脾切除对肝硬化后肝癌患者机体炎症免疫反应影响研究

谢志明

1 研究意义

原发性肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，肝硬化是HCC发生的主要危险因素之一。目前对脾脏与HCC关系的研究重点大多集中在脾脏在HCC的进展和治疗过程中的作用，而对脾脏在肝硬化后肝癌患者机体作用影响研究报道很少。本组对肝硬化后肝癌患者手术联合切脾与不切脾患者外周血 CD4，CD8 和 CD4/CD8 以及 IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10等水平表达差异进行研究，以期从炎症、免疫的角度探讨脾切除对肝硬化后肝癌患者预后影响。

2 研究现状及分析

大量研究表明，肝炎后肝硬化是HCC发生的主要危险因素之一。正常脾脏是人体重要的免疫器官，而在肝硬化后门脉高压症形成后，出现充血性脾肿大，可见脾窦扩张，脾内纤维组织增生，单核-吞噬细胞增生和吞噬红细胞现象，临床除有脾肿大外，还有外周血细胞减少，称为脾功能亢进，是肝硬化患者常见临床综合征。此外，脾脏与肝癌的关系十分密切，75% ～90%的肝癌患者合并不同程度的肝硬化，其中11%～33%合并脾功能亢进，脾脏又可通过不同水平的免疫调控作用，对肿瘤发生和发展有抑制作用。肿瘤免疫以T细胞免疫为核心［1］。CD4细胞主要分泌细胞因子以调节抗肿瘤免疫，CD8细胞主要分泌抑制性T细胞因子发挥特异性免疫抑制作用。因此，测定CD4，CD8和CD4/CD8可在一定程度上反映机体免疫功能。

3 研究内容指标

3.1 研究对象 选择2013年1月至2015年1月我院收入的肝硬化后肝癌患者60例，所有肝癌患者均接受快速活检针行肝穿刺活检确诊。患者行B超或CT显示有肝硬化。入选患者根据治疗方式的不同分为两组，肝癌切除联合脾切除组及单纯肝癌切除组，每组30例。另取30例健康无肝脏相关疾病患者作为正常对照组。

3.2 手术指征 入选肝癌患者均行肝切除手术，患者肝切除手术指征中:肝功能正常或者仅有轻度的肝功能损害，肝功能分级为Child A级和Child B级。肝癌肿瘤单发或者多发，其中多发单纯局限于相邻的2～3个肝段之内。影像学显示肿瘤侧的肝组织无明显的代偿性增大，且无肿瘤的远处转移。

3.3 评价指标 ①对比两组患者手术时间、术中平均失血量、术后住院时间、并发症发生情况、术后2年内死亡率及复发率。②两组患者肝功能、白细胞、血小板和总胆红素对比。③两组炎症因子对比:患者术后1周检测炎症因子情况，全部入选者均于空腹采血，并进行血清分离，保存于-70℃待用。细胞因子采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定，将抗人IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10 的单抗包被于酶标板上，然后再用样品和标准品与单抗结合，随后加入生物素化的抗人IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10，形成免疫复合物连接在板上，然后辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，然后加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，并在45Onm处测0D值。先通过绘制标准曲线，后求出标本中的 IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10浓度。为了保证数值的准确性及减少误差，待测样品及标准孔均做复孔，每次测定同时做标准曲线。④两组术后免疫功能情况对比:患者术后1周检测免疫功能情况，检测T细胞亚群CD4，CD8和 CD4/CD8。CD4，CD8，CD4/CD8采用流式细胞仪检测(FCM)。

3.4 统计学方法 数据采用SPSS 16.0统计软件进行分析，计量资料采用±s做统计描述，资料对比采用χ2检验，其中P＜0.05为差异有统计学意义。

4 拟解决的关键问题

①选择肝硬化后肝癌患者，制定肝硬化、肝癌患者的纳入标准及排除标准。②掌握炎症因子的ELISA检测方法。③掌握流式细胞仪检测方法。

5 可行性分析

①肝硬化及肝癌患者在我国发病率较高，标本容易采集。②本研究所有样本均来自于我院，标本方便收集。③实验所涉及技术方法均以掌握，实验所需试剂均能获得。

6 本项目的特色与创新之处

目前，在国内外从炎症、免疫角度探讨脾切除对肝硬化后肝癌患者预后影响的研究并不多见，本研究通过探讨脾切除后炎症因子及免疫功能改变的情况，从而了解脾切除对肝硬化后肝癌患者预后影响。相关研究预期2015年底结题并进行资料总结。

［1］陈中，倪家连，刘鲁岳，等.CD4～+CD25～ +调节性T细胞在肝癌微环境中的分布状况与局部免疫状态的关系.中国普通外科杂志，2007，16(7):571-575.