r＝0.55，P＜0.05）。

3 讨论

HBV DNA高水平复制是患者发展为肝硬化及肝细胞癌的指标。监测HBV DNA水平在慢性乙肝感染的结局中起着非常重要的作用，其可以被宿主的因素所影响。有研究表明，在感染性疾病、流行性感冒感染时均会伴随HDL水平的降低，而高水平的HDL对病人的治疗效果较好［4］。有文献报道，HDL对于亚洲慢性丙肝患者体内病毒负载早期降低有明显的作用［5］。也有很多研究均表明，在慢性乙肝患者体内HDL的水平较低。HDL可能是天然免疫系统的成员，具有抗感染的能力［6］。因此，我们检测慢性乙肝患者体内HBV DNA和HDL的水平，结果证实了HDL和HBV DNA之间存在负相关关系，HDL可能通过某种机制达到其抗感染的能力来降低病毒感染。

为了进一步研究HDL的抗病毒机制，我们检测了患者外周血IL－10的水平。有文献表明，慢性乙肝患者体内HBV DNA的水平和IL－10水平呈负相关［7］。通过检测结果，我们分别分析了 HBV DNA、HDL和IL－10之间的关系，结果表明，HBV DNA水平与IL－10水平呈现负相关，而HDL和IL－10的水平是呈正相关关系的。IL－10主要是由CD4＋T细胞分泌的，在Th2细胞免疫反应中起到调节免疫反应的作用，Th2免疫反应过程中大量T细胞分化为CD4＋CD25＋调节T细胞，此调节T细胞能够分泌大量IL－10来起到免疫调节的作用［8］。因此，我们进一步检测了患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞的水平，结果表明，HBV DNA水平与CD4＋CD25＋T细胞的水平呈负相关关系，而HDL水平与CD4＋CD25＋T细胞呈正相关关系。分析结果提示在慢性乙肝患者体内，HDL的抗病毒作用很可能是通过诱导T细胞分化为CD4＋CD25＋T细胞，并通过该细胞产生大量IL－10来达到其抗病毒的作用的。我们的结果进一步印证了文献中所述HDL可能是天然免疫系统的成员，具有抗感染的能力。

综上所述，通过研究得出HDL具有抗病毒的能力，其机制可能是通过诱导T细胞分化为CD4＋CD25＋T细胞，该细胞活化后产生大量IL－10来达到其抗病毒的作用的，但是机体的免疫系统是极其复杂的网络，细胞免疫与体液免疫共同作用，多种免疫细胞及免疫分子参与其中。HDL可能是天然免疫系统的成员，其抗病毒的机制可能有多种细胞及因子参与。在ALT正常的慢性乙肝患者体内HDL与HBV DNA会呈现怎样的关系，还有待进一步实验。因此我们后期需要做更多的研究来弄清楚HDL抗病毒的机制，以使其达到更好的抗病毒疗效。

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［3］Siagris D，Vafiadis G，Michalaki M，et al.Serum adiponectin in chronic hepatitis C and B［J］.J Viral Hepat，2007，14：577.

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［6］Perez－Morga D.Trypanolytic factor of human serum［J］.Bull Mem Acad R Med Belg，2006，161：309－315.

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［8］D＇Orazio TJ，Niederkorn JY.A novel role for TGF－beta and IL－10 in the induction of immune privilege［J］.J Immunol，1998，160：2089.