夏明亮 刘 婕 齐德生 张妮娅 香红星
(1.华中农业大学动物科技学院 饲料与饲料生物技术实验室,湖北武汉 430070;2.武汉市多宝微生物技术有限公司,湖北武汉 430312)
天然矿物在畜牧业中已经有广泛的应用。与天然矿物相比,改性矿物所占用的配方空间更小,而且能够吸附多种霉菌毒素,对重金属元素吸附量也更大,控制腹泻和促生长作用也好于天然矿物添加剂,所以,近年来关于改性矿物添加剂应用于畜牧业的研究也越来越多。
本试验以肉仔鸡为试验动物,探讨日粮中添加蒙脱石、铜改性蒙脱石(Cu-MMT)和双季铵盐改性蒙脱石(DODMAB-MMT)对肉仔鸡生产性能、矿物元素沉积和肠道微生物的影响。
双十八烷基二甲基溴化铵(纯度≥99%,厦门先端科技有限公司);五水硫酸铜(分析纯,天津市恒兴化学试剂有限公司);蒙脱石(黄石大冶市保安镇风华膨润土厂);DODMAB-MMT按照张葵花等的方法进行改性处理,季铵盐含量为25.04%;Cu-MMT按照Guo等的方法进行改性处理;使用原子吸收分光光度计测定上清液中Cu2+含量,差量法计算Cu-MMT中Cu2+含量为3.24%。
科宝500型肉仔鸡,购于宜昌正大畜牧有限公司武汉分公司。基础日粮的配制参考NRC(1994)肉鸡营养需要量,其组成及营养水平见表1,各试验组日粮组成见表2。
表1 基础日粮组成及营养水平(干物质基础)
表2 各试验组日粮组成
选取210羽7日龄健康、体重相近的科宝500型肉仔鸡,随机分为7组,每组5个重复,每个重复6羽鸡。对照组饲喂基础日粮,其余处理组按要求饲喂试验日粮,试验肉鸡采用地面分栏平养。预试期7 d,试验期21 d(即7~28日龄),7日龄点眼接种新城疫弱毒活疫苗。预试期间所有肉仔鸡饲喂基础日粮。7日龄挑选体重相近的健康肉仔鸡进行分组,并开始饲喂试验日粮。整个试验期,所有鸡只自由采食、饮水,试验当天以及每周以重复为单位绝食(自由饮水)12 h后称重,同时在饮水中添加电解多维以降低称重应激;试验期间每天以重复为单位详细记录采食量,计算7~28日龄的平均日采食量、平均日增重及料肉比。
28日龄所有试验鸡绝食(自由饮水)12 h称重,然后每重复取1羽体重接近该重复平均体重的肉仔鸡,颈动脉放血处死,同时采血至已经加入抗凝剂的离心管中用于测定相关指标。
将鸡解剖后,剥离左侧胸肌和腿肌,剥离左侧胫骨。将肝脏、肾脏、脾脏取出,剥离脂肪组织后称重,放入-20℃保存,用于测定相关指标。取出左侧盲肠,用脱脂棉线结扎,将小肠中的食糜挤压至回盲结合部附近,两端用棉线结扎,-20℃保存,用于测定相关指标。
1.5.1 生长性能的测定
以重复为单位每天记录采食量,7、14、21、28日龄早晨空腹称重,计算平均日增重、平均日采食量和料肉比(平均日采食量/平均日增重)。
1.5.2 屠宰性能的测定
第4周(第4周屠宰,以测定蒙脱石对肉鸡的短期影响)和试验结束后,每个重复取1只鸡处死,屠宰,取样,测活重、屠体重(去血、去毛)、全净膛重、半净膛重及组织器官重量指数。
1.5.3 微量元素和钙、磷指标的测定
分别称取一定数量肝脏、肾脏、脾脏、胸肌、腿肌样品,65℃烘干后回潮称重,置于马弗炉中,250℃炭化至无烟后,600℃灼烧3 h,冷却后用加入10 ml 1∶3盐酸和0.3 ml硝酸煮沸溶解,定容至50 ml容量瓶,用原子吸收分光光度计测定其中的微量元素铁、锌的含量。将胫骨于65℃烘干后回潮称重,采用上述方法测定其中微量元素铁、锌的含量,用EDTA-二钠络合法测定其中钙含量,比色法测定其中磷含量。微量元素含量和钙、磷含量以风干物质为基础。
将采集的血液进行湿法消化:先用硝酸和高氯酸进行消煮,冷却后转移到容量瓶中定容,再用原子吸收分光光度计测定其中的微量元素铁、锌和钙浓度,以比色法测定其中磷含量。微量元素含量和钙、磷含量以血液体积(ml)为基础进行计算。
1.5.4 肠道微生物指标的测定
总厌氧菌计数用Wilkins Chalgren琼脂,总需氧菌计数用Brain Heart Infusion琼脂,乳酸杆菌计数用MRS琼脂,大肠杆菌计数用MacConkay琼脂。采用平板涂布方法进行盲肠和小肠内容物细菌计数。无菌条件下,称取盲肠或小肠内容物0.5 g左右进行10倍梯度稀释,在适宜稀释度取100 μl涂布于琼脂平板,涂布均匀后置于37℃恒温培养箱中培养。大肠杆菌和总需氧菌需氧培养24 h活菌计数,乳酸杆菌和总厌氧菌厌氧培养48 h活菌计数。
以SAS(6.12)统计软件对试验结果进行单因素方差分析,采用Duncan's法多重比较,以P<0.05为差异显著水平,试验结果全部以平均数±标准差(M±SD)表示。
表3 不同处理组肉仔鸡生长性能(n=30)
由表3可知,各组采食量之间没有显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,处理4组平均日增重降低了11.59%(P<0.05),其余各组虽然也有降低的趋势,但差异不显著 (P>0.05)。处理3组料肉比最低,仅为1.64,处理4组料肉比最高,达到1.75,二者之间差异显著(P<0.05),其余各组料肉比介于处理3组和处理4组之间,且相互之间没有显著性差异(P>0.05)。
表4 不同处理组肉仔鸡屠宰性能(%)(n=5)
不同处理对28日龄肉仔鸡屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率均无显著影响(P>0.05)。
2.3.1 对肉仔鸡肝脏和脾脏中微量元素含量的影响(见表5)
表5 不同处理组肝脏和脾脏中锌和铁含量(μg/g)(n=5)
不同处理对肝脏中锌的含量有影响。和对照组相比,处理4组、6组均能够显著提高肝脏中锌的浓度,分别提高了311.34%和259.27%(P<0.05)。相反的是,处理1组和处理2组有降低肝脏中锌浓度的趋势(P>0.05)。不同处理对肝脏中的铁的浓度和脾脏中的锌和铁的浓度无显著性影响。
2.3.2 对肉仔鸡肾脏中微量元素含量的影响(见表6)
表6 不同处理组肾脏中微量元素含量(μg/g)
结果显示,各处理组肾脏中锌、铁含量均无显著性差异(P>0.05)。
2.3.3 对肉仔鸡胸肌和腿肌中锌的影响(见表7)
表7 不同处理组胸肌和腿肌中锌含量(μg/g)
和对照组相比,各个处理组中胸肌锌含量均有降低的趋势,且随着蒙脱石或改性蒙脱石用量的增加,胸肌中锌含量降低幅度增大,但各组之间差异不显著(P>0.05)。不同处理组之间腿肌中锌含量无差异。
2.3.4 对肉仔鸡胫骨中微量元素和钙、磷含量的影响(见表8)
表8 各组胫骨中微量元素及钙、磷含量
各处理组之间胫骨钙含量并未出现差异(P>0.05)。与对照组相比,处理4组胫骨锌含量显著降低了34.2%(P<0.05),其余各组与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。处理 4 组铁含量降低了 26.34%(P<0.05),处理2、3、5、6组也有降低胫骨铁含量的趋势,但差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,处理4组胫骨磷含量降低了17.66%(P<0.05);处理6组胫骨磷含量也降低了 5.7%,但差异不显著(P>0.05)。
2.3.5 对肉仔鸡血液中微量元素和钙、磷浓度的影响(见表9)
表9 各组血液中微量元素及钙、磷含量(μg/ml)
不同处理组之间锌、钙、磷水平都没有显著性差异(P>0.05)。和对照组相比,在日粮中添加蒙脱石或改性蒙脱石产品,有提高血液中铁含量的趋势,但差异不显著(P>0.05)。
表10 各组肉仔鸡盲肠内容物微生物含量[log10(cfu/g内容物)]
表11 各组肉仔鸡小肠内容物微生物含量[log10(cfu/g内容物)]
各个处理组之间,盲肠和小肠内容物的总需氧菌、总厌氧菌、乳酸杆菌以及大肠杆菌浓度均无显著性差异(P>0.05)。
本试验中,肉仔鸡日粮中添加0.2%和0.5%蒙脱石(处理1组、处理2组),其平均日采食量、平均日增重和料肉比与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。
大量研究表明,日粮中添加适量Cu-MMT能够改善动物生长性能。杨荣芳等在仔猪和肥育猪日粮中添加Cu-MMT,能够提高平均日增重,降低料肉比。杨荣芳等认为,Cu-MMT能够改善动物生长性能可能的原因为:①Cu-MMT能够吸附肠道有害细菌,使得机体消化道内环境得到改善;②Cu-MMT可以改善小肠的形态结构,促进营养物质的吸收;③Cu-MMT能够刺激小肠黏膜产生与促进营养物质吸收的相关酶的分泌。Xia等在雄性肉仔鸡日粮中分别添加0.15%蒙脱石和0.15%Cu-MMT,发现添加Cu-MMT能够增加肉仔鸡的平均日增重。本试验结果表明,当日粮中Cu-MMT添加量达到0.5%时,与对照组相比较,肉仔鸡料肉比升高,平均日增重显著下降(P<0.05),表明肉仔鸡前期日粮中添加0.2%Cu-MMT是比较适宜的,这与马玉龙等、Xia等学者的推荐添加量也比较接近。而当肉仔鸡日粮Cu-MMT添加量达到0.5%时,对生长性能会产生不利影响。在肉仔鸡日粮中添加0.2%~0.5%DODMAB-MMT,对肉仔鸡料肉比无影响。
在动物日粮中添加蒙脱石时,由于蒙脱石层间具有大量可交换阳离子,所以理论上可能会在动物体内和其他动物体所需要的阳离子发生交换吸附,从而可能会对动物体微量元素和钙、磷吸收等产生一定影响。为了考察日粮中添加蒙脱石或者改性蒙脱石产品是否会对肉仔鸡的微量元素和钙、磷吸收产生影响,本试验检测了相关组织器官中的微量元素沉积、胫骨微量元素和钙、磷沉积以及肉仔鸡血液中微量元素和钙、磷水平。
本试验结果表明,日粮中添加蒙脱石或改性蒙脱石对肉仔鸡肾脏、胸肌、脾脏和腿肌锌浓度无影响,但是日粮中添加0.5%Cu-MMT或0.2%~0.5%季铵盐改性蒙脱石,会显著增高肝脏中锌的水平(P<0.05)。相反的是,日粮中添加0.5%Cu-MMT显著降低胫骨锌含量(P<0.05),添加 0.2%Cu-MMT 或 0.2%~0.5%季铵盐改性蒙脱石,也有降低胫骨锌的趋势(P>0.05)。日粮中添加0.2%~0.5%Cu-MMT以及季铵盐改性蒙脱石,都有降低胸肌中锌含量的趋势(P>0.05)。齐德生在AFB1污染的日粮中添加0.5%改性蒙脱石,对胫骨锌沉积无影响,可能是因为改性蒙脱石主要和AFB1结合占据了其结合位点。所以,在日粮中添加0.5%改性蒙脱石时,需要适当考虑增加日粮中锌的含量。本试验结果表明,日粮中添加0.5%Cu-MMT,降低了胫骨铁含量,日粮中添加0.5%蒙脱石、0.2%Cu-MMT或0.2%~0.5%DODMAB-MMT,均有降低胫骨铁含量的趋势,但差异不显著(P>0.05)。
钙、磷是体内含量最多的矿物质元素,国内外大量试验都通过血液钙、磷水平和胫骨钙、磷水平的变化来评价家禽机体的钙、磷营养状况。本试验结果表明,肉鸡日粮中添加蒙脱石或改性蒙脱石之后,血液钙、磷水平并未发生显著变化。胫骨钙水平也无变化,但是添加0.5%Cu-MMT,显著降低了胫骨磷浓度(P<0.05),日粮中添加0.5%季铵盐改性蒙脱石,也有降低胫骨磷浓度的趋势(P>0.05)。有研究表明,低聚合羟基铁离子-蒙脱石复合体对土壤中的磷也有很好的吸附效果。所以,可能是由于蒙脱石在体内会吸附磷,从而导致胫骨磷浓度下降。为了保证胫骨能够沉积足够磷,在日粮中添加0.5%铜改性或季铵盐改性蒙脱石时需要增加日粮中磷水平。
本研究体外试验表明,Cu-MMT和DODMABMMT对大肠杆菌(E.coli)和猪链球菌(S.suis)有良好的抗菌效果,这与众多研究者的结果一致。大肠杆菌是动物肠道的正常菌群,某些大肠杆菌可能会引起腹泻及其他多种炎症。乳酸杆菌能够拮抗致病菌,而且能黏附于肠道细胞上,从而保护动物肠道。肠道总需氧菌和总厌氧菌的数量从一定程度上反映了肠道的健康状况,总需氧菌适当下降、总厌氧菌适当升高有利于动物的肠道健康。马玉龙等在肉仔鸡日粮中分别添加1%和2%Cu-MMT,发现都能使21日龄肉仔鸡小肠和盲肠大肠杆菌的数量显著减少(P<0.05),对总需氧菌、总厌氧菌和乳酸杆菌数量没有影响,对42日龄肉仔鸡小肠和盲肠总需氧菌、总厌氧菌、大肠杆菌和乳酸杆菌数量没有影响。Xia等报道,肉仔鸡日粮中添加0.15%蒙脱石,有降低盲肠大肠杆菌数量的趋势(P>0.05),添加0.15%Cu-MMT可以显著降低盲肠大肠杆菌数量(P<0.05)。Xia等报道,断奶仔猪日粮中添加0.15%Cu-MMT会显著降低小肠中大肠杆菌和梭菌数量(P<0.05),而添加0.15%蒙脱石则不能起到降低肠道有害细菌数量的目的。本试验结果表明,在肉仔鸡日粮中添加蒙脱石或改性蒙脱石,对小肠和盲肠中的总需氧菌、总厌氧菌、大肠杆菌和乳酸杆菌数量都没有影响。本试验与前人的研究结果产生差异的原因是:①饲养环境不同导致动物的健康状况有所不同;②蒙脱石及改性蒙脱石的添加量不同。
肉仔鸡日粮中添加Cu-MMT或DODMAB-MMT时,对肠道微生物不会造成影响,对动物有一定的促生长作用。但是体内微量元素的沉积会受到一定的影响,对胫骨中磷的沉积能产生较大的影响,所以在饲料中添加Cu-MMT或DODMAB-MMT时要注意适当补充微量元素和磷。
(参考文献34篇,刊略,需者可函索)