鸡毒支原体感染病理模型复制

孟冬霞，贺东昌，武果桃，任 杰，吴 忻，赵 娟，孙建刚，张伟业，刘文俊

(山西省农科院畜牧兽医研究所，太原 030032)

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum，MG)感染常称之为鸡慢性呼吸道病(CRD)，是家禽致病性最强、经济损失最大的支原体病［1］。发病鸡主要表现为气管炎和气囊炎，以咳嗽、气喘、流鼻液和呼吸道啰音为特征［2］。多与大肠杆菌、传染性鼻炎、新城疫和传染性支气管炎等引起呼吸道症状的疫病混合感染，对养鸡业危害极大，是影响鸡群增重和生长发育的严重疫病之一［3］。为进行纯绿色抗CRD的超微粉中药复方参麻散(简称FSMS)和复方明草散(简称FMCS)的药效学研究，本试验用MG标准菌株S6株接种16日龄雏鸡进行攻毒，攻毒后第5天用鸡新城疫疫苗诱发，成功建立了鸡毒支原体感染病理模型，为超微粉中药的药效学研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 标准菌株 鸡毒支原体标准菌株S6株，购自中国兽医微生物菌种保藏中心。

1.2 主要试剂 支原体肉汤培养基、葡萄糖、L－半胱氨酸盐酸盐、小牛血清及琼脂粉，北京奥博星生物技术有限责任公司生产。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)，Genview公司产品。醋酸铊，Sigma公司产品。青霉素，石家庄制药厂产品。氢氧化钠、酚红为国产分析纯试剂。

1.3 试验动物 试验鸡，山西达益园农牧发展有限公司提供。

1.4 疫苗 鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)，哈药集团生物疫苗有限公司生产，批号：2009105。

1.5 培养基的配制 改良Frey氏培养基参照文献［1］配制，用20%NaOH调整pH至7.6并过滤除菌，保存备用。

1.6 MG攻毒菌液 将5代 MG培养物(1011CCU/mL)，分别稀释为 104、105、106、107、108、109CCU/mL作为本试验用菌液。

1.7 动物分组及处理方法 将16日龄雏鸡随机分为6个攻毒组，每组5只鸡，分别接种不同浓度MG 菌液，每只鸡滴鼻0.3 mL、点眼0.2 mL，气囊接种0.5 mL;接种后第5天用鸡新城疫I系苗诱发(5羽份/只，含有鸡新城疫病毒105.0ELD50/羽份，喷雾)。同时设2组对照组，每组5只鸡，一组接种灭菌生理盐水，一组接种浓度为109CCU/mL的MG菌液。观察试验鸡临床症状，攻毒后第10天剖检试验鸡，观察气囊病理变化及气囊损伤并计分。

气囊损伤计分参照 Yoder［4］计分标准分为五级：0级—气囊正常，清洁透明而薄，计0分;1级—气囊稍有增厚和轻度浑浊，局部有少数灰色或黄色渗出物斑点，计2分;2级—部分气囊区域有可见的灰色和黄色渗出物，同时伴有气囊中度增厚，计4分;3级—大片气囊布满黄色干酪样渗出物，计6分;4级—整个气囊布满黄色干酪样渗出物，气囊失去弹性，计8分。鸡平均气囊病理损伤度计分 =所有鸡气囊损伤度总和/被检鸡数。

2 结果

2.1 临床症状 不同方法处理后，试验鸡的临床症状见表1。由表1可见，单纯接种MG 109CCU/mL菌液时，仅2只鸡有轻微的咳嗽。鸡新城疫I系诱发时：MG菌液浓度达105CCU/mL以下，鸡饮食基本正常;达105CCU/mL以上时，鸡饮食减少，表现出不同程度的临床症状;达109CCU/mL时，5只鸡均有浆液或黏液性鼻液、频频摇头、喷嚏、喘气和咳嗽等症状。

表1 试验鸡的临床症状

2.2 剖检结果 试验结束时剖检试验鸡，气囊病理变化及病理损伤计分结果见表2。由表2可见，单纯接种MG 109CCU/mL菌液时，仅有2只鸡气囊有黄色渗出物，气囊病理损伤计分为4分。鸡新城疫疫苗诱发时，接种不同MG菌液浓度对气囊均有损伤作用，损伤程度大小不一。MG接种量达104CCU/mL即可对气囊产生病变作用，气囊病理损伤计分为2分，气囊损伤度最小;MG接种量达106CCU/mL以上时，气囊病变严重;MG接种量达108CCU/mL以上时，气囊内出现大量黄色炎性渗出物;MG接种量达109CCU/mL时，所有鸡大片气囊都布满黄色干酪样渗出物，气囊病理损伤计分为6分，气囊损伤度最大。故确定MG攻毒剂量为109CCU/mL。

表2 试验鸡气囊病理变化及病理损伤计分

3 讨论

3.1 MG人工感染致病性与鸡日龄、饲养条件、感染途径等多种因素有关，本试验选用的MG S6株有一定毒力，为逃避机体外部防御屏障直接经气囊攻毒;由试验可见，单纯MG攻毒可引起轻度气囊病变，很难复制典型的CRD临床症状和病理变化，鸡新城疫I系作应激因子诱导可提高MG的致病性。

3.2 邵国青等［5］人在透明塑料隔离器内以NDV、IBV弱毒诱导和70/1000000(质量分数)氨环境刺激作诱导，对SPF鸡进行鸡毒支原体攻毒，成功建立了鸡毒支原体人工发病封闭模型，但由于受严格的条件限制，在野外或大群鸡作MG攻毒试验时不适用。本试验在MG S6(109CCU/mL)攻毒后第5天用鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)进行喷雾诱发，5羽份/只，成功建立了鸡慢性呼吸道病野外环境人工发病的动物模型，试验鸡临床表现浆液或黏液性鼻液、频频摇头、喷嚏、喘气和咳嗽、呼吸道啰音等特征，气囊一侧或两侧布满黄色干酪样渗出物，为复方参麻散和复方明草散药效学研究的顺利进行奠定了基础。

3.3 本试验所用MG菌液浓度为104～109CCU/mL，至于1010CCU/mL及更高滴度MG培养物，在不接种新城疫的情况下能否激发复制成功此模型，尚不能确定。

［1］ Saif Y M.禽病学(第十一版)［M］.北京：中国农业出版社，2005：818 －867.

［2］ 陈焕春，陈杖榴，陆承平，等.2010年执业兽医资格考试应试指南［M］.北京：中国农业出版社，2010：675－677.

［3］ 石 乔，李继昌.中药治疗鸡毒霉形体病的研究进展［J］.中国畜牧兽医，2006，33(4)：45 －46.

［4］ Yoder H W.A laboratory mannual of the isolation and identification of avian pathogens［M］.3rd ed.New York：American Association of Avian Pathologist，1989：57 －62.

［5］ 邵国青，许伟成，薛家宾，等.鸡毒支原体人工发病封闭模型的建立［J］.江苏农业学报，1998，14：228 －231.