不同剂量促卵泡素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响

杨宏宇 （山东省蓬莱市大柳行镇畜牧兽医站 265600）



不同剂量促卵泡素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响

杨宏宇 （山东省蓬莱市大柳行镇畜牧兽医站 265600）

本试验比较了不同剂量的促卵泡素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响，试验分2组，利用FSH减量法对供体荷斯坦奶牛进行超数排卵。A组FSH剂量为13mg/头，B组为12mg/头。试验结果A组平均黄体数13.5个，平均获可用胚数9.5枚，均高于B组的平均黄体数3个和平均获可用胚数2.5枚。试验结果初步表明：应用13mgFSH组的超排效果好于12mg组。

荷斯坦奶牛 超数排卵 FSH 可用胚胎

近年来胚胎移植技术在畜牧生产中的应用已得到普遍重视，在胚胎移植技术的实施中对供体母畜进行超数排卵是胚胎移植程序中不可缺少的一个环节[1]，牛是单胎动物，妊娠期长，产犊数量少，因而研究者一直都很重视对优质母牛超数排卵的研究。

我国牛胚胎移植起步较晚，但发展很快，90年代中期开始产业化[2]。虽然经过多年研究，牛的超数排卵技术己基本成为规范化操作，但由于激素来源、个体差异、饲养管理条件等诸多因素的影响，超排效果并不稳定[3]。超排中所用激素的剂量是影响超排效果的一个重要因素，为了确定适用于布莱凯特公司高产荷斯坦奶牛的最佳超排剂量，本试验用中国科学院动物研究所生产的FSH (follicle-stimulating hormone)对高产荷斯坦奶牛进行超排，比较了不同剂量的FSH对超排效果的影响，为进一步获得稳定的超排效果提供依据。

l 材料与方法

1.1 试验动物

在青岛农业大学科研成果转化基地教学实习基地一山东省布莱凯特牧业科技有限公司，选择体质健康，有正常的发情周期，无遗传和繁殖疾病，膘情良好的荷斯坦高产成年母牛(3~4岁)4头，分成2组，A组牛号分别为5543、4720；B 组牛号分别为4457、4738。供体牛采用全舍饲标准化饲养。

1.2 主要仪器和药品

1.2.1 主要仪器 冲卵管、集卵杯、体视显微镜等。

1.2.2 主要药品 促卵泡素(FSH)，中国科学院动物研究所，l0mg/瓶；前列腺素(PG)，上海计划生育研究所生产的氯前列烯醇，0.2mg/支；促排卵素(LHRH-A3)，宁波第二激素厂生产，25mg/支；利多卡因，山东华鲁制药有限公司生产，5ml/支；冲卵液为复方氯化钠注射液，济南鲁清兽药有限公司生产。

1.3 超排处理方法

供体牛自然发情(以站立接受爬跨为准)的当天为0d，超排选择在牛发情周期的9~12d进行，应用递减法肌肉注射FSH，2次/d，每次间隔12h，连续4天共8次。在注射FSH的第3天早、晚肌肉注射氯前列烯醇2次，于注射FSH开始后的第5天观察母牛发情情况，具体程序及剂量见表1。

表1 激素剂量与处理程序 (mg)

1.4 人工授精、胚胎收集及胚胎质量评定

超排供体母牛于FSH处理后的第5天发情，一般待发情后8h开始进行第1次加倍剂量人工授精(所用精管来自天津，种公牛号为035，此后间隔12h再输精1次，同时注射LHRH-A3(2支)。以供体牛发情当天为0天，在第7天采用非手术法收集胚胎。

将供体牛保定，通过直肠检查确定黄体数，然后对供体牛的尻、外阴部进行清洗、消毒。在第一、二尾椎间注入3~5ml利多卡因做硬膜外腔麻醉。将二路式导管冲卵管输送到子宫内，进行冲卵。冲卵液全部回收后，迅速送入无菌操作室(20~30℃)，用集卵杯过滤，并弃掉大部分的回收液，将集卵杯中剩余的冲卵液置于体视显微镜下进行检查，捡出合格胚胎转入保存液中，根据胚胎内胚团的质量和整个胚胎的形态结构判断是否为可用胚胎[4]。

2 结果与分析

激素的剂量是影响超排结果的重要因素。本试验结果表明，应用中国科学院动物研究所生产的FSH对小黑牛公司饲养的高产荷斯坦奶牛进行超排，超排剂量为13mg时的超排效果好于12mg，获胚数和可用胚胎数都比较多。牛超排后直肠检查13mg组的供体平均黄体数为13.5个，平均获可用胚数为9.5枚；12mg组平均黄体数为3个，平均获可用胚数为2.5枚(表2)。A组平均黄体数和平均获可用胚数均高于B组。B试验组获得胚胎数少，可能是由于注射的FSH剂量不足，只使少数卵泡发育起来，而大多数生长中的卵泡发生了闭锁或黄体化，影响了超排效果。另外，本试验样本较少，有待于进一步验证。不同剂量的超排结果比较见表2。

表2 供体母牛超数排卵结果统计表

3 讨论

FSH的主要作用，就是促使一批处于生长期的中小卵泡同优势卵泡一样生长到排卵时的体积，以达到超排的目的。但由于FSH半衰期短，使用时必须多次注射才能达到预期效果，故试验中注射2次/d，连续用药4d。而试验采用FSH减量法主要是因为卵泡发育一段时间后，即可刺激机体本身的腺垂体产生部分FSH满足卵泡发育需要。

卵泡发育是动态过程，即在任何时期检查动物的卵巢，均可发现两种或两种以上处于不同发育阶段的卵泡，这种反应从原始卵泡发育至初级、次级、三级以至成熟卵泡的动念变化过程所组成的图形，即卵泡发生波。几乎所有哺乳动物在一个发情周期可出现2个或3个卵泡发生波。Hamilton等(1992)在12头荷兰黑白花奶牛中发现，8头在发情周期中出现了3个卵泡发生波，其余4头之出现了2个卵泡发生波，出现3个卵泡发生波的母牛，卵泡发生波开始于发情周期的第1.4d、9.0d和16d。出现2个卵泡发生波的母牛，卵泡发生波开始于发情周期第1d和第12d。为了保证超排有效率，选择在供体牛发情周期的9~13d进行超排，其理论依据就是在这段时间里卵巢内有一批卵泡正在成熟过程中。

此外，正常的非超排奶牛发情后，血浆LH水平迅速上升，发情后10h达到高峰，约25h排卵。柳尧波等[5](2004)研究表明，超排奶牛发情后的LH水平低于非超排奶牛，其中以没有采集到胚胎的超排奶牛的LH水平最低，许多超排奶牛缺乏促使排卵的LH峰，所以超排过程中研究人员采取各种方法来提高血液中LH水平以提高超排效果。本试验中对荷斯坦奶牛超排处理中使用了中国科学院动物研究所生产的LHRH-A3，可通过影响LH释放，促使LH分泌，提高超排奶牛多卵泡排卵的同期化程度。朱玉林[6](1994)在试验牛静立发情6~8h第一次输精时注射一定剂量的LHRH2A或LHRH-A3，结果排卵数和获卵率比对照组(不注射促排激素)均有所提高，可由胚胎数提高1.67%，可用胚胎率提高2.16%，说明注射LHRH-A3确实有提高胚胎质量的作用。

影响奶牛超排效果的因素很多，除了超排时使用激素的剂量外，还有季节、年龄、超排方法、供体牛的内分泌状况、卵巢状况、供体牛的营养水平以及环境因素等[7-8]。因此要提高奶牛的超排效果需要综合考虑这些因素，并制定出一个最佳超排方案。

[1] 王杏龙. FSH和PMSG对不同生理状态下山羊超数排卵的效果[J]. 中国畜牧杂, 2001, 2.9(5): 30-31.

[2] 郭志勤. 中国牛胚胎移植技术产业化前景[J]. 草食家畜, 2001, 增刊(2): 10-14.

[3] 李海林. 牛高效胚胎移植技术[M]. 北京: 中国农业出版社, 2003: 19-24.

[4] 魏红芳, 郭建来. 牛超数排卵的方法及影响其效果的因素[J]. 河南畜牧兽医, 2004, 25(10): 20-25.

[5] 柳尧波, 黄金明. 青年荷斯坦奶牛的超数排卵试验[J]. 中国草食动物, 2004, 24 (1): 14-16.

[6] 朱玉林. 改善奶牛超数排卵效果的方法[J]. 中国奶牛. 1994, 18(4): 3l-33.

[7] 章志国, 章孝荣. 动物超数排卵的影响因素及发展现状[J]. 安徽农业科学, 2003, 31(1): 41-43.

[8] 唐火伟, 马甫行, 李毓华等. 不同品种肉羊超数排卵方法与效果[J]. 江苏农业科学, 2005, 24(2): 77-79.

（2012–06–28）

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