降糖护眼颗粒质量标准的研究

张 航 郭 静 关升远 董雪莲

（吉林省长春中医药大学，长春130117）

全方由水蛭、夏枯草、密蒙花、谷精草、菊花、决明子、白蒺藜、牛膝、泽泻九味药组成，共奏活血散结、养阴明目、清肝泄浊之功。主要用于预防与治疗由糖尿病引起的眼部病变。为了控制其质量，对处方中夏枯草、菊花、决明子、密蒙花、泽泻进行了薄层色谱法定性鉴别研究，对方中决明子采用高效液相色谱法进行定量分析研究，现报告如下。

1 材料与方法

药材购于吉林省宏检医药药材有限责任公司，Agilent 1260高效液相色谱仪，色谱甲醇为美国飞世尔公司，其余分析纯试剂均为北京化工厂生产，薄层层析硅胶为青岛海洋化工有限公司，标准品购买于中国食品药品检定研究院 （大黄酚：110796－201017；迷迭香酸：111871－201102；绿原酸：110753－200212）。

2 鉴别方法

阴性对照：按处方比例配伍，除去被测药味，其他药味按样品制备工艺得各药材的阴性样品，按待测药味供试品制备方法制得阴性样品溶液。

2.1 夏枯草的鉴别 取本品粉末2g，置50ml圆底烧瓶中，加稀盐酸1ml和乙醚20ml，60℃水浴加热回流30min，提取液回收乙醚至干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.5g的溶液，即得。另取夏枯草对照药材1g，同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （附录ⅥB），吸取上述三种溶液及阴性样品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸 （2∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验证明无干扰。

2.2 决明子的鉴别 取本品粉末2g，加甲醇10ml，浸渍1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1mL，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取大黄酚对照品，加无水乙醇－乙酸乙酯 （2∶1）制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。另取决明子对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液及阴性样品溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚 （30～60℃）－丙酮 （5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验证明无干扰。

2.3 菊花的鉴别 取本品1g，剪碎，加石油醚 （30～60℃）20ml，超声处理10分钟，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1ml与乙酸乙酯50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。另取菊花对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液及阴性样品溶液，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸一水 （1∶15∶1∶1∶2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，置紫外光灯 （365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验证明无干扰。

2.4 密蒙花的鉴别 取本品2g研细，加甲醇30 ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸至近干，加水30ml，用稀盐酸调pH值至1～2，用醋酸乙酯25ml振摇提取，取醋酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取密蒙花对照药材0.5g，同供试品溶液的处理方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液及阴性样品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯－甲酸 （15∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热显色。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验证明无干扰。

2.5 泽泻的鉴别 取本品粉末2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加于氧化铝柱 （200～300目，5g，内径为1cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （附录ⅥB）试验，吸取上述二种溶液及阴性样品溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯 （4∶4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热显色。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性试验证明无干扰。

3 含量测定方法

3.1 色谱条件 参照2010版 《中国药典》大黄含量测定项下方法对大黄酚的含量进行研究。色谱柱：流动相：甲醇－0.1%磷酸溶液 （85∶15），检测波长为254nm，流速：1ml／min，柱温：25℃。

3.2 线性关系的考察 精密称取大黄酚对照品适量，制成浓度为0.0157mg／ml的对照品溶液。分别精密吸取2、5、10、15、20、25μl对照品溶液，注入液相色谱仪，以大黄酚进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归计算，得线性回归方程y＝87.550x＋3.6786，r＝1。线性范围：0.0314～0.3925μg。

3.3 精密度试验 精密吸取浓度为0.0314mg／ml的大黄酚对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，以大黄酚峰面积为测定指标，大黄酚峰面积的RSD%为0.34%，表面精密度良好。

3.4 稳定性试验 精密吸取浓度为0.0314mg／ml的大黄酚对照品和供试品溶液各10μl，分别于0、2、4、8、12、24小时注入高效液相色谱仪，测定峰面积，大黄酚对照品RSD%为2.11%，供试品溶液RSD%为1.43%，表明大黄酚对照品、供试品溶液在24小时内稳定。

3.5 重现性试验 取同一批号的样品，平行处理6份，分别进样，测定峰面积，其RSD%为2.57%，实验表明本法重现性较好。

3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品6份，每份0.25g，各精密加入一定量的大黄酚对照品，按供试品溶液的处理方法制备并测定，得平均回收率为100.99%，RSD%为1.71%。

3.7 样品含量测定 取供试品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml。称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加稀盐酸30ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液。回收溶剂至干，残渣用无水乙醇－乙酸乙酯 （2∶1）混合溶液使溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定，计算含量。结果3批样品中大黄酚的含量 （mg／g）分别是0.5620、0.5854、0.5589。

4 小结

在对处方中谷精草、水蛭、白蒺藜、牛膝的薄层鉴别中，存在阴性干扰，因而不列入质量标准正文。处方中君药夏枯草在含量测定中存在阴性干扰，臣药菊花测定成分绿原酸不稳定，综合考虑，选择臣药决明子中的大黄酚作为含量测定成分。