盐酸萘乙二胺比色法测定葡萄酒中亚硝酸钠的含量

（广西梧州出入境检验检疫局 综合实验室，广西 梧州 543002）

0 前 言

亚硝酸钠常常被用在腌制食品中作为防腐剂和发色剂，它进入人体血液后会使降低血的携带氧能力，会使人得高铁血红蛋白症；另外，更重要的是，亚硝酸钠进入人体后会与仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸等次级胺进行结合，生成亚硝胺，我们都知道亚硝胺是一种致癌物，正是由于上述原因，使得亚硝酸盐含量的测定成为众多食品中一项必不可少的指标[1]。虽然在葡萄酒的国家标准GB15037—2006中并没有亚硝酸盐这一项指标的规定，但是随着国家对各类食品安全卫生项目专项整治活动的持续开展，以及消费者在食品安全卫生方面认知度的提高，不时有经销商要求检测葡萄酒中亚硝酸钠含量。截止到目前，测定食品中的亚硝酸钠含量的方法有以下几种：（1）离子色谱法；（2）示波极谱法；（3）催化动力学法、气相色谱法以及各种联用技术；（4）光度法:包括格里斯试剂比色法、催化（褪色）光度法、流动注射系统——分光光度法、顺序注射系统——分光光度法、导数光度法等；（5）荧光法等。本文研究了使用盐酸萘乙二胺比色法测定葡萄酒中亚硝酸钠的含量。

1 仪器与试剂

UV—2450紫外分光光度计：岛津公司；HNY-200B摇床：上海恒温控制器厂有限公司。

4 g/L对氨基苯磺酸溶液 （称取0.4 g对氨基苯磺酸溶于100 mL 20%盐酸中，置于棕色瓶中避光存放）；2 g/L盐酸萘乙二胺溶液 （称取0.2 g盐酸萘乙二胺溶解于100 mL水中，混匀后置于棕色瓶中避光存放）；106 g/L亚铁氰化钾溶液（称取53 g亚铁氰化钾，用水定容至500 mL）；220 g/L乙酸锌溶液（称取110.0 g乙酸锌，先加入15 mL冰乙酸溶解，用水定容至500 mL）。亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.100 0 g经干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解后定容至500 mL，该标准液每毫升相当于200 μg的亚硝酸钠；亚硝酸钠标准使用液：临用前吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 mL，以水定容至200 mL，该使用液每毫升相当于5.0 μg的亚硝酸钠。

2 实验方法

2.1 样品前处理

由于葡萄酒中含有大量的蛋白质和色素等有机物，会对测定的结果造成影响，故需对样品进行前处理。移取葡萄酒样品5.0 mL于500 mL容量瓶中，加入300 mL蒸馏水，分别加入活性炭粉2.0 g，于摇床上振摇30 min，以去除样品中的色素，加入5 mL铁氰化钾溶液，5 mL乙酸锌，以去除样品中的蛋白质，然后加水至刻度，摇匀，静置30 min.，以滤纸过滤，弃去初滤液30 mL。

2.2 葡萄酒中色素对测定的影响

6个500mL容量瓶中，各移取酒样5.0 mL，加入300 mL蒸馏水，分别加入活性炭粉0.0 g,0.5 g,1.0 g,1.5 g,2.0 g,3.0 g,4.0 g，于摇床上振摇30,min.，各加入5,mL铁氰化钾溶液，5 mL乙酸锌，加水至刻度，摇匀，静置30 min.，以滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，以蒸馏水调节零点，在538 nm处测定滤液吸光度。

2.3 标准曲线的绘制

吸取不同浓度亚硝酸钠标准液分别置于50 mL具塞比色管中，然后分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，充分混匀后静置5 min，各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，于最大波长538 nm处[2]测吸光度值，绘制标准曲线（以亚硝酸钠的含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 葡萄酒中亚硝酸钠的测定

吸取40ml上述经去除色素的酒样于50 mL带塞比色管中，另吸取0.00 mL,0.20 mL,0.40 mL,0.60 mL,0.80 mL,1.00 mL,1.50 mL,2.00 mL,2.50 mL亚硝酸钠标准使用液 （相当于 0.0 μg,1.0 μg,2.0 μg,3.0 μ g,4.0 μg,5.0 μg,7.5 μg,10.0 μg,12.5 μg亚硝酸钠），分别置于50 mL带塞比色管中。在标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，充分混匀后静置5 min.，各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min.，用2 cm比色杯，以零管调节零点，在波长538 nm处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做空白试验。

2.4 方法可靠性检验

使用上述方法对5组样品进行测定，计算结果的RSD值；然后在其中加入已知量的亚硝酸钠标准使用液，测定其回收率。

3 结果与讨论

3.1 葡萄酒中色素对测定的影响结果

图1 葡萄酒中色素对测定的影响结果

从图1我们可知，随着在样品处理过程中加入的活性炭的质量越来越大，样品在538 nm处的吸光度值越来越小，最后在加入2.0 g的时候基本趋于稳定，这是因为在样品中加入的活性炭越多，其中的色素的清除率越大，到加入2.0 g活性炭时，样品中的色素已基本清除完，所以吸光值趋于稳定。这也说明在2.1中处理样品时加入2.0 g的活性炭是正确的。

3.2 标准曲线

图2 亚硝酸钠标准曲线

从图2可知，当亚硝酸钠的含量为0～14 μg时，亚硝酸盐含量与吸光度值间的线性关系良好，其线性回归方程为y=0.0128x-0.0017，相关系数R2=0.996。

3.3 精密度实验结果

表1 样品的精密度试验结果

从表1我们可以看出，测试的5组样品结果的RSD值为1.49%，标准偏差几乎为0，从这两个我们可知此方法的精密度比较好，可以满足分析的要求。

3.4 回收率实验结果

表2 样品的回收率试验结果

由表2我们可以知道，5组样品的平均回收率为98.8%，回收效果很好，可以满足分析的测定要求。

4 结 论

经过上述实验我们可以得出，使用盐酸萘乙二胺比色法可以用于测定葡萄酒中亚硝酸钠的含量，其中亚硝酸盐标准曲线线性回归方程为y=0.012 8x-0.001 7，相关系数 R2=0.996，经过 5次测定结果得出其RSD值为1.49%，平均回收率为98.8%，回收率高，精密度好，可以用于检测葡萄酒中亚硝酸钠的含量。

[1]李玉茹，长春风.分光光度法测定肉制食品中亚硝酸盐的含量研究[J].河北农业科学，2007，11（4）：97-99.

[2]刘辉，田亚红，劳旺梅,等.盐酸萘乙二胺比色法测定腌制食品中亚硝酸盐的含量[J].中国酿造，2010，13（6）:157-160.