创伤对大鼠实验性牙周炎影响的研究*

胡友德 汪建中

（江西省人民医院 南昌330006）

1 材料和方法

1.1 实验动物、仪器和材料

1.1.1 动物 8 周龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠96 只，雌雄各半，体重200～280 g，普通级，由南昌大学医学院动物科学部提供。除A、B 两组用常规标准混合饲料喂养，C、D 两组用Keyes2000 牙周炎饲料加自身粪便水喂养外，其他喂养条件相同。

1.1.2 实验仪器 ZP-12P 生物组织自动脱水机，亚光YB-6LF 组织包埋机，电热恒温水浴锅，LEICA RM2135 组织切片机，Motic Med 6.0 数码医学图像分析系统。

1.1.3 实验材料 Keyes2000[6]牙周炎饲料（果糖56%、脱脂奶粉28%、面粉6%、酵母4%、苜宿榆3%、动物肝粉1%、食盐2%、少量蔬菜）南昌大学动物科学部配制；牙釉质粘合树脂，天津市合成材料工业研究所；牙用自攻自断螺纹钉，杭州西湖生物材料有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 参照随机数字表法将96 只SD大鼠染色后随机分为四组，空白对照组（A 组）、 创伤组（B 组）、牙周炎组（C 组）、创伤与牙周炎复合组（D 组）。A 组不做任何处理，常规标准混合饲料喂养；B 组于左侧上颌第一磨牙面正中植入一自攻自断螺纹钉并用牙釉质粘合树脂加固，常规标准混合饲料喂养；C 组不做任何处理，用Keyes2000 牙周炎饲料加自身粪便水喂养；D 组处理同B 组，用Keyes2000 牙周炎饲料加自身粪便水喂养。每组24只，雌雄各半，体重200～280 g。

1.2.3 标本提取和组织切片的制作 各组分别于实验开始后1、4、8、12 周用脊髓拉断法处死，每组每次随机处死6 只，雌雄各半，处死时间均选择为8：00～12：00。处死后分离左侧下颌第一磨牙区带牙龈和牙槽骨的组织块，放入一Eppendorf 管内，管壁外编号标记，管内加入4%多聚甲醛固定48 h。7%EDTA 4 ℃脱钙60 d，取出标本修整，酒精系列脱水，石蜡整体包埋，重新编号。包埋方向处于第一磨牙颊舌向；连续切片，厚度5 μm，HE 染色。以上操作由同一人完成。

1.2.4 观察结果与数据采集 利用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统低倍下选择有第一磨牙颊舌向最大切面的切片作为有效切片。仔细观察每一张切片上第一磨牙牙龈、牙周膜、牙槽骨的病理变化，记录每一张切片的观察结果。对牙根牙槽骨表面破骨细胞进行计数，破骨细胞指位于锯齿状边缘的破骨陷窝内或牙槽骨表面的多核嗜酸性巨细胞（核多于2 个）。随机选5 个视野（×400），将所得结果求平均值。测量牙槽嵴高度与釉牙骨质界到根尖距离的比值，测量方法是以牙槽嵴顶点在牙根表面的投影到根尖的距离除以釉牙骨质界到根尖的距离，分3 次测量求平均值。

1.2.5 统计处理 结果用SPSS12.0 进行统计学处理，所检测的两个数值型指标分布呈正态分布采用(±S)进行统计描述。同一组内4 个不同时间点及同一时间各实验组间的指标对比如满足正态、方差齐则采用单因素方差分析（One-way ANOVA），组间比较用LSD 法，否则非参数检验方法。

2 结果

2.1 破骨细胞数 见表1。组内分析：A 组在不同时间破骨细胞数没有变化，差异无统计学意义（P＞0.05）；B 组在第1 周明显增高，随后明显降低，差异有统计学意义（F=117.222，P ＜0.05）；C、D 两组随时间延长而明显增高，差异有统计学意义（F=153.333，P ＜0.05）。组间分析：第1 周时，B 组与D 组破骨细胞数明显高于其他两组，差异均有统计学意义；从第4 周到第12 周，C、D 两组与A、B 两组的差异明显增大，差异有统计学意义（F=230.504，P ＜0.05）；D 组明显高于C 组，差异均有统计学意义；在第12 周时，A 组与B 组比较差异无统计学意义。

表1 各组不同时间的破骨细胞数 (±S) 个

表1 各组不同时间的破骨细胞数 (±S) 个

组别n第1 周第4 周第8 周第12 周A 组 6 0.167±0.408 0.167±0.408 0.167±0.408 0.167±0.408 B 组 6 6.833±0.753 1.500±0.548 1.167±0.408 0.667±0.817 C 组6 1.167±0.408 4.667±0.817 7.167±0.753 9.000±0.632 D 组 6 6.833±0.753 8.500±0.548 10.667±0.816 12.333±0.516

2.2 牙槽嵴与釉牙骨质界到根尖距离的比值 见表2。组内分析：A、B 两组牙槽嵴高度降低不明显，差异无统计学意义；C、D 两组随时间延长而明显降低，差异有统计学意义（F=153.333，P ＜0.05）。组间分析：A、B 两组无明显差异，C 组比A、B 两组降低明显，而D 组又比C 组降低明显，两两比较差异均有统计学意义。

表2 各组不同时间的牙槽嵴与釉牙骨质界到根尖距离的比值 (±S)

表2 各组不同时间的牙槽嵴与釉牙骨质界到根尖距离的比值 (±S)

组别n第1 周第4 周第8 周第12 周A 组6 0.808±0.008 0.803±0.006 0.797±0.011 0.794±0.006 B 组6 0.802±0.005 0.795±0.011 0.794±0.009 0.792±0.006 C 组6 0.803±0.010 0.722±0.015 0.703±0.006 0.558±0.007 D 组6 0.806±0.007 0.693±0.006 0.563±0.007 0.495±0.008

3 讨论

牙周炎动物模型建立的方法有很多种。Caillon P[7]等用高糖饲料Keyes2000 喂养地鼠，6 周后，形成实验性牙周炎。杨新雪[8]报道以高糖食谱加粪便水饲养大鼠7 周可见牙周炎改变。Kuhr 等用牙颈部丝线结扎法结扎大鼠上颌第二磨牙颈部，发现明显的骨丧失发生在最初的15 d 内。Chang KM[9]等用接种特异菌法发现单一注射牙龈卟啉菌口腔接种能够于6 周后诱导大鼠实验性牙周炎的发生。Ichie YM[10]等研究发现，单一致病菌能够诱导实验性牙周炎，但多种致病菌的协同作用可加重病情进展的疾病的严重性。Dumitrescu AL[11]等通过在Wistar 大鼠下颌第二磨牙牙龈内单独注射脂多糖LPS 10 μg/μL，结果证明在大鼠龈下注射LPS 可以提供一个简单的、具有可重复性的而且与人牙周炎特征相似的实验性牙周炎动物模型。以上牙颈部丝线结扎法、接种特异菌法、注射脂多糖法实验本身对实验牙牙周造成直接创伤，而高糖饲料法对实验牙牙周不直接产生破坏，仅表现为创伤。所以，为了尽可能减少实验本身的干扰，本实验采用Keyes2000 高糖饲料加粪便水喂养的方法造成牙周炎动物模型。

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