瘤果黑种草子颗粒对肾阳虚模型小鼠影响的实验研究△

魏鸿雁徐晓琴李晓瑾肖 琼孙 宇

（1.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆生产建设兵团农六师医院，新疆 五家渠 831300；3.新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046）

瘤果黑种草子(Nigella glandulifera Freyn.)为毛莨科植物黑种草属瘤果黑种草的干燥种子，是我国新疆维吾尔族习用药材，性味甘、辛、温[1]。具有利尿，补脑，补肾，活血，解毒，下乳，通经，止咳，乌发，抗衰老等作用。常用于胸闷气促，乳房肿痛，耳鸣，乳汁减少，热淋，石淋，闭经等症[2]。本课题组加工制成的瘤果黑种草子颗粒在预实验中发现具有温补肾阳、抗衰老的作用，因此，本文就其对肾阳虚症的影响进行研究，为进一步研发瘤果黑种草子颗粒奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物：昆明品系小鼠 200只，体重（18±2）g，由新疆医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：医动字16－003号。

1.2 实验试药与仪器：瘤果黑种草子（新疆药业集团西天山药材有限公司种植基地提供）；瘤果黑种草子颗粒自制（在4℃冰箱内保存备用）；氢化可的松注射液（25mg/ml）（批号：国药准字

H14020980，山西晋新双鹤药业有限责任公司生产）；Metter AE163电子天平 (瑞士梅特勒－托利多公司)；YB－Z真空恒温干燥箱（天津药典标准仪器厂）；N－1000旋转蒸发仪（日本Eyela公司）；BS200S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；GS－671电子秤（大连星海生物有限公司）；YLS－1A型多功能小鼠自主活动记录仪（山东省医学科学院设备供应站）。

1.3 实验方法[3－4]

1.3.1 模型的建立：选取健康昆明种小鼠60只,雌性，动物房饲养3天后随机分为5组，第一组作为空白对照组，第二组为模型组，其余三组为给药组，除空白组外，模型组与给药组腹腔注射氢化可的松注射液（25 mg/kg·d－1）进行造模。

1.3.2 给药方法与剂量：空白对照组与模型组给予蒸馏水灌胃

0.2 mL/10 g，其余各组分别按表1剂量给予灌胃,连续给药10d。

末次给药1 h后,称重测定小鼠自主活动次数、小鼠游泳存活时间及小鼠脏器指数[5－6]。

1.3.3 观测指标：①对小鼠自主活动次数的影响：末次给药1h后，称体重后，将小鼠放入自主活动仪内,前3min为适应期,后5min由计数仪统计小鼠自主活动次数。室内需安静，室温保持18℃～22℃、湿度 20% ～40%[7－11]。②对小鼠游泳存活时间的影响测小鼠自主活动次数后，将小鼠放入水温为20℃±1℃，水深20cm的50cm×30cm×25cm的玻璃缸内，每次1只，小鼠尾根部负荷7%体重的重物，置水游泳，观察小鼠游泳至力竭（在水下10s不能上浮），该时间为小鼠的游泳时间[12－16]。③对小鼠脏器指数的影响记录完小鼠的游泳存活时间后，即刻将小鼠取出解剖，取其肾、睾丸、附睾、前列腺+精囊，用分析天平称重并计算脏器指数[17－21]。

表1 实验小鼠分组及给药剂量

2 实验结果

2.1 对小鼠自主活动次数的影响:模型组小鼠自发活动次数明显低于空白对照组（P＜0.01），瘤果黑种草子颗粒组、原药材组及去油瘤果黑种草子组的自发活动次数明显高于模型组（P＜0.01），有显著性差异。瘤果黑种草子颗粒组与原药材组、去油瘤果黑种草子组在自主活动次数方面相近，无统计学差异。实验结果见表2。

2.2 对小鼠游泳存活时间的影响：模型组的小鼠游泳存活时间明显短于空白对照组(P＜0.01)，模型组的小鼠游泳存活时间明显短于瘤果黑种草子颗粒组、原药材组及去油瘤果黑种草子组(P＜0.01)。瘤果黑种草子颗粒组与原药材组、去油瘤果黑种草子组在小鼠游泳存活时间方面无统计学差异。实验结果见表3。

表2 小鼠自主活动次数（±s）

表2 小鼠自主活动次数（±s）

注: 与对照组比较,*P＜0.01,**P＜0.05，与模型组比较▲P＜0.01,▲▲P＜0.05。

组别 n 自主活动次数对照组模型组瘤果黑种草子制剂组瘤果黑种草子原药材组去油瘤果黑种草子组12 12 12 12 12 402.33±40.33▲335.25±58.53*412.08±70.32▲440.50±38.25▲439.75±82.64▲

表3 游泳存活时间的影响（±s）

表3 游泳存活时间的影响（±s）

注: 与对照组比较,*P＜0.01,**P＜0.05，与模型组比较▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

组别 n 存活时间(min)对照组模型组瘤果黑种草子制剂组瘤果黑种草子原药材组去油瘤果黑种草子组12 12 12 12 12 285±105▲146±33*201±28▲207±32▲201±26.97▲

2.3 对小鼠脏器指数的影响：肾阳虚模型组的肾、前列腺+精囊、附睾、睾丸的重量较空白对照组显著减轻，瘤果黑种草子颗粒组能提高肾阳虚症小鼠的附睾与睾丸指数，但无统计学意义，两组间肾指数相近；瘤果黑种草子原药材、去油瘤果黑种草子组均能提高肾阳虚小鼠附睾、睾丸指数（P＜0.01），具有统计学差异。实验结果见表4。

表4 对肾阳虚症小鼠脏器指数的影响（±s）

表4 对肾阳虚症小鼠脏器指数的影响（±s）

注: 与对照组比较 *P＜0.01,**P＜0.05，与模型组比较▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

组别 n 肾 前列腺+精囊 附睾 睾丸(g)对照组模型组瘤果黑种草子制剂组瘤果黑种草子原药材组去油瘤果黑种草子组12 12 12 1.86±0.15 1.67±0.20**1.66±0.23 0.64±0.12 0.45±0.17*0.40±0.12*0.18±0.09 0.10±0.02*0.11±0.03*0.61±0.09 0.51±0.09**0.58±0.15 121.66±0.210.39±0.10*121.99±0.29▲0.50±0.16**0.18±0.05▲0.23±0.05▲0.67±0.07▲0.70±0.10▲

4 讨 论

4.1 肾阳虚模型的建立：现代研究认为，下丘脑－垂体－靶腺轴功能障碍和功能低下是肾阳虚症的病理基础。靶腺轴主要包括肾上腺轴、甲状腺轴、性腺轴。这3个轴中的一个或几个出现功能低下都可能引起肾阳虚症。肾阳虚症动物模型中，氢化可的松模型是比较经典的模型，应用最多[22]。氢化可的松所致的小鼠肾阳虚模型在病理方面与肾阳虚证实质研究成果在很大程度上取得一致,小鼠症状表现也较好地符合肾阳虚证的辨证诊断。造模后,小鼠出现一系列“耗竭”现象：神淡、精神不振、反应迟钝、被毛疏松、失去光泽及脱毛、消瘦、肢尾冷、肛温降低、畏寒肢冷、拱背蜷曲等外形衰弱及寒象。

4.2 不同给药组对肾阳虚症小鼠的影响：不同给药组（瘤果黑种草子颗粒组、原药材组、去油瘤果黑种草子组）小鼠的负重游泳时间和自主活动次数均高于肾阳虚模型组，说明瘤果黑种草子颗粒、原药材及去油瘤果黑种草子均可改善小鼠的肾阳虚症，增强肾阳虚小鼠的体质、提高其对环境的适应能力。肾阳虚症小鼠的各种器官会有萎缩现象，其中以肾、睾丸、附睾、精液囊和前列腺的重量下降最为明显。模型组小鼠的睾丸指数附睾指数明显低于不同给药组（P＜0.01），推测药物可能可以改善肾阳虚小鼠生殖器官的状况。

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