■许友卿 郑一民 李伟峰 黄金华,2 丁兆坤
(1.广西大学水产科学研究所,广西南宁 530004;2.广西农业职业技术学院,广西南宁 530007)
军曹鱼(Rachycentron canadum)是优良海水养殖鱼种,也是中国海水养殖和营养饲料研究的主要良种之一。军曹鱼是肉食性鱼类,广泛分布在热带和亚热带海域,在23~29℃水中生长迅速,一年即可长至5~6 kg上市。由于军曹鱼生长快,个体大,肉质鲜美,营养价值高,是目前最热门的研究对象和未来最被看好的潜力鱼种之一。因此,军曹鱼研究和繁养发展迅速。然而,鱼病是军曹鱼养殖的最大威胁之一。在高密度网箱养殖中,军曹鱼鱼病频发。三类潜在的病原体——细菌、病毒和寄生虫已经导致军曹鱼病毒淋巴炎病、寄生孢虫黏病和细菌性疾病。其他病原体如Trichodina spp.,Neobenedenia spp.和Amylodinium spp.也能感染军曹鱼。因此,在军曹鱼养殖中,如何预防军曹鱼患病,患病后又如何根据其主要症状和病理变化分析病因,正确诊断和积极治疗至关重要。
我们在2010年军曹鱼养殖中,除了注意鱼苗、水质的管理外,通过分阶段投喂优质饲料药饵,中西医结合治疗鱼病综合症,控制和治愈了由病毒、细菌、寄生虫和其他病原体感染的军曹鱼稚鱼综合症,不但效果好,成本低,而且不复发。
2010年4月28日凌晨,我们雇用专用鱼苗运输车,从广东省湛江市流沙镇军曹鱼鱼苗场运2 000尾48日龄、体重3~5 g/尾的健康军曹鱼稚鱼,至广西防城港广西水产研究所海水养殖中试基地进行室内养殖实验。运输前后均对鱼苗进行消毒、水质和水温适应性试验,然后把鱼苗放在经过消毒的海水养殖池内驯化养殖。所用海水盐度约27‰~30‰,pH值7.8~8.5,水温(26±2)℃。驯养中,按实验方案实行每天24 h充气,换水80%,并清洗池底。2010年4月28日中午和晚上,投喂了从防城企沙镇自由市场购买的新鲜小杂鱼鱼糜。4月29日开始每天死亡鱼苗约100尾,至完全控制病情为止,总死亡率约80%。
病鱼外观体色稍为变黑,食欲减退,离群独游,对外界刺激反应迟钝,身体僵直或呈弧状弯曲,静止于池底,悄然死去。偶见鱼体发黑者缓慢浮出水面,拼命作水平绕圈,继而螺旋翻转,疑似痛苦挣扎,数秒钟后沉入水底,翻白死去。解剖病鱼尸体发现,其肝肿大、肝脑充血、脾和肾或多或少分布着小米大小的脓包状白点,严重者呈脓包坏死状,少量病鱼的肝也有结节小白点(见图1~图3);严重者肾脏肿胀,呈贫血状,脾脏肿胀且呈暗红色;胆汁呈墨绿色,无病变特征;大多病鱼胃肠内无食糜,也有的病鱼胃肠充满褐色食糜。取其肝、肾、脾涂片进行瑞氏染色后,于400x显微镜下观察。图4为肝结节白点涂片结果。
图1 患病军曹鱼稚鱼部分内脏的症状(肝有结节白点,肾肿大,脾为暗红色)
图2 患病军曹鱼稚鱼肝的结节白点
图3 患病军曹鱼稚鱼脾的结节白点
图4 患病军曹鱼稚鱼肝结节白点涂片的瑞氏染色400x显微观察
经查实,原军曹鱼鱼苗场和出售他处的军曹鱼稚鱼没有出现上述患病症状,我们选购的军曹鱼稚鱼于运输前和运输当天也没有发生异常死亡现象。只是在实验操作者临时改变原实验方案,给军曹鱼稚鱼投喂了二次从防城企沙镇自由市场购买的新鲜海水小杂鱼鱼糜后,才发生持续大量死亡事故。因此,推测很可能是由当地自由市场买的海水小杂鱼带来的病菌感染所致。海水小杂鱼带来的病菌可以通过二条途径感染军曹鱼稚鱼:第一,军曹鱼稚鱼直接吞食带病菌小杂鱼鱼糜;第二,撒在驯化池水中的带病菌小杂鱼鱼糜既能使水质迅速富营养化,又能使病菌迅猛繁殖蔓延,感染军曹鱼稚鱼。这样病菌由食物至体内、由体外至体内,双途径结合同时感染军曹鱼,使其稚鱼爆发鱼病,产生灾难性后果。
根据上述军曹鱼患病的主要症状判断,可能是由神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)、诺卡氏菌(Nocardiaceae)和美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae subsp.)等3种病原引起的综合症。其中神经坏死病毒(red-spotted grouper NNV,RGNNV)是近年来严重危害海水鱼苗生产、引起爆发性流行病的重大病原之一。研究发现,神经坏死病毒已经感染40多种鱼,在亚洲的一些国家,尤其是中国和日本,神经坏死病毒对海水养殖的鱼类危害十分严重。闫云峰等(2010)研究发现,军曹鱼也是神经坏死病毒的易感种群之一,病毒能通过水平传播感染军曹鱼。我国台湾学者从发生大批死亡的军曹鱼中检测到鱼类神经坏死病毒。病毒性神经坏死病的主要病症是,病鱼表现出不同程度的神经异常,不摄食,腹部朝上,在水面作水平旋转或上下翻转,呈痉挛状。
诺卡氏菌病鱼的主要症状是:体表和心、脾、肾等内脏出现白色结节。目前认为,诺卡氏菌使海水鱼致病的途径:一是摄食了带病菌的海水小杂鱼或鱼粉;二是被存于养殖池的病菌所感染。在自然条件下,由于集约化程度高,养殖密度大,鱼体容易损伤和体质下降,给病原菌提供了致病机会。
美人鱼发光杆菌导致鱼结节病的主要症状是:严重感染的鱼肾、脾出现大量结节,鱼肝、肠系膜也会出现结节。此病的累积死亡率较高,可达50%~60%。美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(P.damselae subsp.Piscicida)最早分离于野生美洲狼鲈(Morone americanus)和斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)。此后严重影响日本五条鰤(Seriola quinqueradiata)、香鱼(Plecoglossus altivelis)、海鳟(Salmo Trutta)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、鲆(Bothidae)和鲽类(lefteye flounders)等,半数致死量约 103~106。美人鱼发光杆菌是一种致病性很高的鱼类病原菌,寄生感染宿主不具特异性,能感染多种养殖鱼类。美人鱼发光杆菌也可导致军曹鱼结节病,该病通常在18~20℃爆发,曾经对台湾军曹鱼养殖业造成重大损失。人工将美人鱼发光杆菌感染军曹鱼,2~4 d即出现死鱼,其症状与本次军曹鱼发病症状基本一致。
由于患病军曹鱼只是皮肤颜色稍为变黑、摄食和活动减少,没有其他明显外部症状,而且美人鱼发光杆菌杀鱼亚种主要通过胞外蛋白酶类、胞外溶血素和细胞溶素等因子使鱼致病、死亡,因此在发病早期很难确诊,导致发病率和死亡率均很高。
根据上述分析,鱼病可能是由神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)、诺卡氏菌(Nocardiaceae)和美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae subsp.)等3种病原引起的综合症。我们因地制宜,采取了紧急处理方案,立即清除死鱼,隔离病鱼,消毒驯化池和全部稚鱼,并转移上桶分养,以便操作、处理和治疗。首先立即停止投喂当地市场买的海水小杂鱼,改用根据原实验方案准备的优质配合饲料。对全部稚鱼实施体内、外用药,中西医结合治疗。隔天轮流用标准浓度聚维酮碘(PVP-I,厦门北大泰普动物保健有限公司)或1 mg/l化学纯高锰酸钾溶液浸浴消毒鱼体30 min,并定期清洗、消毒养鱼桶,防止病菌繁殖蔓延。同时及时清除粪便和剩饵,防止养殖水体富营养化,每天换用80%以上新鲜过滤的海水,并保持流水和充气。每天上午按每千克鱼体重添加聚维酮碘2 mg、自制穿心莲粉12 g、自制板蓝根粉9 g拌饲料投喂,主要治疗细菌性疾病;下午按每千克鱼体重添加研碎的病毒灵(盐酸吗啉胍片,锦州生化制药有限公司)20 mg拌饲料投喂,主要治疗病毒性疾病(控制此病后,停止使用病毒灵),连续投喂7 d,7 d后药量减半,直至完全控制疾病,治愈病症为止。
从2010年5月6日开始我们利用中西综合疗法,一周后,死亡减半,由原来平均每天死鱼约100尾降至约50尾,二周后即5月19日完全制止死鱼,控制了疾病(见图5)。所治愈的军曹鱼稚鱼体色鲜亮,游动活跃,食欲旺盛,抢食凶猛,未出现复发病症。
图5 用药前后(4月28日~5月18日)军曹鱼稚鱼死亡情况
进行高密度养鱼,选好鱼苗、科学管理、提供优质水源和饵料是十分关键的。只有优化“水、种、管、饵”,才能保证水产养殖健康发展。养鱼应以防病为主,一旦发现鱼病,应立即对病鱼消毒、隔离、提供优质水源和治疗等措施,防止鱼病继续蔓延恶化。
投喂无病菌的优质饲料是重要措施之一。生物饵料、饲料和添加剂等是水产养殖的重要投入品,其质量优劣与养殖水产品的健康和质量密切相关,是保证养殖水产品质量和安全的关键因素。因此,必须保证这些投入品的质量符合有关标准和技术要求,施用方法符合养殖技术规范,保证养殖水产品的质量安全,防止污染环境。如果把不消毒或者消毒不彻底的饵料鱼或其他带病菌的饲料投喂所养的鱼,不仅导致所养的鱼直接感染病菌,而且会使水质富营养化,病菌及其他有害微生物大量繁殖。
此次鱼病爆发,很可能是由防城企沙镇自由市场购买的海水小杂鱼带来的病菌感染所致。因此我们首先立即停止投喂当地市场购买的海水小杂鱼,改用根据原实验方案准备的优质配合饲料。这样一方面切断外源病原体、防止鱼病继续扩大、蔓延恶化;另一方面为治疗鱼病打下基础,因为优质配合饲料和科学投喂方法能增强鱼类对疾病的抵抗能力。
军曹鱼稚鱼爆发综合症是非常罕见的,目前还没有特效药。据报道,利用赤点石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白基因重组蛋白制成疫苗,通过腹腔注射免疫鱼有显著的免疫保护效应,可预防神经坏死病毒感染。然而,对军曹鱼疫苗的研究是当前研究的课题,有许多问题尚待解决。
我们利用中西医结合治疗军曹鱼综合症所述用药的主要根据:①聚维酮碘可通过逐渐分解出游离碘(其中80%~90%的结合碘可解聚成游离碘)而发挥杀菌作用,直接使病原体内的蛋白质变性、沉淀,以致病原体细胞死亡,从而达到高效消毒杀菌的目的。其特点是强力杀菌,毒性低,且为广谱杀菌剂,能杀死病毒、细菌、芽孢、真菌及原虫;②高锰酸钾具有强氧化性,可促使细菌或其它有机物立即放出新生态氧,通过氧化细菌体内的活性基因而发挥杀灭细菌作用,对杀灭原虫类、单殖吸虫类和锚头蚤等寄生虫有显著效果,其毒性小、副作用小、用量小;③病毒灵(吗啉啡双胍,ABOB)对DNA病毒(腺病毒)和RNA病毒(埃可病毒及流感甲型病毒)均具有明显抑制作用,能阻碍病毒脱氧核糖核酸的合成,从而抑制病毒的增殖,用于预防水产动物病毒性疾病,对多种病毒都有效;④板蓝根具有抗菌、抗病毒、抗钩端螺旋体、解毒、提高免疫力、抗肿瘤和白血病等功能;⑤穿心莲具有抗菌、抗病毒等作用,且无毒性和副作用。
根据药物的特性,聚维酮碘不仅可用于养殖水体消毒,还可拌于饲料投喂,杀灭鱼体内、外的病菌;穿心莲具有清热解毒、消炎、杀菌、消肿止痛等作用;板蓝根可提高鱼细胞分泌干扰素、提高免疫细胞及肝脏网状内皮系统吞噬作用的功效,因而能有效地抑制病毒的复制。3者结合使用对病菌病毒的抑制、扑杀效果很好。用中草药治疗鱼病,不仅绿色环保,对鱼体的毒副作用小、残留量低,还能全面调节鱼体的生理功能,兼具营养与药物的双重作用。因此,上述综合疗法能迅速控制并治愈爆发的军曹鱼稚鱼综合症,取得非常理想的效果。
(参考文献38篇,刊略,需者可函索)