抗着丝点抗体在肝病患者中的检测及其意义

冯 霞，闫惠平，刘燕敏，廖慧钰，张海萍，马胤雪

（首都医科大学北京佑安医院，北京100069）

自1980年首次发现抗着丝点抗体［1］（anti－centromere antibodies，ACA）ACA是系统性硬化症局限性的标志性抗体。但随着自身抗体检测的普及和检测水平的不断提高，在其他疾病中也可检出抗着丝点抗体，尤其是近年来我们发现在肝功能异常的患者中间常见到ACA阳性。为探讨抗着丝点抗体在肝功异常患者中检出情况及这部分患者的临床及生化特征，收集10000例肝功异常患者的血清进行抗着丝点抗体检测，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 血清采集 收集2004年7月－2008年7月住院肝功能异常患者10000例清晨空腹不抗凝血2 ml，离心后吸取血清，20℃冰箱保存。

1.2 间接免疫荧光法 （IFA，德国Eurolmmun公司试剂）检测血清中抗核抗体（ANA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗平滑肌抗体（S MA）抗细胞骨架抗体。采用HEp－2细胞和5种组织（猴肝脏和心肌组织、大鼠肝、肾和胃组织）的冰冻切片作为抗原，以生物薄片技术将带有细胞和组织的6种切片组成一个反应区。待检血清自1∶100起稀释，与各种组织共同孵育30分钟，加入异硫氰酸荧光素标记的抗体孵育30分钟，洗片、封片后荧光显微镜下观察结果。组织或细胞内出现特征性绿色荧光，血清稀释度≥1∶100为阳性。

1.3 免疫印迹法检测抗着丝点抗体 将各种高度纯化的各种抗原平行包被于检测膜条上，固定后，将膜置室温孵育槽内，加入缓冲液震荡孵育30分钟，弃缓冲液，加入稀释待检血清，孵育震荡30分钟，洗片，加入ALP标记的第二抗体，再震荡洗片，显色。检测膜条上出现蓝紫色条带为阳性，以试剂公司提供的阳性条带位置标准图判断结果。

1.4 应用EL ISA法检测各种肝炎病毒 （包括HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、CMV、EBV）标记物。

1.5 应用全自动生物化学分析仪检测 ALT、AST、TBil、DBil等肝功能指标及IgG、IgA、IgM。

1.6 诊断标准 PBC的诊断参照2000年美国肝病学会“PBC诊断治疗指南”，AIH的诊断参照1999国际自身免疫性肝炎工作组制定的诊断标准，病毒性肝炎及肝硬化参照2000年病毒性肝炎防治指南。

1.7 统计学方法 计量资料正态分布采用均值±标准差表示，非正态分布计量资料以中位数M表示，采用配对秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝病患者中抗着丝点抗体的检出 10000例肝功异常患者血清中检测出抗核抗体阳性、着丝点型134例，占1.34%。其中男性30例，女性104例，平均年龄55.73±14.16（16－86）。除 ACA以外，部分患者同时检出伴有一种或两种其他自身抗体，主要的比例分布见表1。

表1 ACA阳性患者的情况

2.2 临床诊断

134例ACA阳性患者，诊断为硬化型肝病的有83例，包括PBC、PBC和AIH重叠症、肝炎肝硬化以及原发性肝癌硬化型。诊断为非硬化型肝病的有51例，包括病毒性乙型肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝炎和病毒性丙型肝炎等。其分布如表2。134例ACA阳性的患者中有83例的临床诊断为肝硬化或肝硬化基础上的进一步病变，86例ACA大于等于1：320的患者中，有61例患者有肝硬化的表现，合并滴度为1∶320和1∶1000的患者为ACA高滴度组，采用Pearson Chi－square检验，P＝0.004＜0.05，两组的差异有显著性意义，即ACA高滴度组患者肝硬化的发生率明显高于低滴度组。

表2 ACA阳性患者的临床诊断情况

2.3 实验室检查 134例患者按照抗着丝点抗体滴度分为2组：低滴度组（滴度1∶100）组和高滴度组（滴度大于等于1∶320）。两组的实验室检查结果分别如表3。

3 讨论

抗着丝点抗体是系统性硬化症局限性（CREST综合征）的诊断特异性抗体［2］。着丝点是细胞分裂期的重要结构之一，在细胞分裂前，两条染色体单体通过着丝点相连在一起，在细胞分裂过程中，纺锤体纤维附着在着丝点包含的着丝粒上，将染色单体向他们相应的中心粒方向牵拉，平均分配到两个子细胞中。抗着丝点抗体是针对着丝点结构相关蛋白而产生的自身抗体，它可分为三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A（分子量17KD）、着丝点蛋白B（分子量80KD）和着丝点蛋白C（分子量140 KD）［3］，其中主要抗原为着丝点蛋白B，它能与含有各种着丝点抗体的血清起反应。采用蛋白质印迹法（免疫印迹法）检测染色质提取物，发现其主要靶抗原为CENP－A、CENP－B、CENP－C。关于 ACA的致病机制目前并不清楚。然而，当ACA直接注入真核细胞时，对细胞分裂有明显影响，从而提示CENP抗原在细胞周期中的重要作用。遗传学研究发现［1］ACA阳性患者DQBl第一区域26位上疏水性亮氨酸残基被谷氨酸或酪氨酸残基替代，提示HLADQBl 26位上非亮氨酸残基是产生ACA的必要条件。

表3 低滴度组和高滴度组生化指标比较

近年来，随着对ACA研究的深入进行，发现也出现在PBC、SS、RA等其他的疾病中。王雪松等［4］报道，ACA阳性率在原发性胆汁性肝硬化（PBC）约为12.14%。闫惠平等研究表明［5］，大约50%PBC患者有ANA，以着丝点型、核膜型和核点型多见。本研究中，ACA在肝病患者中的检出率约为1.34%。女性为主，占76.8%，高滴度的ACA中女性占到89.5%。ACA阳性患者多伴有其他自身抗体，以AMA、anti－SMA多见。ACA阳性不仅见于PBC，也可见于病毒性肝炎、酒精性肝肝硬化、药物性肝炎等各种肝病中。但是高滴度的ACA多见于各种原因引起的肝硬化患者。

李玲等［6］报道，在SS患者，ACA阳性组肝损害频率高于ACA阴性组，差异有显著性，说明ACA与SS合并肝脏损害相关。我们的研究结果显示，在肝病患者中，虽然ALT、AST在ACA高滴度组和ACA低滴度组没有明显的差别，但是ACA高滴度组AST／ALT比值的差别明显高于ACA低滴度组，而ALB和PA明显低于低滴度组，说明ACA高滴度组肝实质的损伤更为严重。进一步分析表明，ACA阳性组肝硬化的发生率较高，提示ACA与肝脏硬化有明显的相关性，这一现象还未见报道。

总之，ACA在肝病患者中并不少见，ACA与肝硬化密切相关，提示临床上患者出现ACA，尤其是高滴度的ACA时，应该考虑肝硬化的发生，予以高度重视。

［］Tan EM.Antiunclear antibodier in scleroderma［J］.Intern J Dermatol，1981，20：569.

［2］Yutaka Okano.Antiunclear antibody in systemic sclerosis［J］.Rheum Dis Clin N Am，1996，22（4）：709.

［3］Earmshaw W，Bordwell B，Marino C，et al.Three human chromosomal autoantigens are recognized by sera from patients with anticentromerere antibodies［J］.J Clin Invest，1986，77（2）：426.

［4］王雪松，李永哲.原发性胆汁性肝硬化自身抗体谱研究进展［J］.世界华人消化杂志，2006，14：245.

［5］闫惠平，庄 辉，刘燕敏，等.原发性胆汁性肝硬化患者的免疫学特点分析［J］.中华肝脏病杂志，2005，13：12.

［6］李 玲，张 烜，李永哲，等.抗着丝点抗体在干燥综合症中的临床意义［J］.中华内科杂志，2004，43：778.