泰国缺失型α-地中海贫血1导致血红蛋白H病的产前诊断

许涓涓 杜 娟 唐 斌 李 萌 谭舒尹 黄萍丽

广西壮族自治区妇幼保健院 广西壮族自治区儿童医院，广西南宁 530003

泰国缺失型α-地中海贫血1导致血红蛋白H病的产前诊断

许涓涓 杜 娟▲唐 斌 李 萌 谭舒尹 黄萍丽

广西壮族自治区妇幼保健院 广西壮族自治区儿童医院，广西南宁 530003

目的 探讨泰国缺失型α-地中海贫血1（泰国缺失型）导致的血红蛋白H病（Hb H病）产前诊断方法。 方法收集2010年6月～2011年12月间在广西妇幼保健院优生遗传门诊就诊的3对可能生育泰国缺失型Hb H病胎儿夫妇，采用先后检测常规6种常见α-地中海贫血（α-地贫）基因型和检测泰国缺失型的方法，对这3对高风险夫妇进行产前诊断。 结果3对夫妇产前诊断胎儿均为Hb H病，1例是泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α3.7）；1例是泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α4.2）；1例是泰国缺失型复合Hb Westmead双重杂合子，基因型是（--THAI/αWSα）。 结论 综合分析常规检测和泰国缺失型检测结果，能有效的产前诊断泰国缺失型导致的Hb H病。

血红蛋白H病；泰国缺失型；产前诊断

在东南亚地区和中国南方，α-地中海贫血 （α-地贫）是常见的遗传性溶血性贫血，致病机制主要是位于16号染色体上的α-珠蛋白基因的缺失或缺陷导致α-珠蛋白链合成减少或不能合成。一条16号染色体上正常存在2个α-基因，如果同时缺失称为缺失型α地贫1（或称α0地贫），最常见的类型是东南亚缺失型α地贫1（简称东南亚缺失型），而泰国缺失型α地贫1（简称泰国缺失型）罕见，两者的比例大约是99∶1。泰国缺失型缺失了包括ζ珠蛋白基因和2个α珠蛋白基因在内的33.5 kb的片段[1]，它的5'断裂端距ζ珠蛋白基因起始密码子上游约3 kb，3'断裂端距α1珠蛋白基因起始密码子下游约6.6 kb[2]。在国内，泰国缺失型既往在台湾、广东、广西及福建有散在发现[3-7]，它与其他α-地贫复合存在，在临床上可以形成中重型α-地贫，即泰国缺失型的血红蛋白H病（Hb H病）和泰国缺失型的巴氏水肿胎。Hb H病患者可出现轻、中度贫血、肝脾大、黄疸等轻重不一症状和体征，严重者需输血、脾切除，影响身心健康，目前该病根治方法为干细胞移植。因此，为了提高人口素质，降低出生缺陷，有生育Hb H病胎儿风险的夫妇需要进行产前诊断，阻断Hb H病胎儿出生。

目前常规α-地贫基因诊断只包括常见的6种基因类型，即 3 种缺失型[东南亚缺失型（--SEA/）、右侧缺失型（-α3.7/）、 左侧缺失型（-α4.2/）]和 3 种点突变[Hb constant spring（Hb CS）、Hb Westmead （Hb WS）和 Hb Quong Sze（Hb QS）]。泰国缺失型由于罕见而不在常规检测范围，因而造成漏诊，导致泰国缺失型的Hb H病和泰国缺失型的巴氏水肿胎儿出生。如何避免泰国缺失型漏诊，本研究笔者对发现3对有可能生育泰国缺失型Hb H病胎儿的夫妇，采用两步骤的检测方法成功进行了产前诊断，现报道如下，以期为相关研究提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2010年6 月～2011年12月在广西妇幼保健院优生遗传门诊就诊的夫妇中发现3对可能生育泰国缺失型Hb H病胎儿，知情同意后，对其进行地贫产前诊断。

1.2 取材

外周血样本：抽取静脉血 2 mL，EDTA抗凝，取 200 μL提取DNA。羊水样本：按常规抽取10mL，3500r/min离心10min，弃上清液，取沉淀提取DNA。脐血样本：按常规抽取1 mL，EDTA抗凝后，取其中200 μL用于提取DNA。外周血和脐带血样本同时进行血常规和血红蛋白检测。血常规检测采用全自动血液分析仪（迈瑞公司BC-5800）。血红蛋白检测采用凝胶血红蛋白电泳（全自动电泳仪，法国Sebia公司），按说明操作。

1.3 DNA提取

按微量DNA提取试剂盒 （德国QIAGEN公司）说明提取。

1.4 6 种常见α-地贫基因型检测

每份样本首先进行6种常见α-地贫基因型检测。（--SEA/）、（-α3.7/）和（-α4.2/）检测采用跨越断裂点 PCR（gap-PCR）方法；Hb CS、Hb WS和Hb QS检测采用等位基因特异性寡核甘酸探针反向斑点杂交方法（RDB）进行 （α-地贫检测试剂盒，深圳创益生物有限公司），操作均按说明进行。

1.5 泰国缺失型检测

每份样本取2 μL DNA，采用gap-PCR方法进行检测，引物见参考文献[7]，预期扩增产物片段大小约为1 000 bp。50 μL 反应体系包括：10×缓冲液、2 mmol/L dNTPs、Tap DNA聚合酶 0.5 μL （大连宝生物）、10 nmol/L 引物，DNA 1μg；反应条件：预变性 96℃ 5 min，98℃ 45 s，61℃ 90 s，72℃ 135 s，循环 35 次，72℃ 5 min；在 PCR 仪（ABI，9700）上反应结束后，取10 μL在1%琼脂糖凝胶上电泳50 min，Y啶橙核酸染料染色，凝胶成像系统（美国Bio-Rad，DOC-XR）上观察，并照相保存。

2 结果

2.1 家系1

2.1.1 妻子36岁，广西平果人，壮族，血常规和血红蛋白电泳未见异常；常见α-地贫6种基因型检测结果为右侧缺失型杂合子，泰国缺失型检测结果为未检出泰国缺失型。将两者结合分析，基因型是（-α3.7/αα）。

2.1.2 丈夫37岁，广西平果人，壮族，无贫血外貌，肝脾肿大

不明显，血常规结果：平均红细胞体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）下降，提示小细胞低色素贫血；血红蛋白电泳Hb A22.0%，Hb H 5%；常见α-地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型纯合子，泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，丈夫实际为泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α4.2）。

2.1.3 胎儿胎龄22周，系统B超未见异常，脐血血常规结果为：血红蛋白 93 g/L，MCV 87.5 fl，MCH 26.5 pg，均较正常下降；脐血血红蛋白分析结果为检出Hb bart's带，含量21.4%，提示胎儿为Hb H病；常见α地贫6种基因型检测结果为右侧缺失型纯合子；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，胎儿实际地贫基因为泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α3.7）。家系1的血常规、血红蛋白电泳和基因分析结果详见表1。

2.2 家系2

2.2.1 妻子36岁，广西钦州人，汉族，血常规和血红蛋白电泳未见异常；常见α地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型杂合子；泰国缺失型检测结果为未检出泰国缺失型。将两者结合分析，基因型是（-α4.2/αα）。

2.2.2 丈夫45岁，广西大化人，壮族，血常规结果：MCV、MCH下降，提示小细胞低色素贫血；血红蛋白电泳Hb A22.8%；常见α-地贫6种基因型检测结果为6种基因型检测均未检出；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，丈夫实际为泰国缺失型杂合子，基因型是（--THAI/αα）。

2.2.3 胎儿现在孕16周，B超未见异常；常见α-地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型纯合子；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，胎儿实际地贫基因为泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α4.2）。家系2的血常规、血红蛋白电泳和基因分析结果详见表1。

2.3 家系3

2.3.1 妻子36岁，广西南宁人，壮族，血常规和血红蛋白电泳未见异常；常见α地贫6种基因型检测结果为是Hb WS杂合子；泰国缺失型检测结果是未检出泰国缺失型。将两者结合分析，基因型是（αWSα/αα）。

2.3.2 丈夫36岁，广西南宁人，汉族，血常规结果：MCV、MCH下降，提示小细胞低色素贫血；血红蛋白电泳Hb A23.1%；常见α-地贫6种基因型检测结果为6种基因型检测均未检出；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，丈夫实际为泰国缺失型杂合子，基因型是（--THAI/αα）。

表1 3个家系临床表型和基因分析

2.3.3 胎儿现在胎龄18周，B超未见异常；常见α-地贫6种基因型检测结果为Hb WS纯合子；泰国缺失型检测结果检出泰国缺失型。将两者结合分析，胎儿实际地贫基因为泰国缺失型复合 Hb WS 双重杂合子，基因型是（--THAI/αWSα）。 家系3的血常规、血红蛋白电泳和基因分析结果详见表1。

3 讨论

利用引物或探针设计位点的相互关系分析常规检测和泰国缺失型检测结果，可有效对泰国缺失型导致的Hb H病胎儿进行产前诊断，即分别检测常见α-地贫6种基因型和泰国缺失型，将二者结果综合分析，得出最终的基因型。以本研究家系2中的胎儿为例，常见α地贫3种缺失型基因型检测结果只有左侧缺失型片段产物，没有东南亚缺失型、右侧缺失型或α2珠蛋白基因片段产物，提示该患者除存在左侧缺失型之外，还存在有缺失范围起码包括α2珠蛋白基因的未知的大片段α-地贫缺失类型；3种常见α-地贫点突变检测结果为Hb CS、Hb WS和 Hb QS野生型和突变型型探针均未检出，突变型探针未检出固然提示没有Hb CS或Hb WS或Hb QS突变，而野生型探针未检出提示这些突变位点所在基因片段均缺失 （Hb CS、Hb WS和 Hb QS突变位点较为邻近，而且都位于α2珠蛋白基因的3'端）；而已知左侧缺失型的缺失范围是包括上述突变位点所在基因片段的，也就是说，3种常见α-地贫点突变检测结果提示该患者除存在左侧缺失型之外，还存在未知的缺失范围起码包括上述突变位点所在基因片段α-地贫缺失类型。泰国缺失型检测证实胎儿存在泰国缺失型，而它的缺失范围包括了整个α2珠蛋白基因，即该结果证实了前两项检测结果。综合上述3种不同的基因诊断方法结果，得出家系2中的胎儿的基因型为泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α4.2）。

本实验提示，在地贫的高发区，常规α-地贫基因检测结果提示未检出异常基因或检出α+地贫纯合子的患者有误诊的可能。这样的患者与α0地贫携带者或α+地贫携带者婚配，仍有生育Hb H病或Hb Bart's水肿胎的可能。广西是贫血高发区，α-地贫发生率达15.5%，常规α-地贫基因检测突变类型有限，对于临床表现提示地贫，而与基因检测结果不符的，注意检测少见地贫类型。单从本实验中3对夫妇的常规α-地贫基因检测结果来看，并无生育Hb H患儿的可能，但是通过结合临床资料，推测3位丈夫可能存在少见的α0地贫类型，而实验最终证实了笔者的判断。本研究检测出3对夫妇胎儿均是Hb H病儿，其中，1例是泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α3.7）；另1例是泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是（--THAI/-α4.2）；最后1例是泰国缺失型复合Hb WS双重杂合子，基因型是（--THAI/αWSα）。笔者及时通知了这3对夫妇，并分别进行了遗传咨询，让他们知晓胎儿可能出现轻到中度的贫血，有助于优生优育、降低出生缺陷和提高人口素质。

有趣的是，本实验发现家系1的丈夫也是（--THAI/-α4.2）患者，患有轻度贫血症状（Hb 113 g/L），肝脾肿大不明显，无地贫外貌，无输血史。这提示泰国缺失型的Hb H病可能与其他缺失型Hb H症状相似。有报道认为，泰国缺失型复合Hb CS双重杂合子临床症状比其他缺失型Hb H病严重[8]，在临床咨询中值得注意。

当然，在中国人群中，α0地贫的类型除上述的东南亚缺失型和泰国缺失型外，还有菲律宾缺失型（Filipino deletion，--FIL/）[9]。以往的报道在台湾人群中检出菲律宾缺失型，而且认为该地区菲律宾缺失型比泰国缺失型常见[3]。本研究笔者对这3对夫妇也进行了菲律宾缺失型检测，结果并未检出。这一定程度上提示，在国内泰国缺失型比菲律宾缺失型更常见。当然，如果泰国缺失型未检出，还要进一步检测菲律宾缺失型等其他α0地贫的类型。

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Prenatal diagnosis of hemoglobin H disease caused by Thailand deletion of α-thalassemia 1

XU Juanjuan DU Juan▲TANG Bin LI Meng TAN Shuyin HUANG Pingli
Maternity and Child Care Center of Guangxi Zhuang Autonomous Region Children's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530003,China

ObjectiveTo explore the prenatal diagnosis method of hemoglobin H disease (Hb H disease)caused by Thailand deletion of α-thalassemia 1.Methods3 couples who might have fetuses with Hb H disease caused by Thailand deletion of α-thalassemia 1 in eugenic and genetic outpatients clinic of Guangxi Zhuang Autonomous Region maternal and child care center from June 2010 to December 2011 were chosen.Genotypes of six kinds of common alpha-thalassemia(alpha-poor)and Thailand deletion of α-thalassemia 1 were detected.Then prenatal diagnoses were carried out for these three high-risk couples.ResultsPrenatal diagnosis of fetuses in the three couples were Hb H disease.One case was double heterozygous of Thailand deletion of α-thalassemia 1 and right side deletion,and its genotype was(--THAI/-α3.7).One case was double heterozygous of Thailand deletion of α-thalassemia 1 and left side deletion,and its genotype was(--THAI/-α4.2).One case was double heterozygous of Thailand deletion of α-thalassemia 1 and Hb Westmead,and its genotype was(--THAI/αWSα).ConclusionComprehensive analysis of test results of conventional detection and Thailand deletion of α-thalassemia 1 detection can make effective prenatal diagnosis for Hb H disease caused by Thailand deletion of α-thalassemia 1.

Hb H disease;Thailand deletion;Prenatal diagnosis

R556.61

A

1673-7210（2012）08（c）-0059-03

▲通讯作者

2012-05-15 本文编辑：程 铭）