炎调方对脓毒症大鼠血清炎症因子的调控作用

施 荣 熊旭东 李淑芳 王 倩

（上海中医药大学附属曙光医院，上海 200021）

脓毒症是具有感染依据的全身炎症反应综合征 （SIRS），是烧创伤、休克、感染等临床危急重症患者的严重并发症之一，也是诱发脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（MODS）的重要原因。炎症因子的超量释放是脓毒症的主要病理生理特征，有效调控炎症介质的释放对治疗脓毒症具有重要意义。笔者通过临床观察，认为脓毒症为腑实营热证，通腑清营法切中脓毒症之根本病机。本研究旨在探讨炎调方治疗脓毒症的可能机制。

1 材料与方法

1.1 药物 炎调方由桃仁、生大黄、芒硝、玄参、赤芍、当归等组成，均符合2005版《中国药典》规定并加工炮制合格的饮片，由上海中医药大学附属曙光医院中药房提供。煎煮方法：加10倍体积蒸馏水将饮片浸泡30 min，先煮桃仁、玄参、赤芍、当归，沸腾后继续煎煮20 min，起锅前10 min加入大黄，第二煎加6倍体积的蒸馏水煎煮，沸腾后继续煎煮20 min。2次煎液混合，用4层无菌纱布过滤，芒硝最后纳入药液中充分溶解，药液最后浓缩成含生药1.0 g/mL，置40℃冰箱保存备用。

1.2 实验动物 雄性SD大鼠60只，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，随机分为正常组、假手术组、模型组和炎调方组。

1.3 分组及造模 盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型［1］：大鼠经2%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉后，以腹正中作一1.5 cm长的切口，找到盲肠，在其根部结扎，用18号针穿通3次，轻挤出少量肠内容物，留置2 mm皮瓣防止针孔闭合，还纳盲肠于腹腔，逐层缝合腹壁切口，术毕皮下注射生理盐水（30 mL/kg）抗休克。大鼠随机分为4组：正常组（6只），麻醉后腹主动脉采血致死；假手术组（6只），麻醉后开腹翻动肠道，关腹，12 h后麻醉并腹主动脉采血致死；模型组（24 只），分别于CLP 后 2、8、12、24 h麻醉并腹主动脉采血致死，每个时间点6只；炎调方组（24只）：造模前炎调方灌胃（9.9 g/kg）3 d，每日 1次，第 3次灌胃后 2 h行CLP术造模，分别于CLP后2、8、12、24 h麻醉并腹主动脉采血致死，每个时间点6只。

1.4 标本采集与检测 （1）血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-10检测。经腹主动脉取血，静置30 min后，离心取血清，-70℃保存待测。严格按试剂盒要求操作，双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清 TNF-α、IL-6、IL-10质量浓度，ELISA试剂盒为R&D公司原装产品，由上海森雄科技实业有限公司提供。（2）肺组织染色。无菌留取正常组、假手术组及模型组和炎调方组各时间点大鼠完整左肺组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察比较肺组织损伤情况。

1.5 统计学处理 应用SPSS10.0统计软件。计量资料以（）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组血清细胞因子测定结果 见表1。模型组各时间点TNF-α、IL-6、IL-10 水平均高于假手术组（P＜0.05 或 0.01）；模型组及炎调方组TNF-α在2 h开始升高，8 h到高峰，炎调方组与模型组相比，明显下降（P＜0.05或0.01）；模型组及炎调方组IL-6随时间延长逐渐升高，12 h到达高峰，炎调方组与模型组相比，除24 h外，其他时间点均显著下降（P＜0.01）；IL-10随时间延长逐渐下降，炎调方组与模型组相比，明显升高（P＜0.05或0.01）。

表1 各组大鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-10 水平比较（pg/mL，，n=6）

表1 各组大鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-10 水平比较（pg/mL，，n=6）

与假手术组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组同时间点比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组 别 TNF-α IL-6 IL-10正常组 16.31±1.47 22.36±1.04 30.00±2.80假手术组 17.68±3.27 23.36±3.69 35.67±2.26模型组 2h 47.92±3.15** 52.04±4.06** 78.42±2.26**8h 67.59±4.65** 71.15±4.10** 78.86±9.73**12h 48.69±3.58** 85.89±4.38** 63.59±4.83**24h 26.43±3.50* 65.46±6.24** 54.12±2.15*炎调方组 2h 29.69±4.35△ 33.10±3.69△△ 118.12±8.73△△8h 35.36±3.31△△ 53.98±5.65△△ 90.30±3.35△12h 34.73±3.37△ 71.88±3.79△△ 81.11±3.13△△24h 18.10±2.48△ 54.50±7.40 69.22±8.29△△

2.2 各组肺组织病理切片结果 正常组及假手术组大鼠肺组织形态结构正常，未见明显病理学损伤性变化。CLP术后2 h，模型组2只大鼠肺组织出现局灶性肺泡壁充血，轻度肺间质水肿，其余4只及炎调方组均未见明显组织病理学损伤性变化；CLP术后8 h，模型组肺组织病变较2 h加重，6只大鼠均可见肺泡壁充血、增厚及肺间质水肿范围扩大，并出现毛细血管瘀血，少量炎性细胞浸润，轻度肺实变，与模型组相比，炎调方组6只大鼠肺组织仅见局灶性轻度肺泡壁充血，未见明显肺间质水肿、炎性细胞浸润和毛细血管瘀血，无肺实变；CLP术后12 h，与8 h相比，模型组大鼠肺组织病损范围进一步扩大，出现广泛肺泡出血，肺泡腔内可见较多的炎性细胞浸润，肺组织明显实变，炎调方组仅见少量肺泡出血和炎性细胞浸润，轻度肺实变；CLP术后24 h，模型组大鼠肺组织病变与12 h相比病变更严重，病变范围更广，出现广泛的大量肺泡出血，肺泡腔内可见大量的炎性细胞浸润，毛细血管瘀血与微血栓形成明显，肺组织实变较12 h严重，炎调方组与模型组相比，病变范围较小，可见肺泡壁充血，大量肺泡出血和炎性细胞浸润，肺实变较轻。

图1 各组不同时间点肺组织病理切片图（HE，×40）

3 讨 论

感染导致的SIRS常发展为脓毒性休克，但决定炎症发展结局的不止感染本身，宿主对感染的反应也起到了至关重要的作用［2］。内毒素、外毒素、病毒及寄生虫感染等在机体的脓毒性反应中均可起触发剂的作用。TNF-α是最主要的炎性细胞因子，也是炎症反应的最初启动者；IL-6被认为与SIRS的严重程度和致死率有着密切的关系，是SIRS的一个标志而非单纯的一种介质［3］。动物实验证明，脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6水平异常升高［4-5］。L-10对免疫应答主要起抑制作用，能抑制巨噬细胞抗原呈递，抑制巨噬细胞活化及继发的细胞免疫反应。

脓毒症早期多表现为身灼热，烦渴，腹胀便秘，甚或斑疹隐隐、神昏谵语，舌绛少津，苔黄，脉数等症热毒内盛证［6］。究其病因病机乃外感六淫，邪毒化火，或内有郁热，蓄而成毒，邪毒内陷于腑，并容于营血而致本病。上述诸证，症状虽异，然则病机相同，皆由热毒积聚，毒陷入腑，容于营血所致。基于以上理论，通腑清营法切中脓毒症之根本病机，并自拟炎调方长期应用于临床治疗脓毒症，取得良好效果［7］。本实验以CLP制备脓毒症模型，炎调方灌胃治疗脓毒症，结果显示，炎调方组与模型组相比，TNF-α水平均明显下降；除24 h外IL-6均显著下降；IL-10明显升高。肺组织病理切片显示，随着时间延长，模型组肺组织病损程度逐渐加重，由局灶性肺泡壁充血，肺间质水肿逐步发展为广泛的大量肺泡出血，肺泡腔内大量的炎性细胞浸润，毛细血管瘀血与微血栓等病理改变，而炎调方组各时间点肺组织病理变化均较模型组轻，表明炎调方能缓解肺损伤，保护肺组织。

炎调方由生大黄、芒硝、桃仁、赤芍、玄参、当归等组成，方中大黄、芒硝、桃仁具有釜底抽薪、通腑存阴之功，共为君药；赤芍、玄参清营泻火、凉血滋阴，为臣药；当归活血通便为佐药。方中大黄、桃仁、赤芍并有活血之用，大黄并能抑制THF-α的产生，清除氧自由基［8］，当归能抑制高迁移率族蛋白B-1的聚集，防止致命性内毒素血症的产生［9］。全方配伍共奏通腑清营之功，并通腑不忘活血，配伍精妙，也很好反证了脓毒症早期为腑实营热证，通腑清营是治疗该病早期的根本大法。

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