复方中草药对黄鳝生长、非特异性免疫及肠道消化酶活性的影响

■李金龙 胡 毅 郇志利 戴振炎 肖调义 毛 盼 刘庄鹏 张俊智

（湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙 410128）

黄鳝是我国重要的特种水产养殖品种之一，其营养丰富、肉质鲜美，深受消费者喜爱[1]。近年来，黄鳝养殖在淡水特种养殖中地位日益凸显，但随着养殖规模的不断扩大和养殖环境的不断恶化，黄鳝生长缓慢、病害滋生等问题日趋严重，而消毒剂、抗生素等化学药物滥用严重影响黄鳝生长和鱼体品质。因此研发健康、安全、高效的添加剂已成为黄鳝健康养殖亟需解决的问题。

我国中草药资源丰富，分布广泛，具有价格低廉、加工工艺简单、副作用少等特点。中草药作为免疫增强剂具有促生长[2]、增强免疫、提高消化、改善鱼体品质[3]等功效，备受学者们关注。目前，不同中草药添加水平对黄鳝生长、免疫、血液生化指标、消化酶等影响的研究仍少见报道。我们已从4种复方中草药中筛选出一种具良好的诱食效果和促生长的复合中草药，已获国家发明专利授权(CN 102302098 A)。本试验旨在探讨该复合中草药在黄鳝饲料中的最适添加量。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验选用的中草药杜仲、当归、山楂、白术、肉桂、小茴香、大黄、黄芩、黄芪等购自长沙市某药店，药材烘干后粉碎过筛，按复方中草药配方混匀制备，置于-20℃冰箱中贮存备用。以鱼粉、豆粕、玉米蛋白粉、啤酒酵母等为蛋白源配制成的粉状饲料为对照组,分别添加质量分数为0(对照)、0.5%、1.0%、2.0%的复方中草药配制成4种粉状饲料 (见 表 1)，即 为 D1(0)、D2(0.5%)、D3(1.0%)、D4(2.0%)。

表1 试验饲料组成及营养成分（%干重）

1.2 饲养与管理

试验用黄鳝为洞庭湖区规格整齐的野生黄鳝，在常德市西湖区某黄鳝养殖场进行网箱驯化暂养。鳝鱼入箱后2 d内不投饵料，2 d后开始投饵驯化。首次少量投喂比例为1∶1的蚯蚓和鲜鱼肉糜，依照摄食情况逐渐地增加投喂量和鲜鱼浆的投喂比例，直到鳝鱼能完全摄食全鲜鱼浆且稳定摄食其体重5%的量后，开始添加粉状试验饲料（鲜鱼浆∶饲料=4∶1），依照摄食情况逐渐地增加试验饲料的投喂比例，直到鳝鱼能稳定摄食粉状试验饲料后，饥饿24 h后挑选规格均匀、健康的黄鳝分组。

养殖试验在同一池塘的网箱中进行，试验黄鳝初始平均重为(20.53±0.18)g，随机分成6组，每组设3个重复，每个网箱(1.5 m×2.0 m×1.5 m)饲喂70尾，以鱼体重的3%～5%投喂，10 min内食完为宜，日投喂1次(17:30-19:00)各组饲粮，养殖试验进行90 d。

1.3 样品采集、分析及计算

1.3.1 生长指标

试验初始和结束时分别对各网箱的鳝鱼进行记数、称重。

成活率(SR，%)=试验结束鱼尾数/试验初始鱼尾数×100；

增重率(WG,%)=(试验末鱼总重-试验初鱼总重)/试验初鱼总重×100。

1.3.2 血液指标

养殖试验结束后饥饿24 h,用2.0 ml的无菌注射器从尾静脉采血，每个网箱随机取5尾鳝鱼采血，采出的血液合于10 ml无菌离心管中，4℃静置过夜后，4 000 r/min离心10 min，取上层血清置于-80℃超低温冰箱保存备用。

血糖（GLU）、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总抗氧化力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)等均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定，补体C3、补体C4采用浙江伊利康生物技术有限公司试剂盒测定。

1.3.3 肠道消化酶

试验结束后，每个网箱随机取5尾黄鳝置死后，在冰盘上迅速解剖取其前肠，除去肠道内容物和附着物，用冰生理盐水清洗，滤纸吸干后称重，剪碎后置于电动匀浆器中冰水浴匀浆，4℃高速低温冷冻离心机6 000 r/min离心15 min，取上清液，于24 h内完成测定。脂肪酶、淀粉酶的测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒，胰蛋白酶测定采用Folin酚法测定，肠道蛋白质含量采用考马斯亮蓝法测定。

脂肪酶活力单位定义：在37℃条件下，每1 g组织蛋白在本反应体系中与底物反应1 min，每消耗1 μmol底物为1个酶活力单位。

淀粉酶活力单位定义：每1 mg组织蛋白在37℃与底物作用30 min，水解10 mg淀粉定义为1个酶活力单位。

蛋白酶活力单位定义：每1 g组织蛋白在40℃条件下每1 min水解酪蛋白产生1 μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。

1.3.4 鱼体成分测定

试验结束后，每个网箱随机取5尾黄鳝于-20℃冰箱冷冻作全鱼样品，饲料及全鱼常规成分参考贺建华[4]的方法测定，其中水分测定采用105℃烘箱恒重法，粗脂肪测定采用索氏抽提法，灰分测定采用550℃马弗炉灼烧法，粗蛋白测定采用凯氏定氮法，利用FOSS全自动定氮仪测定。

1.4 试验数据统计分析

试验数据采用SPSS Statistics软件进行单因素方差分析处理，当差异显著时（P＜0.05），则采用Duncan's法进行多重比较。分析结果用“平均数±标准差（mean±S.D.）”表示。

2 结果

2.1 复方中草药对黄鳝生长的影响(见表2)

表2 复方中草药对黄鳝生长的影响（n=3）

由表2可知，饲料中添加中草药对黄鳝成活率有不同程度地提高，其中1.0%和2.0%添加组成活率显著高于对照组(P＜0.05)，而在增重率上，1.0%添加组显著高于对照组和其他组(P＜0.05)，0.5%和2.0%添加组增重率与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。

2.2 复方中草药对黄鳝部分血液生理生化指标的影响（见表3）

表3 复方中草药对黄鳝部分血液生理生化指标的影响（n=3）

由表3可知，与对照组相比，饲料中添加中草药能显著降低黄鳝血糖、甘油三酯、总胆固醇含量(P＜0.05)，1.0%和2.0%中草药添加组尿素氮含量显著低于对照组(P＜0.05)，且0.1%和2.0%添加组之间无显著性差异(P＞0.05)，而0.5%中草药添加组与对照组相比较差异不明显(P＞0.05)；血清中天门冬氨酸转氨酶活性随添加量增加呈波动变化，0.5%中草药添加组显著高于对照组(P＜0.05)，1.0%中草药添加组则显著低于对照组，2.0%中草药添加组与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)；而丙氨酸转氨酶活性在2.0%中草药添加组显著高于对照组(P＜0.05)，其他组与对照组相比则无显著差异(P＞0.05)。

2.3 复方中草药对黄鳝非特异性免疫指标的影响(见表4)

表4 复方中草药对黄鳝非特异性免疫指标的影响（n=3）

由表4可知，与对照组相比，各添加组均能显著提高黄鳝T-AOC活力（P＜0.05)，且各添加组间无显著差异(P＞0.05)，当添加量为1.0%时，血清中SOD、LSZ、C3、C4、CAT等指标显著高于对照组(P＜0.05)。

2.4 复方中草药对黄鳝肠道消化酶活性的影响(见表5)

由表5可知，黄鳝肠道消化酶活性随中草药添加量增加呈先升后降趋势，0.5%和1.0%中草药添加组淀粉酶活性显著高于对照组（P＜0.05），且0.5%和1.0%添加组组间差异不显著（P＞0.05）；各添加组脂肪酶活性均显著高于对照组（P＜0.05），其中1.0%添加组活性最高；当添加量为1.0%时，蛋白酶活性显著高于对照组和其他组（P＜0.05）。

2.5 复方中草药对黄鳝体成分的影响(见表6)

表5 复方中草药对黄鳝肠道消化酶活性的影响（n=3）

表6 复方中草药对黄鳝体成分的影响（%，n=3）

由表6可知，在体成分方面，与对照组相比，添加中草药均能显著降低黄鳝粗脂肪和灰分含量(P＜0.05)，能一定程度地提高鱼体粗蛋白含量，其中1.0%中草药添加组粗蛋白含量最高，与对照组相比差异显著(P＜0.05)，但对黄鳝鱼体水分含量无显著影响(P＞0.05)。

3 讨论

3.1 复方中草药对黄鳝生长的影响

中草药含有多种营养物质和生物活性成分，兼有药用、营养及诱食三种功效，适量添加能显著提高水产动物的生长，改善其对饲料营养物质的消化和利用率。本试验结果表明，饲料中添加中草药能提高黄鳝的成活率，添加量为1.0%和2.0%时成活率显著高于对照组，当添加量为1.0%时，黄鳝的增重率最高，这与黄鳝在消化酶活性上的表现一致，添加量为1.0%时，黄鳝3种消化酶活性均显著高于对照组，且蛋白酶活性显著高于其他添加组，原因是该复方中草药中的山楂[5]、杜仲[3]、小茴香、肉桂等具有诱食、促消化功效，从而促进鱼类对营养物质的消化和吸收，提高黄鳝的生长及饲料利用率，与王吉桥等[6]的研究结果相似。

尿素氮是机体蛋白代谢的终产物，其含量直接反映出蛋白质在机体内合成和分解状况。与对照组相比，饲料中添加中草药能显著降低血清中血糖、血脂、总胆固醇含量，且当添加量为1.0%(D3)和2.0%(D4)时，血清中尿素氮含量显著低于对照组(D1)，这可能是因为该复方中草药中富含的黄酮类、萜类化合物、多糖类等生物活性物质对机体具有降血脂、降血糖、调节蛋白代谢作用，这与本试验的体成分结果相吻合。本试验中各中草药添加组的粗脂肪和灰分含量均显著低于对照组，且粗蛋白含量较对照组均有不同程度地提高，其中D3(1.0%)组粗蛋白含量显著高于对照组，与罗庆华等[7]、石英等[8]研究相似。AST和ALT是反映肝脏功能正常与否的重要指标，肝组织受损时，使血清中转氨酶活性升高[9-10]。本试验表明，投喂1.0%的中草药饲料能降低黄鳝AST、ALT活性，可能是中草药中的黄芪多糖有抗氧化及稳定肝细胞膜作用，能促进胆红素代谢，减少肝细胞坏死，促进肝细胞再生[11]，说明适量添加中草药对肝脏有一定保护作用，这与田海军等[12]研究结果相似。

3.2 复方中草药对黄鳝非特异性免疫的影响

鱼类免疫防御主要依赖抗氧化系统(SOD、CAT、T-AOC等)、溶菌酶、补体系统、干扰素等所组成的非特异性免疫[13-14]。SOD、CAT能清除体内超氧阴离子自由基（·O2-）、羟自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）等有害成分，保护机体免受其伤害[15]。TAOC是机体抗氧化能力的重要指标，其活性与机体氧自由基代谢状况和对外来刺激的代偿能力有关。补体是鱼类抵抗微生物感染的重要成分，启动后参与机体靶细胞溶解和调理反应，而补体C3是补体系统的主要成分。溶菌酶是一种具有抗菌活性的水解酶，通过溶解细胞壁使细胞破裂[16]。中草药内富含多糖类、苷类、生物碱类、黄酮类等多种免疫活性物质[17]，对黄鳝具有抗菌消炎、增强免疫等作用；但中草药对动物机体具有双向调节作用，免疫效果不会随添加量增加而不断增强，适量添加对动物机体免疫有促进作用，而过量添加会产生一定的负作用[18]。本试验结果显示，与对照组相比，各中草药添加组均能显著提高黄鳝T-AOC活力(P＜0.05)，但投喂添加量为1.0%的中草药饲料能显著提高黄鳝血清SOD、LSZ、T-AOC、CAT活性和补体C3、C4含量，且效果明显优于添加0.5%、2.0%组，可能是低浓度中草药对机体产生的有效刺激不够，效果不显著；而长期投喂(P＜0.05)高浓度中草药能使机体产生免疫疲劳现象[19-21]，说明添加适量中草药能显著增强黄鳝的非特异性免疫力，这与Harikrishnan等[22]、Jian等[23]分别在虎虾和建鲤中的研究结果相似。

4 小结

本研究表明，饲料中添加1.0%该复方中草药对黄鳝生长、非特异性免疫、肠道消化酶活性及鱼体品质有明显的促进和改善作用。