水产品中氯霉素的残留状况

解秋菊，许静，王秀娟

（哈尔滨工业大学（威海）海洋学院，山东 威海 264209）

水产品中氯霉素的残留状况

解秋菊，许静，王秀娟

（哈尔滨工业大学（威海）海洋学院，山东 威海 264209）

用酶联免疫试剂盒检测水产品中氯霉素的残留，试验结果表明，氯霉素标准半对数曲线为Y=-30.05X+37.35，R2=0.995，加样回收率≥70.09%，所检测的113份水产品中，除少数样品外，绝大多数样品在饲喂过程中未添加氯霉素。

酶联免疫；水产品；氯霉素

氯霉素（Chloramphenieol，CAP）是一种广谱抗生素，由于抗菌效果好，价格低廉，曾在一段时间内广泛用于预防和治疗动物疾病，在水产养殖业也有较广的使用范围，在海水养殖中被认为是抑制对虾病原弧菌作用最强的药物[1-2]。近年来，研究发现氯霉素存在着严重的毒副作用，可引起再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰色综合症等疾病[3]。氯霉素可在动物性食品中残留，并通过食物链在人体内富集，严重危害人类健康，而且低浓度药物残留会诱发致病菌的耐药性，对人类的健康构成潜在威胁。因此动物源性食品中氯霉素的残留受到世界各国和地区的高度重视，近年来欧盟、美国等发达国家已相继禁止氯霉素用于动物源性食品，并明确规定氯霉素残留限量为不得检出[4-5]。

氯霉素残留的检测方法很多，Hao-Yu Shen[6]对所有氯霉素前处理方法、检测方法作了对比，根据检测目的不同选用的检测方法也有差异,总结出常用的筛选和确证方法主要是ELISA和HPLC-MS-MS。酶联免疫法（ELISA）具有简单、快速、处理样品大、灵敏度高、特异性强等优点，本文以水产品为检测样品，用大连普瑞康生物技术有限公司的氯霉素检测试剂盒，检测样品的氯霉素残留。

1 材料与方法

1.1 氯霉素试剂盒

氯霉素试剂盒（灵敏度为0.05μg/kg）：大连普瑞康生物技术有限公司，包括：96孔酶标板、氯霉素标准液（0、0.05、0.15、0.45、1.35、4.05 ng/mL）、10倍浓缩萃取稀释液、10倍浓缩洗涤液、氯霉素酶标记物、底物溶液、反应终止液。

1.2 主要仪器

MK3型酶标仪:Thermo公司；Scientz-10型均质机：宁波新芝生物科技股份有限公司；ALC.210.4电子天平:ACCULAB；DRP-9082型恒温培养箱：上海森信实验仪器有限公司；4K-15型高速冷冻离心机：Sigma公司；MS1 Minishaker：IKA；1000 μL、200 μL、20 μL微量移液器：GILSON。

1.3 样品

石鲽、牙鲆、虾、螃蟹、河豚、泥鳅、鲐鱼、加吉鱼：均来自威海各养殖场。

1.4 方法

1.4.1 样品处理

鱼去皮，取背部肌肉，均质机制成均质物；虾、蟹去皮开壳，取可食用部分，制成均质物。

1.4.2 样品制备

将3 g样品剪碎后放入50 mL离心管中，再加入6 mL乙酸乙酯，并用均质机均质约1min，振荡30s。3000r/min，离心10 min，取2 mL上清液至玻璃管中，于50℃下氮气吹干。于玻璃管中加入正己烷2 mL，先将残余物完全溶解后，再加入1 mL萃取稀释液，振荡约30 s。3000 r/min，离心10 min，用吸管吸去上层液及中间乳化层部分，弃掉，取下层液备用。

1.4.3 样品测定

于适当微孔中分别加入100 μL氯霉素标准溶液和100 μL已制备好的样品溶液，每一微孔中再加入50 μL酶标记物，每个溶液做3个平行，充分混合，室温（25℃）下避光温育1 h。将微孔中的反应液甩掉，于每一微孔中加满洗液后甩掉，重复洗3次，在吸水纸上拍干。于每一微孔中加入100 μL底物溶液，充分混合，室温（25℃）下避光温育20 min。向每一微孔中加入100 μL反应终止液。用酶标仪于450 nm波长下读取数据。用样品或标准液吸光度值（B）除以0标准溶液吸光度值（B0），得到（B/B0）。以100×（B/B0）为纵坐标，以标准液浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线，根据每个样品的（B/B0）值从曲线上读出相对应的样品浓度。1.4.4 准确度测定

向1 g北极鳕鱼阴性样品中分别加入0.45、0.90、1.80 ng的氯霉素标准样品,每个浓度做3个平行。

2 结果

2.1 氯霉素标准曲线

氯霉素标准品检测结果见表1。

表 1 标准品检测结果Table 1 The result of the standard CAP

根据表1检测结果绘制标准半对数曲线，见图1。

从图1可知，曲线方程为Y=-30.05X+37.35，R2=0.995，式中：Y为（B/B0）×100；X为标准品浓度对数值。

2.2 样品测定结果

共检测了113份待出口水产，各样品的阳性份数、阳性率见表2。

从表2的结果中可以看出，石鲽、牙鲆、泥鳅3样品都出现了阳性，测定结果分别为0.515、0.117、0.383μg/kg，其他样品的阳性率都为0。

2.3 准确度测定

准确度测定结果见表3。

表 2 各样品氯霉素检测结果Table 2 The result of samples

表 3 回收率测定结果Table 3 The result of the recovery

从实验结果中可以看出：最低回收率为70.09%，最高为83.85%，试剂盒的回收率较高。

3 结论与讨论

本实验用酶联免疫法检测了威海各养殖场水产品中氯霉素的残留状况，结果表明除极少数水产品外，绝大多数的水产品在饲养过程中未被饲喂氯霉素。

酶联免疫法检测动物源性食品中氯霉素的残留已得到广泛的应用，毛丽莎等[7]用荷兰生产的试剂盒检测了市售的猪、牛、羊肉和猪肝中氯霉素的残留，然后用高效液相色谱和质谱连用对阳性样品进行确证，结果与试剂盒方法一致。高茂根等[8]用3种酶联免疫试剂盒检测了龙虾仁、鮰鱼片、肠衣中氯霉素的残留，并对3种试剂盒的性能进行了比较。

采用ELISA方法进行水产品中氯霉素残留检测，操作步骤虽然简便，但可能影响检测结果的因素也较多，分布在实验过程中的每一个环节[9]，在实验过程中应注意以下几点：

1）样品制备最为重要。在这一过程中要尽可能多地把样品中的氯霉素提取出来，这是保证检测结果准确可靠的前提，尤其是在最后取下层液时，一定要把乳化层和上层液去干净，否则，取出的下层液往往不纯。

2）在加样时要注意所加样品的准确性。加样不要太快，且要在微孔下1/3处注入，不要接触微孔内部，不要产生气泡，更不能溅出。

3）温育时的温度会对结果造成极大的影响，室温若是太高或太低，最好把酶标板置于恒温箱中进行。

4）用洗液洗涤时最容易造成微孔间的交叉污染，因次，在甩板时动作要干净利索且不要用力太猛，以防液体飞溅污染，最后一次甩板后在吸水纸上把液体拍干时，板要垂直，且用力不可太猛。

[1]马国军，曲秋芝，吴文华，等.抗生素在水产养殖上的应用[J].水产学杂志，2001，14(1):73-76

[2]胡莹莹,李爱，叶赛，等.高效液相色谱法与酶联免疫试剂盒测定海水中痕量氯霉素[J].分析试验室，2006，25(3)：112-114

[3]刘堃，高世同，吴丽明，等.定量ELISA法检测蜂蜜中氯霉素残留量研究[J].中国公共卫生管理，2004，20(3)：265-26

[4]蒋定国,杨大进.动物性食品中氯霉素残留检测技术的研究概况(综述)[J].中国食品卫生杂志,2002,14(2):44-47

[5]周正红,邓斌,林保银.氯霉素类抗生素残留分析研究进展[J].肉类研究,2006(3):34-37

[6]Hao-Yu Shen,Hai-Liang Jiang.Screening determination and confirmation of chloramphenicol in seafood,meat and honey using ELISA,HPLC UVD,GC ECD,GC MS EI SIM and GCMS NCI SIM methods[J].Analytica Chimica Acta,2008，535(4)：33-41

[7]毛丽莎，刘红河，刘桂华.动物源性食品中氯霉素残留量的检测方法研究[J].现代预防医学，2010，37(6)：1123-1125

[8]高茂根，杨瑞章，王太全，等.3种ELISA试剂盒检测动物产品中氯霉素残留的应用[J].中国兽医杂志，2009，45(9)：57-58

[9]刘丽丽.酶联免疫法（ELISA）检测水产品中氯霉素残留量的影响因素及控制方法[J].齐鲁渔业，2010，27(2)：7-9

Residues of Chloramphenieol in Aquatic Products by ELISA

XIE Qiu－ju，XU Jing，WANG Xiu－juan
（School of the Ocean，Harbin Institute of Technology at Weihai，Weihai 264209，Shandong，China）

The residues of Chloramphenieol in aquatic products of Weihai was detected by enzyme－linked immunoassay （ELISA），the results showed that the standard curve of Chloramphenieol is Y＝－30.05X＋37.35，R2＝0.995，the recoveries≥70.09%，the vast majority of 113 samples were not feeded Chloramphenieol except for a few samples.

ELISA；aquatic products；Chloramphenieol

解秋菊（1972—），女（汉），工程师，硕士，研究方向：食品微生物。

2011-04-11