牡蛎多糖提取工艺的研究

张艳军，李超柱，彭重威，陈艳辉

（钦州学院 化学与化工学院，广西 钦州 535000）

牡蛎多糖提取工艺的研究

张艳军，李超柱*，彭重威，陈艳辉

（钦州学院 化学与化工学院，广西 钦州 535000）

优化提取工艺条件，从牡蛎中提取具有调节机体免疫、抑制肿瘤、延缓衰老、降血糖、血脂、等生物活性的多糖。采用硫酸－苯酚法测定牡蛎多糖，根据L9（34）正交试验对牡蛎多糖（Polysaccharide of Oyster）的提取条件进行优化，确定水提取多糖的工艺参数为：pH为6、提取时间5 h、提取次数为3次、水浴温度为75℃，该条件下多糖得率达2.56%。

牡蛎多糖；提取；苯酚－硫酸比色法；正交试验

牡蛎，属牡蛎科（Ostreidae真牡蛎）或燕蛤科（Aviculidae珍珠牡蛎），双壳类软体动物，分布于温带和热带各大洋沿岸水域[1]。据统计，全世界已发现的就有100多种，分布于热带和温带。在我国沿海牡蛎分布很广，渤海、黄海至南沙群岛均产，约有20种。牡蛎肉肥爽滑，味道鲜美，营养丰富，素有“海底牛奶”之美称，是沿海一种重要的海洋经济贝类[2]。西方牡蛎仍被誉为“神赐魔食”，日本人则誉之为“根之源”。在我国有“南方之牡蛎，北方之熊掌”。牡蛎中含有海洋生物特有的多种活性物质，其中含有的多糖，具有调节机体免疫、抑制肿瘤、延缓衰老、降血糖、血脂、等生物活性[3-4]。广西钦州是中国著名的“牡蛎之乡”，为充分发挥地方资源，本文选取了“钦州四大特产”之一的牡蛎，对其中多糖的提取工艺进行研究，为开发广西地区丰富的海洋资源提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

新鲜牡蛎500 g：采于广西钦州茅尾海海域。

1.1.2 试剂

苯酚（AR）、硫酸（98%）、乙醇（95%）、葡萄糖（AR）。

1.1.3 仪器

SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城工贸有限公司；721E分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司；LB610型电子天平：上海上天精密仪器有限公司；RE-52型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；LD4-2A离心机：上海梅香仪器有限公司；冰箱（新飞）、数显鼓风干燥箱101-3A：绍步伐市沪越科学实验仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 多糖提取方法

取新鲜牡蛎20 g，用自来水清洗3遍，粉碎，匀浆，取牡蛎匀浆液，加入到一定pH的水溶液中，水浴提取，过滤，离心，减压浓缩，醇沉得粗多糖，离心后取沉淀冷冻干燥，在冰箱中保存备用。

1.2.2 测定方法

苯酚-硫酸法：苯酚-硫酸法是测定多糖的常用方法。其原多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处进行测定。

取一定量的多糖，溶解，定容到50 mL，配制成多糖溶液。取一定体积多糖溶液，加入80%的重蒸苯酚溶液和浓硫酸，摇匀，放置冷却到室温，分光光度计测定吸光度，再根据多糖标准曲线计算多糖的得率。

1.2.3 计算方法

牡蛎多糖含量的计算：硫酸-苯酚法测定多糖提取液中的多糖得率为：

式中：X为在Y吸光度下根据回归方程计算所得的值；ρ[5]为校正系数，取0.9。

2 试验步骤

2.1 最大吸收波长的确定

按照2.2方法，在比色管中加入1.0 mL标准葡萄糖溶液（0.1000 mg/mL），加入1.2 mL 80%重蒸苯酚溶液、6 mL浓硫酸，并用蒸馏水定容到10 mL，摇匀，冷却至室温后，在分光光度计上检测吸收谱峰值，490 nm处为最大吸收峰值。如图1及表1所示。

2.2 标准曲线的绘制

在比色管中，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL的标准葡萄糖溶液，加入1.2 mL80%重蒸苯酚溶液，再加入6 mL浓硫酸、并用蒸馏水定容到10 mL，摇匀，冷却到室温，用分光光度计在490 nm下测吸光度，如表2。以吸光度（Y）对葡萄糖的用量得回归方程：y=3.4357x+0.0037，R2=0.9992。

表 1 吸光值随波长变化的数据表Table 1 The absorpion spectrum of different wavelength

表 2 吸光值随葡萄糖的用量变化的数据表Table 2 The absorption spectrum of different concentration glucose

2.3 牡蛎多糖的提取过程正交试验

牡蛎多糖正交试验及工艺条件的优化：本研究根据各因素水平试验结果，选定以pH、提取时间、提取次数、提取温度（℃）为因素设计为四因素、三水平的正交试验L9（34），对牡蛎多糖提取工艺进行优选，因素水平见表3，正交试验结果见表4。

表 3 牡蛎多糖提取因素水平表Table 3 Factors and levels of orthogonal test of polysaccharide of oyster

表 4 正交试验表及结果Table 4 Polysaccharide extraeting rate of orthogonal test

以多糖收率为考察指标，由表4分析得知，各因素作用主次为A>C>D>B。从极差分析得知，诸因素对多糖提取收率的影响顺序为：A（pH）＞C（提取次数）＞D（提取温度）＞B（提取时间）。即各因素影响的顺序是：pH对多糖收率影响较大，其次是提取次数，时间对多糖收率影响最小，对结果均无显著性影响。故依据直观分析结果，结合生产成本，选择牡蛎多糖的最佳提取工艺参数为A3B3C3D2，pH为6、提取时间为5 h、提取次数为3次、水浴温度为75℃。

3 结论

牡蛎多糖的最佳提取工艺参数为A3B3C3D2，pH为6、提取时间5 h、提取次数为3次、水浴温度为75℃，该条件下多糖得率达2.56%。

[1]刘晓,王海艳,张素萍,等.中国近海牡蛎系统分类研究的现状和对策[J].动物学杂志,2003,4(3):3-4

[2]陈惠源,蔡俊鹏.牡蛎的营养药用价值及其开发利用[J].中药材,2005,28(3):172-174

[3]曾利荣,张尔贤.牡蛎的食用与药用价值及其开发利用[J].自然杂志,1998,20(6):321

[4]尹淑敏,李凤谦.牡蛎的药用[J].中国医学杂志,1994,12:751-752

[5]张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].上海科学技术出版社,1987:6-7

Study of Extraction and Methods of Polysaccharide of Oyster

ZHANG Yan－jun，LI Chao－zhu*，PENG Chong-wei，CHEN Yan－hui，
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Qinzhou University，Qinzhou 535000，Guangxi，China）

The author made a study on the optimum preparation procedure for extraction of polysaccharide from the Oyster through sulfate－phenol method，the orthogonal test of four factors and three levels were studied to obtain the extracting technology of oyster.The optimal technical conditions were：the pH was 6，extraction time was 5 hours，extraction 3 times and extraction temperature was 75 ℃，extracting ratio was 2.56%.

polysaccharide of oyster；extraction；sulfate－phenol method；orthogonal test

广西自然基金（桂科自0832281）、（2010GXNSFA013062）；广西教育厅面上项目（200708MS072）、（200911MS241）

张艳军（1980—），女（汉），讲师，硕士研究生，研究方向：天然产物化学及生物活性物质的提取、分离研究。

*通信作者：李超柱（1957—），男（汉），副教授，学士，研究方向：天然产物化学及有机合成。

2011-04-18