MMP-9和NO在川崎病患儿急性期血清中的表达及相关性研究

刘丽莎，戈建军，高 岭，朱纯亮，钟天鹰

(南京医科大学附属南京儿童医院检验科，南京210008)

川崎病，又称为皮肤黏膜淋巴结综合征，是一种好发于5岁以下儿童和婴幼儿的急性全身性血管炎性疾病。临床表现为持续发热，眼结膜充血，不同程度的口腔黏膜炎，多形性皮疹以及手足硬性肿胀伴指尖脱屑等[1]。病变可累及动脉、静脉和毛细血管，尤以冠状动脉明显，可导致冠状动脉瘤及心肌梗死。该病现已超过风湿性心脏病，成为小儿后天性心脏病的主要病因，并且可能成为成人缺血性心脏病(如动脉粥样硬化)的危险因素之一[2]。目前川崎病的发病机制尚不清楚，研究表明多种因素参与其中[3]。该项研究对30例急性期川崎病患儿血清中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)9和一氧化氮(NO)含量进行测定，旨在探讨两者在川崎病发病机制中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2010年6月至2011年6月在南京医科大学附属南京儿童医院门诊就诊的川崎病患儿30例，其中男19例，女11例，年龄3～6岁。所有病例临床诊断符合《诸福棠实用儿科学》诊断标准:①持续发热5 d以上，抗生素治疗无效;②四肢末端改变:初期手足硬性水肿，掌跖、指趾端发红，后期指趾端甲床皮肤移行处出现膜样蜕皮;③多形性皮疹;④双眼球结膜充血;⑤口唇及口腔改变:口唇潮红，杨梅舌，口腔及咽部弥漫潮红;⑥急性非化脓性颈部淋巴结肿大。所有患儿就诊前均未使用过免疫抑制剂或免疫调节剂，并除外先天性或遗传性疾病。同期选取南京医科大学附属南京儿童医院儿童保健科健康体检的正常儿童30例作为健康对照组，其中男17例，女13例，年龄3～6岁。两组在性别、年龄上比较均有均衡性。所有病例均取得患儿监护人的同意。

1.2方法

1.2.1外周血标本采集 分别采集健康儿童和急性期川崎病患儿(发病第1～11天)外周静脉血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝，以3000 r/min离心5 min沉淀细胞，吸取血浆置洁净 Eppendorf管中，放置－80℃冰箱冷冻以备MMP-9和NO检测。

1.2.2MMP-9和NO水平测定 采用酶联免疫吸附法检测血清中MMP-9表达水平，MMP-9检测试剂盒购自美国R＆D公司。采用硝酸还原法测定血清NO水平，试剂盒购自南京建成公司，严格按照说明书操作。

1.2.3统计学方法 应用SPSS 16.0软件对数据进行处理，计量资料用均数±标准差(±s)表示。组间比较采用t检验，MMP-9和NO表达相关性采用Pearson法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1急性期川崎病患儿血清MMP-9和NO水平变化与正常对照组比较，急性期川崎病组血清MMP-9及NO水平均显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)(表1)。

2.2MMP-9与NO表达的相关性 采用Pearson法对急性期川崎病组患儿外周血中MMP-9和NO含量进行相关性分析，结果显示，血清MMP-9水平与NO含量呈正相关(r=0.664，P ＜ 0.01)。

3 讨论

川崎病发病机制目前尚未明确，国内外研究表明其可能与单核/巨噬细胞参与的免疫激活，NO参与的血管损伤，MMP的作用以及血管内皮功能紊乱和损伤等有关[4-5]。MMPs是一组 Zn2+依赖性的内源性蛋白水解酶家族，可降解除多糖外的全部细胞外基质成分，并参与炎性反应、缺血缺氧损伤、心血管和癌症等的生理和病理过程。MMP-9是MMPs家族主要成员之一[6]，能降解明胶、Ⅳ型胶原、Ⅴ型胶原、Ⅵ型胶原、纤维连接蛋白和弹性蛋白，在细胞外基质的降解和组织重建中起非常重要的作用[7]。亦有研究发现MMP-9参与了川崎病患者血管壁的损伤和冠状动脉瘤的形成[8]。该项研究结果发现，急性期川崎病患者血清中MMP-9的水平明显高于正常对照组，表明MMP-9参与了川崎病的早期病程，与疾病的发生、发展有一定的关系，这也为进一步研究川崎病并发冠状动脉损伤病变奠定了实验基础。NO是体内由L精氨酸在NO合酶作用下产生的一种气体信号分子，生理条件下具有降血压，抑制血小板黏附、聚集、抗血栓、抑制细胞的增生、保护细胞等作用，但高浓度NO可引起血管壁炎症的发生，导致冠状动脉扩张、内膜增厚、管腔狭窄，与许多心血管疾病密切相关[9]。有文献报道[10]，在川崎病病程早期，中性粒细胞强烈表达诱导型NO合酶，表明急性期川崎病患者体内NO含量可能增加。该项研究发现，与正常对照组相比，急性期川崎病患儿外周血中NO表达上调，提示其可能参与川崎病早期炎症性变化以及冠状动脉的损伤过程。实验结果也表明NO表达与MMP-9含量呈正相关，说明两者在川崎病早期发病过程中发挥着一定的协同作用，促进川崎病的发生与发展。但MMP-9与NO在川崎病发病中确切的致病机制和具体关系尚不清楚，值得深入探讨。随着对MMP-9和NO在川崎病患儿发病过程，尤其在川崎病患儿伴发冠状动脉损伤中作用的进一步认识，及对MMP-9抑制剂使用前后病理变化的研究，其可能成为治疗川崎病的一个新靶标，并为防治川崎病及其冠状动脉损害提供新的思路。

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