HPLC法测定丁苯那嗪原料药含量Δ

王颂佩，李晓敏，刘春仪，钦晓峰，陈正平（江苏省原子医学研究所/卫生部核医学重点实验室/江苏省分子核医学重点实验室，江苏无锡 214063）

HPLC法测定丁苯那嗪原料药含量Δ

王颂佩＊，李晓敏，刘春仪，钦晓峰，陈正平#（江苏省原子医学研究所/卫生部核医学重点实验室/江苏省分子核医学重点实验室，江苏无锡 214063）

目的：建立测定丁苯那嗪原料药含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Lichrospher C18，流动相为乙腈-50mmol·L－1醋酸铵缓冲液（pH 4.50）＝80∶20，流速为0.8mL·min－1，检测波长为280nm。结果：丁苯那嗪检测浓度线性范围为0.1～5.0mg·mL－1（r＝0.9991），平均回收率为99.93%，RSD为0.78%。结论：该方法简便可靠，可用于丁苯那嗪原料药的含量测定。

丁苯那嗪；高效液相色谱法；含量测定

丁苯那嗪（Tetrabenazine，TBZ）通过选择性阻断中枢神经系统中的囊泡单胺转运体（VMAT2）来发挥作用，用于控制运动功能障碍。2008年8月经美国FDA以快速审批资格批准上市，成为首个且唯一在美国获准用于治疗亨廷顿舞蹈病（Huntington’s disease，HD）的药物[1，2]。目前，该药已在其他14个国家通过批准，有望不久的将来在中国上市。笔者合成了TBZ原料药[3]，在本文中介绍了采用高效液相色谱（HPLC）法测定TBZ含量的方法。

TBZ化学结构式见图1。

图1 TBZ的化学结构式Fig 1 The chemical structure of tetrabenazine

1 仪器与试药

HPLC仪，包括1525泵、2487紫外检测器（美国Waters公司）。

TBZ 原料药（批号：20100801、20101028、20110309，纯度：＞97.0%）及TBZ对照品（由原料药精制而成，纯度：99.9%）均由卫生部核医学重点实验室提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Lichrospher C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-50mmol·L－1醋酸铵缓冲液（pH 4.50）＝80∶20，流速：0.8mL·min－1；检测波长：280nm；进样量：10μL。

取“2.2”项下对照品和供试品溶液，进样分析，记录色谱图，结果主峰与杂质峰分离良好，理论板数以TBZ计＞4200，且主峰的保留时间比较合适，色谱见图2。

图2 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；1.TBZFig 2HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.TBZ

2.2 溶液制备

对照品溶液：精密称取干燥至恒重的TBZ对照品50.0mg，置于10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，即得5.0mg·mL－1的贮备液，再稀释为1.0mg·mL－1的对照品溶液。

供试品溶液：称取干燥至恒重的TBZ原料药10.0mg，置于10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，即得1.0mg·mL－1的供试品溶液。

2.3 破坏性试验

精密称取3份TBZ对照品5.0mg，置于5mL量瓶中，分别加入3种溶液：（1）0.05mol·L－1的盐酸溶液2.0mL；（2）含0.1mol·L－1氢氧化钠的甲醇溶液2.0mL；（3）30%的双氧水0.2mL。室温放置1h，加流动相至刻度，摇匀，分别作为酸破坏溶液、碱破坏溶液及氧化破坏溶液，进样分析，色谱图见图3A、B、C。

图3 破坏性试验高效液相色谱图A.酸破坏溶液；B.碱破坏溶液；C.氧化破坏溶液；D.高温破坏溶液；1.TBZ；2～5.降解产物Fig 3 HPLC chromatograms of destructive testsA.acid destructive solution；B.base destructive solution；C.oxidative destructive solution；D.thermal destructive solution；1.tetrabenazine；2～5.degraded products

精密称取TBZ对照品5.0mg，置于5mL量瓶中，加入流动相2.0mL，80℃加热2h，放置冷却，加流动相至刻度，摇匀，作为高温破坏溶液，进样分析，色谱图见图3D。

试验结果表明，酸、碱、氧化破坏后的降解产物与主成分峰分离良好；而高温（80℃）破坏后，未见有明显杂质。

由于本品较稳定，故未进行光照破坏试验。

2.4 最低检测限的测定

取对照品溶液定量稀释，进样分析。结果，本品的最低检测浓度为0.32μg·mL－1，最低检测限为3.2ng（S/N＝3）。

2.5 线性关系试验

精确量取一定量的TBZ对照品溶液1.0、2.0、5.0mL及贮备液2.0、4.0mL，用甲醇稀释制成浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg·mL－1的溶液，进样分析上述溶液及对照品溶液，记录色谱图，每个浓度测定2次，取峰面积的平均值。以峰面积（A）对浓度（c）作图进行线性回归，得方程为A＝7×106c+2.3792×105（r＝0.9991）。结果表明，TBZ检测浓度线性范围为0.1～5.0mg·mL－1。

2.6 精密度试验

取同一对照品溶液在同日内连续进样6次测定，根据峰面积计算RSD＝1.04%。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液分别于室温放置1、3、5d后进样测定，根据峰面积计算RSD＝1.20%，表明溶液在室温下5d内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号原料药，共6份，分别制成供试品溶液后进样测定，计算得含量RSD＝1.05%，表明本方法重复性较好。

2.9 回收率试验

精密称取TBZ原料药适量，制备成含TBZ分别为0.8、1.0、1.2mg·mL－1的溶液各3份，分别进样测定。计算得平均回收率为99.93%，RSD＝0.78%（n＝9），结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.10 样品含量测定

取对照品溶液和供试品溶液分别进样测定，根据峰面积计算3批原料药中TBZ的含量分别为97.07%、97.21%和98.07%，RSD分别为1.38%、1.47%和1.39%（n＝3）。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取TBZ的甲醇溶液在200～600nm波长进行紫外扫描，结果显示，在280nm波长附近处有最大吸收峰，因此，检测波长确定为280nm。

3.2 流动相的选择

TBZ为酮类化合物，笔者曾选择乙腈-50mmol·L－1醋酸铵缓冲液（pH 4.50）体积比分别为a（30∶70）、b（50∶50）、c（70∶30）、d（80∶20）4种流动相，进样记录色谱图。结果显示以a、b为流动相时，色谱峰吸收很低；以c为流动相时，分离良好而保留时间偏长；而以d为流动相，分离效果优于c，以此确定为本试验所用流动相。

综上所述，该方法简便可靠，可用于TBZ原料药的含量测定。

[1] 杨久匣，张玉萍，张红苗，等.治疗舞蹈病药物——丁苯那嗪[J].中国药学杂志，2009，44（12）：959.

[2] Hayden MR，Leavitt BR，Yasothan U，et al.Tetrabenazine[J].Nat Rev Drug Discov，2009，8（1）：17.

[3] Liu CY，Chen ZP，Li XM，et al.A concise synthesis of tetrabenazine and its crystal structure[J].Mol Cryst&Liq Cryst，2012，557（1）：39.

Content Determination of Tetrabenazine Raw Material by HPLC

WANG Song-pei，LI Xiao-min，LIU Chun-yi，QIN Xiao-feng，CHEN Zheng-ping（Jiangsu Institute of Nuclear Medicine/Key Laboratory of Nuclear Medicine of Ministry of Health/Jiangsu Key Laboratory of Molecular Nuclear Medicine，Jiangsu Wuxi 214063，China）

OBJECTIVE：To determine the content of tetrabenazine raw material.METHODS：HPLC method was adopted.Lichrospher C18column was used with the mobile phase of acetonitrile-50mmol·L－1ammonium acetate buffer（pH＝4.50）（80∶20）at the flow rate of 0.8mL·min－1.The detection wavelength was set at 280nm.RESULTS：The linear range of tetrabenazine was 0.1～5.0mg·mL－1（r＝0.9991）with an average recovery of 99.93%（RSD＝0.78%）.CONCLUSIONS：The method is simple and reliable.It can be used for the content determination of tetrabenazine raw material.

Tetrabenazine；HPLC；Content determination

R927.2

A

1001-0408（2012）33-3125-02

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.33.20

Δ国家自然科学基金资助项目（30970844）；江苏省科技项目（BK2010155）

＊助理研究员。研究方向：放射性药物。电话：0510-85508782。E-mail：wangsongpei@jsinm.org

#通讯作者：副研究员，博士。研究方向：放射性药物。电话：0510-85514482。E-mail：chenzhengping@jsinm.org

2011-09-15

2012-03-16）