血小板聚集检测方法及质量控制

刘方鹤 荣敬娟 曹珍珍 刘文静

在血管损伤的情况下，血小板与血管内皮下组织接触，除引起血小板粘附于损伤部位之外，血小板与血小板之间也会相互粘着，即血小板聚集。血小板聚集是血小板参与止血和血栓形成的重要环节。

1 血小板聚集检测的方法

1.1 比浊法血小板聚集试验 先制备富血小板血浆(PRP)和乏血小板血浆(PPP)，将PRP加入比浊杯中，杯中加入搅拌棒，再加入诱导剂，在恒温和特定的搅拌条件下，进行比浊，随着血小板发生聚集，PRP悬液的浊度随之下降，透光度增加。光电池将光浊度的变化转换为电讯号的变化，在记录仪上进行记录，根据描计曲线即可计算出血小板聚集的程度和速度［1］。

1.2 电阻抗法全血血小板聚集试验 用阻抗血小板聚集仪可测定稀释的抗凝全血的血小板聚集功能，将两个电极插入样本，当有电流通过时，血小板会粘附到电极上，然后添加诱导剂加以搅拌，在电极周围的血小板发生聚集，随着电极上聚集的血小板增多，两电极之间的电阻抗相应增加，用记录仪记录下电阻抗变化的速率和幅度，用来表示血小板的聚集反应。该试验的优点在于不用制备PRP，而且脂血中的血小板功能也可测量，但不适合血小板计数极低的患者［2］。静脉采血，0.109 mol/L枸橼酸钠1:9比例抗凝;取全血标本0.5 ml加0.9%生理盐水0.5 ml，放置在试验槽内，10 min后进行测定。此法也可对PRP或洗涤红的血小板进行聚集试验。

1.3 循环血小板聚集体检测 血液循环中存在的血小板聚集体在甲醛溶液中被固定下来，而在无甲醛的EDTA溶液中，则发生解聚分离。比较两份标本中游离血小板数，即可算出形成聚集体的血小板百分率。

1.4 体外自发性血小板聚集检测 枸橼酸钠抗凝的PRP在聚集仪中搅拌时，PRP中的血小板在不加诱导剂条件下发生聚集，此时聚集的产生与血小板内源性ADP释放有关［2］。采静脉血，枸橼酸钠抗凝，按比浊法制备PRP与PPP，PRP试管用石蜡封口置室温下30 min，取PRP 0.3 ml加入比浊管中，放入一根搅拌棒。调整 PRP与PPP在聚集仪透光度分别为90与10。将PRP在聚集仪中搅拌30 min。聚集率＞20%可确定为自发性聚集。

1.5 血小板功能分析仪-100 血小板功能分析仪-100(PFA-100)是微处理器控制的仪器，它可定量测定高切变力下血小板和血小板相关的止血功能。

2 临床意义

血小板聚集率降低见于血小板无力症，巨血小板综合征，贮存池病，梅—赫(May-Hegglin)异常，以及低(无)纤维蛋白原血症，尿毒症，肝硬化，服用血小板抑制药(如阿司匹林等)后。血小板聚集率增高见于高凝状态和血栓性疾病，如急性心肌梗死，心绞痛，糖尿病，脑血管病变，深部静脉血栓形成，高β-脂蛋白血症，抗原一抗体复合物反应，人工瓣膜，口服避孕药，高脂肪饮食，吸烟等。一般而言，血小板聚集率减低对疾病诊断有重要意义，但血小板聚集率增高仅有临床参考价值。在动脉粥样硬化血栓性并发症(心肌梗死、脑血栓、外周动脉闭塞)及高凝状态或血栓前期体内自发性血小板聚集物增多。本试验敏感性不高，但简单易行，并能反映体内情况，可做为体内血小板活化的一项参考指标。

3 血小板聚集试验质量控制

被检者一周内忌服影响血小板功能的药物，受检前8 h内禁止吸烟并空腹12 h以上，以防止采集乳糜血;采血时患者应放松，防止静脉挛缩;采血应顺利，避免反复穿刺，致使组织损伤或混入气泡;止血带压力尽量小，束缚时间不应过长，以免引起血小板释放反应;采血完毕应立即与抗凝剂充分混和，来回颠倒3～4次，避免用力振荡。标本应放在15～25℃温度下，低温会致使血小板激活。采血后试管应加盖，防止血液中的CO2逸出，使血浆pH值上升，血浆pH值6.8～8，可获得最佳聚集效果。试验报告得到之后，应对结果的可信性进行确认，对异常结果应结合临床资料进行分析。应掌握各种诱导剂诱导血小板聚集曲线参数的参考范围，掌握血小板聚集图形。低血小板数会影响血小板聚集，如果PRP中血小板计数低于100×109/L，结果就不可靠。

［1］ 刘毅敏，覃军．血小板聚集检测方法进展．检验医学，2004，19(4):383.

［2］ 欧阳锡林，林子林，王海宝，等．薄片法血小板聚集实验监测服用抗血小板药物患者．中国实验血液学杂志，2005，13(2):234-237.