一例鸡痘的病理学观察

赵 玲 ，刘 艳 ，宋国华 ，刘 燕 ，吴玉梅 ，徐 凯

（1.四川省洪雅县畜牧兽医局，四川 洪雅 620340；2.四川省内江市畜牧局，四川 内江 641000）

雅安某养殖规模为3000只左右的鸡场，鸡群感染了某疾病，发病率为50%，死亡率为30%左右。2012年6月12日，此鸡场送检10只5周龄病鸡，其临床表现为冠髯及头部水肿，皮肤上可见大量的坏死结痂。笔者对其心、肝、脾、肺、肾、皮肤作了病理学诊断，同时也对此病例进行了鸡瘟和禽流感的血清学鉴别诊断，具体报告如下：

1 材料与方法

1.1 病料来源 雅安某鸡场送检的10只5周龄病鸡，分别采取该10只病鸡的心、肝、脾、肺、肾、皮肤等组织样本。

1.2 仪器设备及病毒、血清、试剂等 HE染色试剂、石蜡，切片机、烘箱、热水箱、显微摄影系统；鸡瘟病毒、禽流感病毒、酶标SPA、待检病鸡血清，0.01 mol/L PBS封闭液，2mol/L H2SO4，pH 9.6的碳酸盐缓冲液，3%H2O2，柠檬酸盐缓冲液，OPD、酶标板、酶联检测仪、微量加样器等。

1.3 方法

1.3.1 病理学诊断

1.3.1.1 病料固定。用福尔马林（10%）固定12~24h，将组织修成1 cm×1 cm×0.5 cm的切块，继续固定6~12 h。

1.3.1.2 水洗及脱水。水洗（流水冲洗1h左右），依次用75%酒精浸泡6~12 h，85%酒精浸泡6~12 h，95%酒精浸泡12 h，无水乙醇Ⅰ浸泡1~2 h，无水乙醇Ⅱ浸泡1~2 h。放入甲苯液透明，甲苯液Ⅰ1~2 h，甲苯液Ⅱ1~2 h。

1.3.1.3 包埋。将标本放入甲苯石蜡，在温度为60℃的温箱内保持30min，再将标本转入纯石蜡于60℃烘箱中保持1~2h，然后迅速将溶蜡倒入模子内并将材料放入底部。

1.3.1.4 切片。将蜡块底部熔化后迅速粘在木块上（2.5cm×2cm×1.2cm），修整多余的蜡，使蜡块呈梯形，然后在切片机上切片（进入距为5nm）。

1.3.1.5 表片。切下蜡片放入35℃左右的温水中让其自然伸展，再将涂上蛋白胶的载玻片放入水中，同时捞起切片材料，最后放入37℃烘箱内干燥。

1.3.1.6 染色。将切片依次在下述溶液中浸泡：二甲苯Ⅰ2~5min，二甲苯Ⅱ2~5min，无水乙醇Ⅰ1min，无水乙醇Ⅱ1 min，95%酒精 1 min，85%酒精 1 min，75%酒精1 min，自来水洗2 min，苏木紫浸10 min，自来水洗1 min，1%盐酸酒精分化30s，水洗约5次，0.5%氨水促蓝1 min，水洗1 min，1%伊红溶液染色2~5 min，水洗1 min，75%酒精数秒，85%酒精数秒，95%酒精1 min，无水乙醇Ⅰ5min，无水乙醇Ⅱ5~10min，二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5~10min。最后在每张载玻片上滴一小滴树脂胶，盖上盖玻片，放入烘箱烘干。

1.3.2 血清学诊断 病鸡的临床表现为冠髯及头部水肿，皮肤上可见大量的坏死结痂。怀疑为鸡瘟或禽流感，因此作了血清学鉴别诊断，主要进行了酶联免疫吸附试验（ELISA）。

步骤如下：用碳酸盐缓冲液稀释鸡瘟和禽流感病毒病原，加样置湿盒包被；用PBS冲洗酶标板，以微量加样器在每孔内加PBS封闭液，置湿盒封闭，再用PBS冲洗酶标板；以微量加样器在每孔内加PBS，在酶标板的第1孔加待检血清，混匀，依次倍比稀释，置湿盒内作用2h；用PBS冲洗酶标板，再用PBS稀释酶标SPA后将稀释液加入每孔中，置温盒内作用2 h；用PBS冲洗酶标板，将柠檬酸盐缓冲液与OPD、H2O2混匀，向每孔中加入此混合液，置湿盒内避光显色10 min；最后用浓硫酸终止反应。

2 结果

2.1 病理学诊断结果 通过对10例病鸡的心、肝、脾、肺、肾、皮肤作病理切片，然后染色镜检，观察到心、肝、脾、肺、肾均无明显的病理变化，但皮肤病变很典型，其中60%~70%送检病鸡表现为皮肤棘状层内出现嗜酸性包涵体，皮下有炎症细胞浸润，充血、出血等变化。详见图 1、2、3、4。

2.2 血清学鉴别诊断结果 通过酶联免疫吸附试验，观察到在鸡瘟和禽流感病毒稀释液中加入酶标抗体并无颜色反应，得出试验结果为阴性，所以可以排除病鸡患鸡瘟和禽流感的可能。

图1 感染鸡皮肤棘状层细胞质内的包涵体（10×20 HE染色）

图2 感染鸡皮肤棘状层细胞质内的包涵体（10×40 HE染色）

图3 病鸡皮肤破溃处大面积充血、出血（10×20 HE染色）

图4 病鸡皮下严重淤血及组织增生（10×20 HE染色）

3 分析与讨论

3.1 初诊结论 以上所示的病理学图片都是鸡痘的特征性病变。病鸡眼睑、喙角、翼下等多处出现暗褐色结痂，可能是由于最初细小的痘疹随着体积增大，形成如豌豆大的灰色或灰黄色结节，而痘疹表面凹凸不平，结节坚硬而干燥，有时结节的数目很多，就互相联接而融合，从而产生大的痂块，与鸡痘的临床表现吻合。通过作鸡瘟和禽流感的血清学鉴别诊断，结果显示阴性，也排除了感染鸡瘟和禽流感的可能性。因此，该病例确诊为鸡痘。

3.2 鸡痘的诱发因素 皮肤型鸡痘一般流行于秋季和冬初。该发病鸡场实行温室养鸡，在冬末也出现了较大的流行，主要由于冬季潮湿多雨，育雏期内的发病率明显增高，因而雏鸡、产蛋鸡感染严重，死亡率高达30%。鸡痘病毒对外界的抵抗力较强，在干燥的痂皮中可存活数年，主要通过皮肤或黏膜的伤口感染，也可通过昆虫叮咬传播感染，病鸡脱落的碎散痘痂也可传播此病，因此可感染大批幼鸡并引起较高的死亡率。病鸡皮肤出现皮下大面积充血、出血，炎症细胞浸润，皮肤大面积损伤、坏死，体表溃烂，从而继发感染其他疾病，这也是引起高死亡率的原因之一。

3.3 鸡痘的防治

3.3.1 治疗 对鸡痘的治疗，通常采取对症疗法，以减轻病禽的症状和防止继发细菌性疾病。皮肤上的痘痂可用消毒剂如1%高锰酸钾溶液冲洗后，用镊子小心剥离痘痂，然后在皮肤伤口处涂上碘酊、龙胆紫或石炭酸凡士林。口腔、咽喉黏膜上的病灶，可用镊子将假膜轻轻剥离，用高锰酸钾溶液冲洗，再用碘甘油涂擦口腔。对于症状严重的病禽，为防止并发感染，可在饲料或饮水中添加抗生素。有报道显示，可用中药防治鸡痘，配方如下：蒲公英30g，金银花20 g，连翘15 g，薄荷少许为引，煎汤400mL，口服或洗涤（20mL/只），每天2次，连用3d。

3.3.2 预防 对本病的预防应着重做好平时的卫生防疫工作，搞好禽场及周围环境的清洁卫生，定期消毒，减少或尽量避免蚊虫叮咬幼禽。不同年龄、不同品种的家禽应分群饲养，栏舍的布局应合理，并通风良好，饲养密度不宜过大，饲喂全价饲料，避免各种原因引起啄癖或机械性外伤。防治本病最有效的方法是接种禽痘疫苗。疫苗的接种方法可采用翼膜刺种法和毛囊涂搽法两种。翼膜刺种法是用消毒的钢笔尖或注射针头蘸取疫苗，刺种在翅膀内侧无血管处皮下；毛囊涂搽法是在雏鸡的腿部外侧拔去几根羽毛，用消毒的毛笔或小毛刷蘸取经1∶10稀释的疫苗涂搽在毛囊内。

参与文献：

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