紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量△

索朗其美 达瓦潘多 刘 青 央 美 顿珠次仁 仁 增

(西藏藏医学院，西藏 拉萨 850000)

喜马拉雅紫茉莉(巴朱)为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉 Mirabilishimalaica(Edegw.)Heim.的干燥根［1］，该藏药具有温肾、益肾滋补、生肌、利尿、排石等功效，用于胃寒、肾寒、下身寒、阳萎浮肿等［1－3］。喜马拉雅紫茉莉作为藏药使用历史悠久，在藏医药名著《四部医典》和《晶珠本草》均有记载［2，4］。目前国内外对紫茉莉根的研究主要集中在紫茉莉蛋白(MAP)上，对其它化学成分研究较少。除报道紫茉莉根含有多种甜菜素、氨基酸、有机酸、三萜、甾体、脂肪酸、葫芦巴碱(Trigonelline)和半乳糖等之外，Yang，Shu－Wei等从其植物细胞培养中分离得到多个黄酮和鱼藤酮类成分，并发现它们对真菌有一定的抑制作用［5、6］，目前已发现的紫茉莉化学成分中以黄酮类为主，还有一些其他成分［7］。本研究采用紫外分光光度法对西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮的含量中总黄酮含量进行了测定，旨在为西藏人工种植喜马拉雅紫茉莉的质量控制提供科学依据。

1 材料

梅特勒AE20O电子天平;ASI0200BDT超声波清洗器(250w，天津奥特赛恩斯仪器有限公司);UV－2100紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科技仪器有限公司)。甲醇(色谱纯)、亚硝酸钠(分析纯)、硝酸铝(分析纯)、氢氧化钠(分析纯);优普超纯水机(蒸馏水自制)。芦丁(中国药品生物制品检定所，批号:110811－200502)。喜马拉雅紫茉莉野生和人工种植品由西藏藏医学院研究所提供。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备:精确称取在105℃条件下干燥至恒定质量的芦丁标准品14.48mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇摇匀，稀释至刻度，得浓度为0.2896mg/ml的芦丁对照品溶液，低温保存，备用。

2.2 供试品溶液的制备精确称取喜马拉雅紫茉莉粉末约1.0000g，置于250mL容量瓶中，加入 200mL甲醇，20℃超声处理(功率250W，频率55kHz)超声提取30min共3次。静置后定容。吸上清液2mL，用甲醇定容到10mL容量瓶中，即得样品溶液。

2.3 测定波长的选择:精确量取对照品溶液和供试品溶液各0.5mL，分别置于10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置 6min，加入 10%硝酸铝溶液 0.5mL，摇匀，放置6min，加入10%氢氧化钠溶液3.0mL，再加入水至刻度，摇匀，放置15min，在波长为200～600nm范围内扫描，结果2种溶液均在328nm、352nm处有最大吸收，其他成分对测定无干扰。

2.4 标准曲线的绘制［8］:分别精确吸取芦丁对照品溶液0、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0(mL)置于 10mL 容量瓶中，向容量瓶中依次加入3.0mL蒸馏水，依次加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置 6min，加入 10%硝酸铝溶液 0.5mL，摇匀，放置6min，加入10%氢氧化钠溶液3.0mL，加入蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，进样，于波长为352nm处测定吸收值(用不含芦丁的空白管对照调零)。得回归方程:Y=21.262952x+0.006124(r=0.9991)，结果表明，测定芦了浓度在16～80范围内呈良好的线性关系。

［Abs］=KO+KI*［C］+K2*［C］2

K0=0.006124 K1=21.262952 K2=0.000000 R=0.999132

Y=21.262952x+0.006124(r=0.9991)

2.5 精确度实验:取对照品溶液于352nm波长处测定吸收值5次.结果示平均吸收值为0.3658，RSD为0.91%(n=5)。

2.6 稳定性试验:取供试品溶液，于 0、1、2、4、8、24(h)时测定吸收值。结果表明，总黄酮与铝离子形成的红色络合物在24h内稳定，RSD为2.056%(n=6)。

2.7 重现性试验:精密吸取5份样品溶液1mL于10mL容量瓶内，按以上方法制备并进行含量测定，重复3次，考察其重现性，测定结果表明RSD为1.35%。

2.8 加样回收率实验:分别精密吸取已知浓度的样品溶液各3组(2mL/组)，各组分别精密加入已知含量芦丁标准品溶液 0.5mL(组 1)、1.0mL(组 2)、2.0mL(组 3)，按照“芦丁标准曲线的制备”方法显色后，以不含样品的溶液作为空白对照，进行含量测定，重复3次，并计算回收率，结果:加样回收率为100.92%，RSD为2.10%

2.9 样品的测定:精确称取研碎的样品野生原药材(1.0092g)、人工种植原药材(1.0072g)，各置于250mL容量瓶中，按照2.2项下方法制备样品供试液，同法平行制备3份。精确吸取供试品溶液2mL，按照2.4项下方法进行操作，在波长为352nm处测定供试液的吸收值，按回归方程进行计算处理，总黄酮占生药百分比野生7.53%、人工种植 9.53%。

表4 样品测定结果(n=6)

3 讨论

黄酮类化合物广泛分布于植物界，而且生理活性多种多样，目前研究主要生理活性表现在:(1)对心血管系统的作用;(2)抗肝脏毒作用;(3)抗炎作用;(4)雌性激素样作用;(5)抗菌及抗病毒作用;(6)泻下作用;(7)解痉作用。对于西藏喜马拉雅紫苿莉野生和人工种植药材的研究中，对其所含黄酮类成分的药理作用目前研究甚少，以芦丁为对照品，以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，利用紫外分光光度计对西藏喜马拉雅紫茉莉野生和人工种植药材中总黄酮的含量进行测定的方法具有简便易行及结果稳定可靠，为下一步野生品和人工种植药材的研究，提供基础理论。本实验方法线性关系良好，相关系数R=0.9991，精密度，重现性、回收率均符合要求，稳定性好，以此法拟制订的质量标准能有效的控制其质量。

［1］卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.藏药［S］.第一册.1995:104

［2］中国科学院西北高原生物研究所.藏药志［M］.西宁:青海人民出版社，1991:461

［3］青海省药品检验所，青海省藏医药研究所.中国藏药［M］.第一卷.上海:上海科学技术出版社，1996:303

［4］宇妥.元丹贡布等著，马世林等译.四部医典［S］.1987:165

［5］王琳，杨德成，等.紫苿莉属植物的化学成分和药理活性的研究进展［J］.中国民族民间医药，31－33

［6］邝嘉乐，张德志.紫茉莉根化学成分研究［J］.广东药学院学报，2007，23(1):1 －2

［7］邝嘉乐.紫茉莉根治疗糖尿病化学成分研究［D］.2007年:3

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京:化学工业出版社出版，2005.