阿莫西林：克拉维酸钾注射用混悬剂在猪体内的药物动力学试验

崔一喆，夏长军，，邢桂珍，焉秋龙，廖建维，马迪阳，宫大庆，倪宏波

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆163319；2.哈尔滨维科生物技术有限公司，黑龙江 哈尔滨150001；3.浙江海正药业股份有限公司动保事业部，浙江 台州318000）

阿莫西林（Amoxicillin），是一种最常用的青霉素类广谱β－内酰胺类抗生素。阿莫西林对β－内酰胺酶不稳定，克拉维酸为不可逆性β－内酰胺酶抑制剂，与阿莫西林联合，可保护阿莫西林免遭β－内酰胺酶水解，并使阿莫西林的抗菌作用显著增强和抗菌谱拓宽。阿莫西林－克拉维酸的复方制剂已在临床上广泛应用［1］。本试验以猪为研究对象，用高效液相色谱法测定猪血浆中AMO和CLA的含量，旨在为兽医临床合理用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 阿莫西林－克拉维酸钾注射用混悬剂：由海正药业有限公司提供；其他常规试剂从市场购入；猪血浆：采新鲜健康猪血，3 000r／min离心15 min，血浆于－20℃保存备用。

1.2 主要仪器 高效液相色谱仪Agilent，1200UV检测器、柱温箱、脱气机、自动进样伐、20RBAX，XDB－C18柱（5μm、150×4.6mm，Agilent公司）。TGL－16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.3 试验动物 长白猪，体重约20kg。共5头，圈养，自由采食饮水，饲喂不含抗菌药物的全价日粮，试验前饲养7d。

1.4 色谱条件 检测器为紫外检测器；XDB－C18柱（5μm、150×4.6mm，Agilent公司），柱温30℃；0.02mol／L磷酸二氢钾∶甲醇＝91∶9，磷酸调pH值至3.5做流动相；流速为1mol／min；检测波长为222nm；进样量25μL。按常规方法处理血浆，同时测定回收率，精密度计算日内变异系数。

1.5 药物代谢动力学试验

1.5.1 动物给药 5头健康长白商品仔猪，饲喂7 d后，肌肉注射海正药业有限公司AMO－CLA注射用混悬剂组。给药前要充分将各混悬剂振摇混匀，以20mg／kg剂量（以AMO计）于耳后颈部肌肉注射。

1.5.2 血样采集 给药后按以下时间点前腔静脉采血，0、0.2、0.33、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72、84、96h，每个采血点采血量约为5mL。

1.5.3 血样处理与测定 血样采集后，立即置于含肝素抗凝剂的塑料试管中，2 500r／min离心10 min，分离血浆，吸取上层血浆置于1.5mL离心管中，按1.4方法处理后测定AMO和CLA的含量。

1.5.4 数据处理 所得血药浓度数据采用中国药理学会编制的DAS药物动力学程序软件在微机上处理，进行优化选择和房室模型拟合，确定最适药物动力学模型，计算出药物动力学参数，同时以血药浓度平均值对时间作药时曲线。

2 结果与分析

2.1 药物动力学试验结果 经本方法测定，AMO浓度在0.5～30mg／L的浓度范围内，标准曲线的线性关系良好，绝对回收率为89.29%±6.73%，日内变异系数4.43%，日间变异系数6.65%。CLA浓度在0.08～2.5mg／L的浓度范围内，标准曲线的线性关系良好，绝对回收率为85.35%±4.59%，日内变异系数3.26%，日间变异系数5.83%。表明本测定方法可用于AMO和CLA药物动力学的试验。

2.2 血浆中AMO和CLA含量测定结果 各组仔猪注射药物后，各采血点血浆中AMO和CLA的含量测定结果见表1。图1为AMO药－时曲线，图2为CLA药－时曲线。

以上结果表明，以20mg／kg剂量（以 AMO计）肌肉注射混悬剂后，AMO血药浓度约在2h即达到峰值；CLA血药浓度约在1h即达到峰值。AMO在给药后96h血药浓度低于检测限；CLA在给药后96h血药浓度低于检测限。

表1 各组猪血浆中AMO和CLA浓度测定结果

2.3 AMO和CLA的药物动力学参数 根据表中血药浓度测定结果，经药动学数据处理程序DAS处理，得到模型选择参数。依据模型确定原则，即拟合度R2越大，AIC值越小，则其模型拟合越好。通过比较可知肌肉注射AMO－CLA混悬液在猪体内的药动学过程符合权重为1／cc的一级吸收的二室模型。本文据此模型进行药物动力学参数计算，得出药物动力学参数结果见表2。

表2 各组猪AMO和CLA的药物动力学参数

3 讨论

3.1 关于血浆中AMO及CLA的测定方法 目前同时测定血浆中AMO和CLA含量的方法很多，其中HPLC方法是同时测定血浆中AMO和CLA含量使用最普遍的一种方法，常用流动相为甲醇－磷酸盐缓冲液，乙腈－磷酸盐缓冲液，甲醇－乙腈－磷酸盐缓冲液、磷酸盐－三乙胺－甲醇缓冲液等［2－3］。本试验参照以上国内外有关方法，经过多次比较试验，并对前处理方法进行改进，采用磷酸二氢钾－甲醇作流动相，通过多次调整流动相配比，以及流动相pH值（pH值变化影响保留时间），最终确定流动相为：0.02mol／L磷酸二氢钾∶甲醇＝91∶9，磷酸调pH值为3.5。

由于 AMO和 CLA 都不稳定［4－5］，所以测定血浆中CLA及AMO时，对照品要现配现用。本方法所测得AMO和CLA标准曲线的线性关系良好，AMO的检测限为0.5～30mg／L，CLA的检测限为0.08～2.5mg／L。回收率试验表明，本检测方法重现性良好，精密度试验表明，本方法检测结果可靠，说明本试验所采用的方法可以用于血浆中CLA及AMO的测定。

3.2 关于药物动力学 本制剂中AMO的消除半衰期长达27.31h，CLA的消除半衰期长达22.38 h，说明本制剂有延缓药物释放作用。AMO曲线下面积（AUC）为316.257mg／L·h，说明 AMO在猪体内的血管外组织分布广泛。最大血药浓度（Cmax）为22.472mg／L，达峰时间（Tmax）为2h，可见AMO在猪体内分布快且持效时间长。按20 mg／kg剂量（以AMO计）肌肉注射同剂量本制剂72h后仍可维持1mg／L（以AMO计）的血浆浓度，该血浆浓度在猪体内对普通的呼吸道病原菌如胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等的生长能起到有效的抑制作用［6］。所以对普通的呼吸道病原菌如胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌所致呼吸道疾病的防治，可肌肉注射本制剂20mg／kg（以AMO计），每3d注射1次。

［1］王西林.阿莫西林联合用药的临床进展［J］.天津药学，1997（3）：24.

［2］蔡金华，顾欣，刘雅妮.高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林含量［J］.中国兽药杂志，2005，39（7）：20－22.

［3］杨伶俐，徐帆，刘红艳.高效液相色谱法测定人血浆中阿莫西林含量［J］.中国药师，2008，11（8）：930－932.

［4］张秀英.阿莫西林混悬液的含量测定［J］.中国兽药杂志，2000，34（6）：21－23.

［5］王齐放，李三鸣，赵喆，等.pH及不同缓冲盐对阿莫西林化学稳定性的影响［J］.沈阳药科大学学报，1999，16（3）：176－178.

［6］Agerso H，Friis C.Bioavailability of amoxycillin in pigs［J］.Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1998，21：41－46.