低分子肝素对肿瘤化疗免疫功能的影响分析

程海花，许利华

（1.三原县人民医院，陕西 三原 713800；2.南通市第一人民医院，江苏 南通 226001）

一般情况下，化疗患者常常处于机体免疫功能的较低状况［1］。与正常人群相比，恶性肿瘤患者中免疫功能受损的发生率是正常人群的4倍［2］。低分子肝素（LMWH）是近10年发展起来的新一代肝素类抗凝药物［3］。本研究通过分别检测胃癌患者单纯化疗组和化疗＋低分子肝素组化疗前24h、化疗后1h、24h免疫指标的变化，以探讨低分子肝素对肿瘤化疗免疫功能的影响，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年2月～2011年4月在我院住院的胃癌患者80例，男49例，女31例，年龄18～64岁，平均（52.2±3.24）岁，包括腺癌40例、鳞癌30例、腺鳞癌10例。①所有病例均为病理组织学确诊且一线治疗无效或复发的胃癌患者；②年龄17～65岁；③卡氏评分＞60分；④能承受化疗；⑤患者同意并签署治疗知情同意书；⑥本治疗得到医院医学伦理委员会批准。随机分为治疗组与对照组各40例，两组患者年龄、性别、癌症病理类型比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治疗方法

两组都采用常规化疗方法，给予多西紫杉醇75 mg／（m2·dl）或多西紫杉醇75m／（m2·dl）＋顺铂80mg／（m2·dl）的化疗方案静脉给药。在此基础上治疗组加用低分子肝素（国药准字H20010299，海南通用同盟药业有限公司）5 000IU皮下注射Q12h。两组均治疗4周。

1.3 标本采集

两组分别于治疗前、化疗后1h、24h采集静脉血2mL，用3.2%枸橼酸钠抗凝，随即以3 000r／min离心10min分离血浆，最迟须在6h内分离血浆，血浆分存后储存于－20℃至检测时。

1.4 观察指标

①T细胞亚群检测：取抗凝全血100μl，加入10 μl CD3－PC5／CD25－PE，混 匀，室温避光反应20 min，每管加入预冷的溶血剂1mL，混匀，室温避光反应10min，取出后1 500r／min离心5min弃上清，1.5mL PBS洗2次（1 200r／min，5min），弃上清，加入500μl PBS缓冲液重悬细胞。FCM测定，CellQuest软件中获取数据和分析，分析细胞所占比例，收集测定细胞10 000个。②NK细胞检测：取抗凝全血100μl，加入10μlPE，混匀，室温避光反应20min，每管加入预冷的溶血剂1.5mL，混匀，室温避光反应10min，取出后1 500r／min离心5min弃上清，1.5mL PBS洗2次（1 200r／min，5min），弃上清，加入500μl PBS缓冲液重悬细胞。CellQuest软件中获取数据和分析，分析细胞所占比例，收集测定细胞10 000个。

1.5 疗效判定

两组患者均于治疗后复查胸片或CT，评价近期疗效（参照 WHO肿瘤病灶分类及疗效评价标准）［4］。

1.6 统计学方法

所有组间、组内数据均采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析，免疫指标数据结果以均数±标准差（±s）表示，各组均数的比较采用单因素方差分析（ANOVA），有差异显著者用Tamhane检验作两两比较（方差不齐）；临床疗效等资料对比采用χ2检验，P＜0.05为具有统计学意义。

2 结果

2.1 近期疗效评价

两组均无CR病例，治疗组的RR为30.0%，对照组为10.0%，治疗组的近期疗效明显高于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者近期疗效（例）

2.2 T淋巴细胞亚群的变化

两组患者CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8值于化疗后1 h与24h显著降低，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组在化疗后两个时间点的上述指标值下降均较对照组多（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者化疗前后T淋巴细胞亚群的变化（±s，%）

表2 两组患者化疗前后T淋巴细胞亚群的变化（±s，%）

注：与化疗前比较，①P＜0.05；组间比较，②P＜0.05

组别 指标 n 治疗前 化疗后1h 化疗后24h治疗组 CD＋340 58.52±6.22 48.12±6.22①② 44.26±4.32①②CD＋4 40 31.65±3.68 24.83±3.92①② 22.48±2.64①②CD＋4／CD＋8 40 1.31±0.28 1.22±0.32①②1.12±0.23①②对照组 CD＋340 57.12±5.35 52.34±6.36①47.88±6.12①CD＋4 40 31.32±3.2 27.92±3.64①26.05±3.26①CD＋4／CD＋8 40 1.34±0.12 1.33±0.25①1.21±0.12①

2.3 NK细胞的变化

两组患者NK细胞的数量于化疗后1h与24h显著降低，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组在化疗后1h与24h后两个时间点的NK细胞的数量下降均较对照组明显（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者化疗前后NK细胞的变化（±s，%）

表3 两组患者化疗前后NK细胞的变化（±s，%）

注：与化疗前比较，①P＜0.05；组间比较，②P＜0.05

组别 n 治疗前 化疗后1h 化疗后24h治疗组 40 12.33±2.12 10.13±1.23①② 9.22±1.22①②对照组 40 12.34±1.51 10.84±1.44① 10.32±1.45①

3 讨论

肿瘤的发生部分是由于机体全身或局部免疫功能失常而引起的，肿瘤的生长与发展也在很大程度上决定于机体的免疫系统状态［5］。增强机体的免疫功能对提高肿瘤治疗的预后起着重要作用，恶性肿瘤患者的免疫功能低下，而化疗药物可损害患者的免疫系统，导致免疫功能缺陷或下降。免疫功能指标如E－玫瑰结试验、CH50、C3补体、T细胞亚群、NK细胞活性、白介素Ⅱ等，在化疗后均可不同程度的下降，大部分抗肿瘤化疗药物有免疫抑制作用［6，7］。有研究报告显示治疗前T淋巴细胞亚群（TLS）水平在正常范围的小儿患者，在化疗后CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8值均显著下降［8］。在免疫功能指标上，T细胞来源于骨髓的淋巴样干细胞，在胸腺中经历早期T细胞发育、阳性选择和阴性选择3个不同的分化阶段后发育成熟为T细胞。NK细胞减少可导致游离出的微小癌栓成活［9］。

低分子肝素克服了普通肝素的出血、注射吸收低等缺点。低分子肝素能够增加膜脂流动性，使镶嵌在细胞膜脂质双层中的抗原决定簇暴露，增加肿瘤细胞的抗原性，利于体液免疫的杀伤［10］。同时可以使肿瘤细胞凋亡，并产生特异性免疫，从而起到杀伤肿瘤的作用。本文显示，化疗后两组均无CR病例，治疗组RR30.0%，对照组RP10.0%，治疗组的近期疗效明显高于对照组（P＜0.05）。两组患者CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8和NK细胞数量于化疗后1 h与24h显著降低，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组在化疗后两个时间点的上述指标值下降均较对照组明显（P＜0.05）。

总之，低分子肝素在胃癌化疗中的应用能够有效提高近期疗效，降低T细胞亚群和NK细胞数量，从而改善免疫功能，值得推广应用。

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