孔翠萍 柴 川 崔小兵
1.南京瑞尔医药有限公司,江苏 南京 210000;2.南京中医药大学,江苏 南京 210029
山药不同炮制品对小肠收缩及对消化酶活性的影响
孔翠萍1柴 川2崔小兵2
1.南京瑞尔医药有限公司,江苏 南京 210000;2.南京中医药大学,江苏 南京 210029
目的:观察山药的不同炮制品对家兔小肠收缩及其对唾液淀粉酶活性的影响。方法:通过离体回肠法观察山药不同炮制品对小肠收缩作用的影响。以紫外分光光度法观察山药的不同炮制品其对消化酶活性的影响。结果:麸炒山药对小肠收缩抑制作用最强,具有明显的抑制小肠收缩作用。山药不同炮制品对体外唾液淀粉酶活力的作用无显著变化。说明麸炒山药的健脾作用与唾液淀粉酶的活性无关。结论:麸炒山药对小肠的收缩有明显的抑制作用。
麸炒山药,小肠收缩抑制,消化酶活性
山药为薯蓣科多年生宿根蔓草植物山药 (Dioscorea opposita Thunb.)的块根,又名白苕、土薯、大薯、薯药,具有补脾、益肺、固肾、益精的作用,原名薯蓣,首见于《神农本草经》,列为上品。《本草纲目》云:“山药性温味甘平无毒、健脾胃、益肺肾、止泻痢,化痰涎,润皮毛”。山药的炮制方法有麸炒、清炒等,不同的炮制方法对山药的活性有显著影响。本文通过离体回肠及体外唾液淀粉酶的活性的测定,比较山药生品、山药麸炒品、山药清炒品的作用机制,为山药炮制提供了一个客观的评价方法,同时为山药焦香健脾理论提供实验依据。
依据中药炮制的相关理论,本实验将山药 (Rhizoma Dioscoreae)加工为净制山药、炒山药、麸炒山药三个品种。
炒山药 称取适量净制山药片,置烧热的平底锅中,用文火加热,炒至深黄色,有香气,取出放凉。
麸炒山药 称取适量麦麸,置烧热的平底锅中,炒至冒烟,放入净制山药片,不断翻炒,炒至深黄色,筛去麸皮,山药和麸皮各冷凉备用。每100kg药物,用麦麸10kg。
NaCl、 KCl、 NaH2PO4、 NaHCO3、 MgCl2、 CaCl2、NaOH、可溶性淀粉、Na2HPO、苯酸钾、KI、KIO3、HCl都是AR级。
山药水提液 净制山药,炒黄山药,麸炒山药各3g于烧杯中,加水 30ml,煮沸 0.5h,冷却,过滤,留取上清液。
大耳白家兔,清洁级,体重2.0-2.5 kg,2月龄,南京中医药大学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(沪)2007-0005。
多功能生理药理记录仪Power Lab,Power Lab/8s,澳大利亚AD仪器公司。水浴恒温振荡器,上海跃进医疗器械厂。754型紫外分光光度计,上海光谱仪器有限公司。
取禁食24h的家兔,以击毙法处死,立即常规剖腹。取出回肠,去除附着的系膜或脂肪等组织。迅速浸入在4℃充氧 的 台 氏 液[4](NaCl 8.00g,KCl 0.20g,NaH2PO40.05g,NaHCO31.00g,MgCl20.10g,CaCl20.20g,葡萄糖1.00g,定容至1L)溶液中。取回肠一段,悬挂于盛有台氏液的麦氏浴槽中,一端系在L型通气管上,加以固定,供给含有5%CO2的氧气,另一端固定在压力换能器上,基础张力1g,浴槽温度37.0℃,稳定1h。用Power lab进行描记。待自发性节律恢复后,描记基线,然后开始用药,记录张力均值,计算收缩百分率。
取50ml刻度试管数只,a、b、c、d。一只作对照管,其余作测定管。各管内加0.04%可溶性淀粉溶液 (可溶性淀粉 0.2g,加蒸馏水 5ml,摇成混悬液,称取无水Na2HPO413.3g,加蒸馏水250ml,煮沸后加入淀粉溶液,继续煮沸1min,冷却后加蒸馏水稀释至500ml)5ml。将测定管置于37℃水浴内预温5min。b及唾液淀粉酶溶液 (1∶1000)0.5ml混匀,c管加入待测样品液0.1ml混匀,再置于37℃水浴15min后取出;于各管中加入0.01mol/L碘应用液(碘酸钾3.56g及碘化钾45g,置于1L容量瓶中,加蒸馏水约800ml,缓缓加入浓盐酸9ml,摇匀,再加蒸馏水定容,使用时按1:10稀释,盛于棕色瓶中保存)5ml,并用蒸馏水稀释至50ml刻度;立即混匀,在570nm处进行比色测定,以PBS缓冲液 (NaH2PO4约8.0g,加生理盐水至1L,用10%NaOH调PH值至8.0)校正光密度到零点,读取各管光密度值。通过a管光密度值-b管光密度值计算酶的作用,通过-c管光密度值-d管光密度值比计算样品溶液干预下酶的作用,比较两次酶的作用效果,观察样品溶液对酶活性的响。
参照2.1方法对山药不同炮制品进行实验,实验结果见表1,柱状分析图见1。
表1 山药不同炮制品水提液对离体小肠收缩作用的影响 (±SD,n=5)
表1 山药不同炮制品水提液对离体小肠收缩作用的影响 (±SD,n=5)
注:*P<0.05。
组别 抑制收缩百分率 (%)1.1±0.9净制山药 1.47±0.29*炒黄山药 1.54±0.24*麸炒山药 1.8±1.1空白*
图1 山药不同炮制品水提液对离体小肠收缩作用的影响
实验结果显示:净制山药水提液、炒黄山药水提液、麸炒山药水提液对离体小肠有显著抑制收缩作用 (*P<0.05)。麸炒后麦麸中健脾作用的物质可能转移进入了山药。
参照2.2方法对山药不同炮制品进行实验,实验结果见表2。
表2 不同山药炮制品提取液对唾液淀粉酶活性的影响 ±SD,n=5)
表2 不同山药炮制品提取液对唾液淀粉酶活性的影响 ±SD,n=5)
组别 酶活力抑制百分率 (%)15±10麸炒山药 25±19炒黄山药 31±21净制山药空白48±38
本实验方案下,山药不同炮制品对体外唾液淀粉酶活力的促进作用无显著意义。说明麸炒山药的健脾作用与体外唾液淀粉酶的活性无关。可能受实验方法限制,是否有该方面功效仍待进一步实验验证。
通过紫外分光测光度法观察山药麸炒前后对消化酶的活性的影响,用离体回肠法观察其对小肠收缩作用的影响。结果提示山药经麸炒后可增强其健脾作用,其健脾作用增强可能与调节小肠收缩作用有关;山药不同炮制品对体外唾液淀粉酶活力的促进作用无显著影响,说明麸炒山药的健脾作用与体外唾液淀粉酶的活性无关。
[1]龚千锋.中药炮制学[M].北京:中国中医药出版社,2003:62.
[2]岳岭,华永庆,崔小兵,李伟.炒焦麦麸健脾有效部位初探[J].时珍国医国药,2011,22(2):388-389.
[3]李伟,文红梅,崔小兵,等.白术健脾有效成分研究[J].南京中医药大学学报,2006,22(6):366.
[4]徐叔云.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2002:1834,1311.
[5]岳岭,华永庆,崔小兵,李伟.不同炮制方法对麦麸健脾功效的影响[J].现代中药研究与实践,2010,24(3):41-44.
R965.2
A
1007-8517(2012)15-0062-02
南京中医药大学中药学一级学科开放课题资助,项目编号:2011ZYX2-004;南京中医药大学基础研究与重点培育专项基金资助,项目编号:10XJC07。
孔翠萍,女,主要从事药物制剂研究。E-mail:kcp116@126.com。
崔小兵 (1975-),男,江苏如皋人,博士,高级实验师,主要从事新药质量标准研究。E-mail:xiaobingcui@163.com。
2012.05.17)