高效液相色谱法测定果酱中VC含量

王坤，王学楠，刘朝麾，张金鹏

（天津市质量监督检验站第四站，天津 300462）

抗坏血酸（ascorbic acid），又称 VC，是维持机体正常生理代谢的一种重要的有机化合物，具有良好的营养价值，人体严重缺乏时会引起坏血病[1]。但是由于人体自身不能合成VC而必须从食物中摄取，近年来，其作为一种保健功能因子，已经被广泛添加于各种食品中，因此食品中VC含量的测定方法引起了广泛的研究[2]。常用的测定方法有2，6－二氯靛酚滴定法、荧光光度法、2，4－二硝基苯阱比色法等[3]。由于VC具有还原性，容易受空气、光、热、氧化剂等因素的影响[4]，上述方法在灵敏度和准确性方面都偏低。目前，对果酱中VC含量测定方法的研究比较少，为此，本文采用高效液相色谱法对果酱中VC含量进行检测，简化了样品前处理步骤，操作简便、快速，具有良好的灵敏度和准确性。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

Agilent 1200 LC高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器及色谱工作站：美国Agilent公司；XP 504电子分析天平：精确至0.0001 g，瑞士METTLER公司；GLD-136真空泵：ULVAC KIKO Inc；SB-5200型超声波清洗器：上海必能信超声有限公司；MILLI-QA超纯水器：密里博公司；QL-901旋涡混合仪：海门市其林贝尔仪器制造有限公司。

1.1.2 试剂

甲醇（色谱纯）：天津市康科德科技有限公司；冰乙酸（分析纯）：天津市天新精细化工开发中心；抗坏血酸（纯度99.0%）：购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 色谱条件

Kromasil 100A C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm，天津市特纳迪奥色谱技术有限公司）；流动相为0.1%乙酸水溶液∶甲醇=95∶5（体积比）；柱温：25 ℃；检测波长：246 nm；流速：0.8 mL/min；进样量：20μL。

1.3 标准溶液的配制

1.3.1 标准储备液

准确称取10 mg（精确到0.1 mg）VC标准品于10 mL棕色容量瓶中，用水完全溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，当天配制，需4℃冰箱保存。

1.3.2 标准工作溶液

准确吸取VC标准储备液2.5 mL于25 mL棕色容量瓶中，用水稀释定容至刻度，得到浓度为100 mg/L的标准中间液。分别吸取 0.20、0.50、1.00、2.50、5.00 mL的VC标准中间液于50 mL的棕色容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，配制成浓度为 0.4、1.0、2.0、5.0、10 mg/L系列标准工作溶液。

1.4 样品处理

称取约0.5 g试样于50 mL容量瓶中，用水溶解稀释，超声振荡5 min，用水定容至刻度。再吸取1 mL混合溶液于5 mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，供HPLC进行检测。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

考虑到VC的特性，在中性和弱酸性条件下较稳定，本试验考察了甲醇-水、甲醇-0.1%乙酸水溶液作为流动性体系，发现VC在酸性流动相的条件下的保留效果和峰形较好，于是又对甲醇与0.1%乙酸水溶液的比例 5∶95，8∶92，10∶90 分别进行比较。试验发现，随着甲醇含量的增加，VC目标峰的峰形更加尖锐对称，但保留时间逐渐缩短，这不利于复杂基体与待测组分的有效分离，因此综合考虑，选择甲醇与0.1%乙酸水=5∶95为最终流动性体系，此时各基质组分能达到基本分离，保留时间为4.1 min。

2.2 样品提取溶液的选择

考虑到VC的水溶性和不稳定性，试验选择水、0.1%乙酸水和0.1%甲酸水溶液做样品提取溶液，分别对添加浓度为0.8 mg/kg的果酱样品进行提取，3份平行，比较两三种提取液的提取效果。试验表明，当用0.1%乙酸水和0.1%甲酸水溶液做提取液时，样品的添加回收率在112%～117%和110%～119%之间，存在明显的基质干扰作用。当用水做样品提取溶液时，样品的添加回收率在105%～110%，基质干扰作用明显降低，因此本试验最终选择水溶液作为果酱样品的提取溶液。

2.3 样品溶液稀释倍数的选择

本试验考察了不同稀释体积对样品回收率的影响。试验称取0.5 g添加浓度为0.8 mg/kg的果酱样品，3份平行，用水溶液稀释定容至50 mL，直接进样，得到样品的回收率为130%～139%。为降低基质干扰效应对回收率的影响，实验再分别吸取1、2、2.5 mL样品稀释液于5 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后直接进样。经仪器检测，得到样品的添加回收率在102%～105%、104%～114%和108%～115%之间，并且稀释5倍的样品溶液在仪器检测中得到的色谱图比稀释2.5倍和2倍的基线稳定，同时待测组分与基质得到了良好的分离。因此，为保证结果准确，试验选择将定容后的样品溶液稀释5倍后再进行色谱分析。

2.4 方法性能指标

2.4.1 线性范围和方法的检出限

在选定的色谱条件下，按照1.3.2中配制的标准工作溶液进行检测，以峰面积对浓度进行线性回归，所得线性方程为y=53.50753x-17.1079，相关系数r2=0.9984。结果表明，VC在0.4 mg/L～10 mg/L浓度范围内线性关系良好。以3倍基线噪音所对应的浓度计算，本方法的检出限为30μg/L，具有很高的检测灵敏度。

标准溶液和样品中VC的色谱图分别见图1和图2。

2.4.2 方法的精密度和准确度

在果酱样品种分别添加200.0、400.0、800.0 mg/kg三个浓度水平的VC标准溶液，进行添加回收实验，按照1.4中的操作步骤平行测定，每个浓度重复5次，结果见表1，本法对果酱样品中VC的平均加标回收率为97.4%～107.5%，相对标准偏差（RSD）不大于2.54%，满足食品检测的要求。

图2 果酱样品色谱图Fig.2 Chromatogram of Jam sample

表1 精密度及平均回收率测定结果（n=5）Table 1 Results of precision and average recovery（n=5）

3 结论

该方法以水溶液作为提取溶液，超声提取果酱样品中的VC，操作简单快速，可避免样品中VC被氧化和基质成分的干扰，采用高效液相色谱法进行测定，结果稳定准确，且灵敏度高，适合用于果酱样品中VC的测定。

[1]王艳颖,姜国斌,胡文忠,等.高效液相色谱法测定草莓中VC含量[J].大连大学学报,2006,27(2):21-26

[2]庞燕军,陈靖,曹春英,等.高效液相色谱法测定食品和饮料中VC含量[J].现代中西医结合杂志,2009,18(5):555-556

[3]雍莉,黎源倩,李敏,等.高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中VitC[J].现代预防医学,2005,32(3):247-248

[4]丁健桦,饶火瑜,王兴祥.HPLC法初步研究VC的稳定性[J].食品工业,2004(1):44-45