人乳腺球蛋白及Ki-67在乳腺癌中的表达及临床意义

侯永强，刘金彪，王新征，邓 淼，王 宁，王明军，黄亚楷，邓 庆，王晓娟

乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤，世界卫生组织统计，全球每年约有120万人发病，50万人死亡。我国乳腺癌的发病率正逐年上升，并且有跃居女性恶性肿瘤首位的趋势[1]。乳腺癌的发病是一个多因素长期作用、逐步发展的过程。人乳腺球蛋白是一个乳腺相关糖蛋白，它是一个分泌家族(包括子宫球蛋白和lipophilin)成员的远亲[2]。研究表明，该蛋白是检测前哨淋巴结和外周血液中潜伏乳腺癌细胞的灵敏标记。如果在乳腺癌标本中检测乳腺球蛋白的表达情况与微转移有相关性，在今后的治疗中就会更加有效。Ki-67是一种与细胞增殖特别相关的核抗原，可以通过Ki-67抗原的检测，了解恶性肿瘤的细胞增殖活性，特别是对于乳腺癌病人。它是乳腺癌重要的增殖指标，对指导乳腺癌的临床化疗有一定的意义。联合检测hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表达可能有助于评估乳腺癌的临床分期，为制定合理的治疗方案提供参考信息。

1 材料和方法

1.1标本选取2009～2010年于河南科技大学第一附属医院外科进行手术治疗的152例乳腺癌组织作为实验组。所有患者年龄在29～84岁之间，中位年龄52岁。绝经前女性90例，绝经后62例，肿瘤<2 cm者72例，2～5 cm者76例，>5 cm者4例。腋窝淋巴结无转移者66例，腋窝淋巴结有转移者86例。术前所有病人均未行化疗或内分泌治疗。同时随机挑选30例乳腺良性病变组织作为对照组。

1.2操作步骤全部病例组织蜡块采用连续切片，切片厚度为4 μm，取相邻3张切片分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化一抗为鼠抗人单克隆抗体、Maxvision试剂盒购自福建迈新公司。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3结果判定由我院两位高级职称病理医师盲法读片，独立观察每张切片10个具有代表性的高倍视野。人乳腺球蛋白阳性判断标准：阳性染色者在细胞膜和(或)浆有棕黄色颗粒沉着。Ki-67阳性判断标准：阳性染色者在细胞核有棕黄色颗粒沉着。

1.4统计学处理研究资料采用SPSS 17.0统计软件进行χ2检验，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1人乳腺球蛋白的免疫组化结果人乳腺球蛋白定位于胞浆，呈棕黄色颗粒。人乳腺球蛋白在乳腺癌组、乳腺良性病变组的表达率分别为51.3%、0%。乳腺癌组和乳腺良性病变组差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组病人乳腺球蛋白表达阳性率比较

2.2人乳腺球蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理指标的关系人乳腺球蛋白的阳性表达与淋巴结转移、无显示、临床分期有关，与年龄、月经情况、诊断时肿瘤大小无关。见表2。

表2 乳腺癌人乳腺球蛋白的表达与临床病理因素的关系

2.3 Ki-67的免疫组化结果Ki-67定位于胞核，呈棕黄色颗粒。Ki-67在乳腺癌组、乳腺良性病变组的表达率分别为68.7%、0%。乳腺癌组和乳腺良性病变组差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组病人Ki-67表达阳性率比较

2.4 Ki-67在乳腺癌中的表达与临床病理指标的关系Ki-67的阳性表达与临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移未显示有关，与患者的年龄、月经状况无关。见表4。

3 讨论

肿瘤的浸润与转移是一个多基因参与、多步骤的复杂过程，是众多因子相互协调以及共同作用的结果，乳腺癌也不例外，威胁乳腺癌患者生命的主要原因是乳腺癌的复发和转移[3]。虽然检测乳腺癌微转移的肿瘤标志物有很多，但目前仍缺乏乳腺癌的特异标志物。人乳腺球蛋白是近年发现的乳腺癌特异性肿瘤学标志物，具有较好的灵敏性、较高的特异性，对乳腺癌的早期诊断具有较高的临床价值。它是1996年Watson等利用差式筛选和cDNA末端扩增(rapid amplification of cDNA ends，RACE)技术，从乳腺癌上皮细胞克隆出一个分子量10 kD的分泌型差异表达蛋白，并命名为人乳腺球蛋白[2]。它是一种乳腺特异蛋白，它的过量表达更倾向于乳腺上皮细胞的特异改变，所以它在微小的转移研究中更具有特异性。但由于人乳腺球蛋白抗原决定簇的多态性，制备特异性较高的乳腺癌肿瘤疫苗仍有许多问题亟待解决[4]。

表4 两组病人Ki-67表达阳性率比较

本研究采用免疫组化方法检测乳腺良性疾病和乳腺癌组织中人乳腺球蛋白及Ki-67表达结果显示乳腺癌组织中人乳腺球蛋白及Ki-67表达显著高于乳腺良性疾病组织中的表达。人乳腺球蛋白的阳性表达与淋巴结转移、组织学分级、临床分期及c-erbB2表达有显著关系，与年龄、月经情况、肿瘤大小无关。Ki-67的阳性表达与临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移情况有关，与患者的年龄、月经状况无关。

人乳腺球蛋白及Ki-67作为目前乳腺癌特异性最好的肿瘤标志物，对其功能的研究可进一步揭示乳腺癌的发生机制，指导临床，为基因治疗提供思路。在乳腺癌中hMAM和Ki-67的表达呈正相关，二者共同参与乳腺癌的浸润转移。联合检测hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表达可能有助于评估乳腺癌的临床分期，为制定合理的治疗方案提供参考信息。

参考文献：

[1] Colpitts TL，Billing Medel P，Friedman P，et a1.Mammaglobin is found in breast tissue as a complex with BU101[J].Biochem，2001，40(37)：11048-11059．

[2] Watson MA,Fleming TP.Mammaglobin, a mammary-specific member of the uteroglobin gene family,is overexpressed in human breast cancer[J].Res Cancer, 1996, 56(15):860-865.

[3] Allenspach EJ，Maillard I，Aster JC，et al．Notch signaling in cancer[J].Cancer Biol Ther，2002，1(5)：466-476．

[4] Jaramillo A，Majumder K，Manna PP，et a1．Identification of HLA-A3-restricted CD8+T cell epitopes derived from mammaglobin-A，a tumor-associated antigen of human breast cancer[J].Int J Cancer，2002，102(5)：499-506．