高效液相色谱法测定热毒平颗粒中栀子苷的含量

温琰

高效液相色谱法测定热毒平颗粒中栀子苷的含量

温琰

目的建立以高效液相色谱法测定热毒平颗粒中栀子苷的含量测定方法。方法 用C18柱，流动相为乙腈-水(13∶87)，检测波长为238nm，流速为1.0 ml/min，柱温：30℃。结果栀子苷进样量在0.221μg～4.420μg范围内线性关系良好(r=0.9994)，回收率为100.6%(RSD=0.6%)。结论本方法简便、快速、准确、重现性好，可用于热毒平颗粒中栀子苷的含量测定。

高效液相色谱法;热毒平颗粒;栀子苷;含量测定

热毒平颗粒是由生石膏、金银花、玄参、地黄、连翘、栀子、甜地丁、黄芩、龙胆、板蓝根、知母和麦冬十二味药材组成的中药复方制剂，具有治疗呼吸道感染、流感引起的头痛、发热、咳嗽、咽痛、多痰等的对症治疗，或化脓性扁桃体炎，急性涸炎，急性支气管炎，单纯性肺炎以及慢性上呼吸道炎症等功效。栀子［2］含有多种环烯醚萜苷类化合物，包括栀子苷、羟异栀子、京尼平-1-B-龙胆双糖苷、栀子苷酸和京尼平等。而栀子苷是主要的环烯醚苷类化合物，为栀子的主要有效成分，现采用高效液相色谱法测定热毒平颗粒中的栀子苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器：Waters515高效液相色谱仪(515泵、2487双波长紫外检测器);BP211D电子天平。

1.2 试药 栀子苷对照品(由中国药品生物制品检定所提供);3批热毒平颗粒样品(市售);水(超纯水)，乙腈(色谱纯)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验［1］色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相：乙腈-水(13∶87);流速：1.0 ml·min;检测波长：238nm;进样量：20.0μl;柱温：30℃。理论板数按栀子苷峰计算应不低于4000。在此色谱条件下，栀子苷对照品及供试品溶液在相同的保留时间处有吸收峰，而阴性对照溶液无吸收峰，说明阴性对照对试验无干扰。色谱见图1。

2.2 溶液的制备 对照品溶液：精密称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液：取本品装量差异项下的内容物，研细，取约2 g，精密称定，加水40 ml，振摇使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25 m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。

阴性对照溶液：取按处方及工艺制备的不含栀子药材的样品，同法制备阴性对照溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 线性关系与考察 取栀子苷对照品用甲醇分别制成每1 m l含 11.05μg、55.25μg、110.5μg、165.75μg、221.0μg 的溶液，精密吸取上述5种溶液各20μl，在上述色谱条件下，分别进样，每种溶液进样2次，记录色谱图，测定栀子苷峰面积，以浓度(X)为横坐标，栀子苷峰面积(Y)为纵坐标，线性回归方程为：Y=1364369.8 X+56688.1，相关系数：r=0.9994，结果表明栀子苷进样量在0.221μg～4.420μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度、重现性和稳定性考察 精密度考察：精密吸取“2.3”项下的栀子苷对照品溶液20μl，按上述色谱条件，连续进样6次，测定栀子苷峰面积值，结果峰面积的RSD为0.4%，表明测定方法的精密度良好。

重现性考察：取同一批号的样品，照“2.3”项下供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，分别进样测定栀子苷峰面积值。结果含量的RSD为0.5%，表明测定方法的重复性良好。

稳定性考察：取同一供试品溶液，分别于配制后第0、2、4、6和8小时按上述色谱条件，进样测定栀子苷峰面积值。结果栀子苷峰面积的RSD为0.6%。结果表明该溶液在8 h内基本稳定，可满足实验的要求。

2.5 回收率试验 精密称取已知含量的供试品约1 g，共6份，分别精密加入栀子苷对照品溶液5 ml(浓度为：221μg/ml)。照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制得供试品液，按上述色谱条件，分别进样测定栀子苷峰面积值，并计算栀子苷的含量。结果方法的回收率为100.6%，RSD=0.6%，表明方法准确度良好(表1)。

表1 回收率试验结果

3 讨论

3.1 提取溶剂和提取方法的选择［3］实验分别采用以50%甲醇为溶剂超声处理30 min、以水溶剂溶解样品后再用乙酸乙酯进行提取及以水溶剂溶解样品后再用水饱和正丁醇进行提取。结果以水溶剂溶解样品后再用水饱和正丁醇进行提取，栀子苷的提取率最高。

3.2 流动相的选择［2］实验分别采用乙腈-水(13∶87)、乙腈-0.2%磷酸溶液(13∶87)和甲醇-水-醋酸(80∶20∶0.1)为流动相，结果以乙腈-水(13∶87)为流动相，分离效果最好。

［1］国家药典委员会.中国药典.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：231-232.

［2］王宇晓，李来生，任宇红.栀子中栀子甙的高效液相色谱分析.江西师范大学学报(自然科学版)，2001，25(4)：310-311.

［3］谢海青，陈斌，王彦，等.龙荟丸中栀子苷、龙胆苦苷、芦荟苷和黄芩苷的多波长HPLC法测定.中国医药工业杂志，2011，42(1)：48-50.

341000 赣州市食品药品检验所

2.6 样品测定 取3批样品，分别按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制得供试品液。按上述色谱条件，分别进样测定，进样量为20.0μl，测定样品栀子苷的含量。结果3批样品每袋含栀子苷的平均含量分别为6.4 mg、6.0 mg、5.8 mg(n=3)。